Штамм в-1120-продуцент щелочной протеазы

од Я 9471 Сова Советских Сокиалистических Республик(23) Приоритет -51)М.Кл.е С 12 Р 13/10С 12 К 1/02 ударотвенный комите ета Министров СССРзный научно-исследовательскии институти селекции промышленных микроорганизмо 54) ШТАММПРОДУЦЕ Изобретение относится омышленности, в частности тному производству.Известей штамм Вас. зцЬИ 1 з МЙКХ продуцирующий щелочную протеазу в ко стве 4000 мг/экв тирозина в мин.Известен штамм Вас. зцЬИ 1 в ИККХ В 3751 - продуцент шелочной протеазы с акв ностью 4050 ед/мл.Однако для известных продуцентов щелочной протеазы характерен невысокий уровень биосинтеза фермента.Цель изобретения - получить новый штамм, обладающий высоким уровнем биосинтеза щелочной протеазы.Предлагаемый штамм Вас. зцЬИ 1 з Вп н в результате генетико-селеиционныхв из исходного штамма Вас. зцЬ 1111 з к пищевои к фермен 3411, личеолучеметодо 20 хранится в мумикроорганизмов ом ЦМПМ Вими признанами. ческие признаки, очка, подвижная 2 - 2,5 р Х 0,6 - О,8 р.1 - 1,5 р Х 0,6 - 0,9 ц. ри илкубации в теобразует колонии углой формы со альная сре При инкуба В. Штамм Вас. зцЬИ(з Взее культур, промышленных ВНИИгенетики под номер и характеризуется следующ Культурально-морфологи Грамположительная пал со жгутиками, размером Образует споры размером Мясо-:пептонный агар. П чение 48 час при 35 - 40 С диаметром 2,5 - 3,0 мм кр1.Ю 8 11 ВТ 11. В-ЕЛОЧНОЙ ПРОТЕАЗЫ слегка волнистым краем, желтовато-белого цвета. Поверхность гладкая, матовая.Посев штрихом на мясо-пептонном агаре.При инкубации в течение,24 час при 35 - 40 С5 рост хороший, край волнистый, поверхностьгладкая, матовая, просвечивается на свет, цвет светло-желтый, консистенция маслянистая.Посев уголком. Аэробная культура. Рост10 на поверхности, по длине укола рост отсутствует.Мясо-паптонный бульон, При инкубацпп втечение 24 час при 35 - 40 С без встряхивания наблюдается помутнение среды, на поверхности образует пленку; при встряхивании на качалке - сильное помутнение среды.При стоянии образуется осадок.Атаризованная среда Хоттингера. При инкубации в течение 24 час при 35 - 40 С образует колонии диаметром 3 мм круглой формы со слегка волнистым краем, желтовато-белого цвета. Поверхность гладкая, матовая.Агаризованная синтетическая среда Сп 1 ицайзеяа. При инкубации в течение 48 час при 35 - 4 ОС образует колонии диаметром 1,5 - 2,0 мм круглой формы с волнистым краем, серого цвета, Поверхность морщинистая, матовая.Жидкая,мини м да Спицайзена ЗО с 5 о глюкозы ции в течение0,5 0,5 7 балл. пивное суслоБульон Хоттингера 2, г/л: 80,0 8,0 4,0 12,0 1,5 0,5 0,1 7,2 - 7,3Ферм ентационная средаКрахмал осахаренныйКукурузный,экстр актДрожжи пивные(ХН 4) 2 НР 04КС 1Мд 804СасрН,среды Для засева посевной среды используют суспензию спор, приготовленную из двухсуточной культуры штамма ВНИИгенетика, выращенного на среде 1, Посевной материал выращивают в колбах Эрленмейера емкостью 250 мл на качалке (200 - 220 об(мин) в течевие суток при 37 С. Ферментационную среду ,засевают 2 - 4 посевного материала. Процесс ферментации проводят в колбах Эрлен- мейера емкостью 250 мл с 30 мл ферментационной среды на качалке (200 - 220 обlмин) в течение 56 час при 37 С, Через указанное время активность щелочной протеазы в куль 24 час при 35 - 40 С без встряхивания наблюдается слабое помутнение среды, рост на поверхности, при встряхивании на качалке - сильное помутнение среды. Через 48 час инкубации на качалке образует споры.На ломтиках картофеля. Рост обильный после инкубации в течение 24 час при 35 - 40 С, цвет культуры серовато-белый. Пигмент при росте на картофеле не образует,Биохимические свойства.Желатину р азжижает хорошопослойно.Молоко пептонизирует и подщелачивает.Клетчатку не разрушает и не усваивает.Нитраты в нитриты не восстанавливает.Кр а хм ал,гидр ол из ует.Усваивает глюкозу и глицерин.Не усваивает галактозу, арабинозу, фруктозу, лактозу, маннозу, ксилозу, мальтозу, сор бит.Проявляет антагонистические свойства в отношении Мсгососсцв 1 а цз.Штамм хранят в виде лиофильновысушенных культур, а также на агаризованной среде Хоттингера под вазелиновым маслом,рН действия щелочной протеазы 10 - 11, оптимальная температура 60 С. Количество щелочной протеазы в культуральной жидкости определяют методом Ансона - Мирского, в качестве субстрата иопользуют казепн, рН 10,5.П р и м е р. Для выращивания, посевного материала и процесса ферментации штамма Вас. з 11 Ы 11 з используют, питательные среды следующего состава:Среда 1 для выращивания посевного материала, ч: туральной жидкости составляет 8.000 -10.000 ед/мл.Формула изобретенияШтамм Васцз зцЫ 1 з 3-1120 - продуцент щелочной протеазы, который хранитсяв музее, культур, промышленных микроорганизмов ВНИИгенетики под номером ЦМПМВи характеризуется следующими признаками.Морфология. Грамположительная палочкаразмером 2 - 2,5 рХ 0,6 - 0,8 р, образует опорыразмером 1 - 1,5 р,Х 0,6 - 0,9 р.Культуральные признаки.Мясо-пептонный агар. При инкубациив течение 48 час образует колонии диаметром2,5 - 3 мм круглой формы со слегка во.тнистымкраем, желтовато-белого цвета, поверхностьгладкая, матовая,Рост при посеве штрихом хороший, крайволнистый, поверхность гладкая, матовая,просвечивается на свет, цвет светло-желтый,консистенция маслянистая.Агаризованная среда Хоттингера. При инкубации в течение 24 час образует колониидиаметром 3 мм круглой формы со слегкаволнистым краем, желтовато-белого цвета,.поверхность гладкая, матовая.Агаризованная синтетическая минимальная среда, При,инкубации в течение 48 часобразует колонии диаметром 1,5 - 2,0 ммкруглой формы с волнистым краем, серогоцвета. Поверхность морщинистая, матовая,Жидкая синтетическая минимальная сре 35да с добавлением 5 глюкозы, При инкубации в течение 48 час при встряхивании образует опоры.При росте в мясо-пептонном бульоне, а40 также в жидкой синтетической среде с глюкозой через 24 час инкубации без встряхивания образует пленку на поверхности, приаэрации - сильное помутнение.На,картофеле рост обильный, цвет куль 45 туры серовато-белый. Пигмент не образует.Оптимальный рост при 35 - 40 С.Биохимические свойства.Келатину разжижает хорошо, послойно.Молоко пвптонизирует и подщелачивает.Клетчатку не усваивает.Нитраты в нитриты не восстанавливает,Крахмал гидролизует.Усваивает глюкозу, глицерин, не усваиваетгалактозу, арабинозу, фруктозу, лактозу,маннозу, ксилозу, мальтозу, сорбит,Обладает антагонистическими свойствамиз отношении М 1 сгососсцз 1 ацз.Источники иноформации, принятые во внимание ври экспертизе:60 1. Патент Англии М 2 1287212, по кл. С 3 Н1972 г., (прототип).2. Л. Вво 1 есйпо 1 оду апс 1 В 1 оепрпеег 1 пд 12,1970, р 213.