Способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты

опиСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистицескихРеспублик(22) Заявлено 03.01.74 (21) 1981855/23-4 1) М, Кл. явки М 7 51/5 присоединением3) Приоритет3) Опубликован Государственный комитет Совета Министров СССР по делам иэаоретений и открытий(72) Авторы изобретеии Кална, А. М. Ирген и М, А, Гайлу 71)Заявитель Латвийский филиал Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени научно- исследовательско,института химических реактивов и особо чистых химических вешеств "ИРЕА"ЛЕИНОВОИ 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДЕЗОКСИРКИСЛОТЫ ретение относится к ус способу получения сое применяемых в биохими Изо анно муршествоения,генетиИзвестен способ получения дезоксири, бонуклеиновой кислоты (ДНК) иэ тканей внутренних органов животных путемэкстракции ДНК солевым раствором принагревании и инактивации нуклеаз добавленнием активированного естественного бен-,тонита в количестве 1 г на 1 л раствора.Бентонит удаляютцентрифугированиема белок отделяют многократной обработкойраствора хлороформа. Выход продукта 1,02,5 г на 1 кг исходного сырья,Известный способ имеет ряд недостатовв, основнымииз которых являютсятрудоемкость и длительность процессаактивации бентонита, многократная обработка раствора ДНК хлороформом и низгкий выход целевого продукта.Предлагаемый способ получения ДНКустраняет укаэанные недостатки и заключается в том, что ДНК экстрагируют солевыми растворами иэ ДНК-содержащегосырья с последующим высаливанием белка раствор депротеинизируют одновременной обработкой природным бентонитом с хлороформом при рН 6,0-7,0 в весовых соотношениях от 1:25 до 1:40. Целевой про.дукт выделяют известным способом. Выход 2,0-4,5 г из 1 кг исходного сырья.П р и м е р 1, В реактор емкостью75 л загружают 70 л ЗМ раствора хлористого натрия, содержащего 0,01 М цитрата натрия и эритроциты из 15 л куриной крови. Экстракцию ДНЛ проводят прио0-4 С и перемешивают в течение 0,5 часа. ьелок высаливают добавлением поваренной соли до полного насыщения раствора. ДНП осаждают путем разбавления насыщенного раствора в 20 раз питьевой водой . Осадок собирают и повторяют процесс высаливания. Полученный ДНП растворяют в 45 л 2 М хлористого натрия, содержащего цито рат натрия. К раствору при 15-20 С добавляют 0,45 кг размельченного естественного бентонита и интенсивно перемешивают в течение часа. Загружают 17 кг хлороформа и перемешивание продолжают496279 Составитель В.ЖесткоиРе актоедактор Н джарагеттиТехредКарандашова горректор А.Степанов а Заказ Ф т Изд.Щ) Тираж 529 Подписное Ц 1 ИГПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, 113035, Раушская наб., 4 11 релнрнятне 1 атеит, Москва, 1.511, Бережковская наб., 24"аеще час. Раствор центрифугируют и те-чение 40 мин при 2500 об/мин. ДНК выделяют из центрифугата осаждением этиловым спиртом;:Получают 33-38 г ДНК с содержанием 5основного вещества 90-94% и мол. вес.10-14 х 10П р и м е р 2. К 40 л раствораДНП в 2 М раствора хлористого натрия,полученного по 1 примеру, при комнатной 10температуре и интенсивном перемешивании добавляют 0,4 кг размельченногоестественного бентонита (заранее суспендированного в 1 л демин, воды) и перемешивают в течение часа. В реактор 15загружают 10 кг хлороформа и перемешивание продолжают еше час, после чегораствор центрифугируют при 2500 об/минв течение 30 мин. ДНК выделяют по примеру 1. 20Получают 30-34 г ДНК с содержани-ем основного вещества 89-91% и мол. в,10-12 х 10ЪП р и м е р 3. 1 кг размельченнойселезенки перемешивают с 4,0 л дистиллированной воды, добавляют 1,0 кг хлористого натрия и 0,4 кг цитрата натрия,Экст 1 закцию ДНП проводят при 65-70 С. и непрерывном перемешивании в течение0,5 час. Раствор охлаждают до 15-20 Сд бавляют 1,0 кг хлороформа, перемешио7вают в течение часа и центрифугируют30 мин при 2500 об/мин. Из центрифугата добавлением этанола осаждаютсырую ДНК. Осадок собирают, растворяют в 2,5 л 2 М раствора хлористого натрия, содержащего цитрат натрия,оК раствору при 15-20 С добавляют25 г размельченного естественного бентонита (заранее суспендированного в 30 мл демин. воды) и интенсивно перемешивают в течение 1 часа; Добавляют 1 кг хлороформа и перемешивание продолжают еше час. Массу центрифугируют 40 мин при 2500 об/мин. ДНК выделяют из центрифугата осаждением этиловым спиртом. Получают 3,5-4,0 г ДНК с содержанием основного вещества 82-85% и мол, в, 6-7 х 106.П р и м е р 4. Сырую ДНК, полученную, по примеру 3, растворяют в 2 л 2 М раствора хлористого натрия, содержащего цитрат натрия. При комнатной темпе- ратуре и интенсивном перемешивании добавляют 20 г размельченного естественного бентонита и перемешивают в течение часа, Добавляют 0,7 кг хлороформа и перемешивают еше час, после чего полученную массу центрифугируют в течение 30 мин при 2500 об/мин.ДНК выделяют из центрифугата по примеру 3. Получают 3,8-4,5 г ДНК с содержанием основного вещества 80-85% и мол. в. 5-7 х 106,Формула изобретения Способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты из ДНК-содержащего сырья солевой экстракцией с последующим высаливанием белка, депротеинизацией раствора природным бентонитом и хлороформом и выделением целевого продукта известным способом, о т л и ч а ю ш и й с я тем, что, с целью упрощения процесса и повышения выхода целевого продукта, депротеинизацию проводят одновременной обработкой природным неактивированным бептонитом и хлороформом при рН 6,0-7,0 в весовом соотношении от 1:25 до 1:40.1