Способ получения иммунной сыворотки

присоединением заявкиоордаратнонный номнтвтСоната Мннннтран СССРно делам нзобротоннйн открытий(43) но 25.10.77. Бюллете икования описания лико 5) Дата опубл Малкина, Р.Л. ПануриВ. Клеев исследовательский орден т эпидемиологии и микро вский ордена Ленина и о химико-технологический Научн инсти и Мос Знаме 7 вител(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ного объема раствора. Через 1 ч смесь снимают с магнитной мешалки и оставляют стоять 10 ч при комнатной температуре. Перед добавлением глутарового альдегида Устанавливают рН бел-. кового раствора 4,4, используя 1 М НСГ. Образовавшийся полимер раэмельчают в стеклянном гомогенизаторе Поттера или в ступке в 0,1 М фосфатном буфере рН 7,2-7,4, а затем центрифугируют и удаляют надосадочную жидкость, Далее повторяют растирание иммуносорбента последовательно в 0,1 М глицин- НСЕ буфере рН 2,0-3,0 в 0,1 М глицин - ЙаОН буфере рН 8,0 и 0,01 М фосфатном буфере, содержащем 0,15 М аС рН 7,6, После каждого растирания суспензию центрифугируют и надосадочную жидкость выбрасывают.Последним раствором промывают п имер до тех пор, пока надосадочн я жидкость будет содержать меньше чем 0,040 мкг белка/мл при анализе на спектрофотометре (при 280 нм).Приготовленный таким образом иммуносорбент хранят при 4 С в виде суспензии в 0,01 М фосфатном буфере, приготовленном на Физиологическом растворе рН 7,6. Перед употреблением иммуносорбент промывают свежим фик медиди агн остици н ола 72) Авторы К.Л. Шаханина, Л.изобретенияи Изобретение относитсяне, а именно к получению ческих препаратов.Известен способ получения имуной сыворотки, заключающийся в имму" ниэации животного иммуносорбентами, представляющими собой белково-целлюлозные комплексы 11Однако известный способ не обеспечивает получения высокоактивной иммунной сыворотки.С целью повышения активности сыворотки по предлагаемому способуиммунизацию проводят белком-поликонденсатом.Материалом для приготовлениясшитогоф антигена служит любой антиген белковой природы,Концентрация белка антигена(гамма-глобулины человека или живот ных, иммуйоглобулины б, М и А ) перед егосшивкойдолжна быть впределах 20-40 мг/л. фСшивку белкового антигена проводят в течение 1 чпри 37 С,К глобулину, помещенному намагнитную мешалку, постепенно добавляют 2,5 глутаровый альдегид в Физиологическом растворе. Объем глутаФрового альдегида 3/10 от первоначальТрудового Красного Знамен ологии им. Н,Ф.Гамалеи ена Трудового Красного нстит т им. И.Мен ел .в557527 Формула из о бр ет ени я Составитель С.МалютинаРедактор Л,Гончарова Техред С, Беца. Корректор С.ЯмаловаЗаказ 3389/7 Тираж 677 П одпи сн оеЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытий113035 Москва ЖРаушская наб. д, 45Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул, Проектная, 4 зиологическим раствором. Содержание белка в 1 мл суспенэии определяют по сухому весу. Для этого 1 мл взвеси высушивают при 104 С до постоянного веса. По разнице веса 1 мл раствора(в котором находится иммуносорбент) и веса сухого остатка после высушивания буфера судят о содержании белка в 1 мл иммуносорбента.Получение высокоактивной иммуи вой сыворотки проводят при использоЭании следующей схемы иммунизации.Пример 1. Иммунизация 10 кроликов сшитым:гамма-глобулином че" ловека. 151 день. Первая иммунизация 3 мгсшитогобелка в 2 мл физиологического раствора внутримышечно в область лимфоуэлов двух задних лап.15 день. Вторая иммунизация 5 мг сшитогоф белка в 2 мл физиологического раствора внутримышечно в область лимфоузлов двух задних лап.30 день. Третья иммунизация 8 мг сшитогоф белка в 2 мл физиологического раствора внутримышечно в обИ ласть лимфоузлов двух задних лап. 30 дней отдыха.1 реиммунизация - 1,2,3 день - 3,5,7 мг растворимого белка вмл физиологического раствора вводят внут ривенно, На 8-9 день кровопускание, затем 30 дней отдыха.П,П 1, и 1 Ч реиммунизации аналогичны 1.Получают антисыворотки от 8 кро 85 ликов с титром 1:32 и выше и от двух кроликов - 1:16 (после всех реиммуниэаций одинакового качества). Пример 2. Иммунизация 10 кроликовсшитымгамма-глобулином морской свинки.1 день. Первая иммунизация 5 мг фсшитого белка в 2 мл физиологического раствора внутримнаечно в область лимфоуэлов двух задних лап,15 день, Вторая иммунизация 10 мг сшитого белка внутримышечно в область лимфоуэлов двух задних лап,.Отдых 30 дней.1 реиммунизация - 1,2,3 день - 3,5, 7.мг раствора гамма-глобулина морской свинки внутривенно. На 8-9 дейь последней инъекции - кровопускание. Отдых 30 дней,11,И 1 и 1 Ч реиммуниэации как и 1 .Получают антисыворотки, одинаковые по качеству как после 1 реиммуниэации, так и последующих от 8 кроЛиков с титром 1:32,от одного кролиКа 1:16 и от одного кролика 1:8,Способ получения иммунной сыворотки путем иммунизации животных иммуносорбентом, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения активности сыворотки, иммунизацию про" водят белком-поликонденсатом. Источники информации, принятыево внимание при экспертизе:1,1." йан е ", 209, 1966,р.417.