Способ инактивации инфекциозности вирусов

О Л И С Аф"-И"И Е ИЗОБРЕТЕНИЯ ОсРоою,аи аатент;, - , .: -ч н Союз Советских Социалистических Республик(23) ПриоритетОпубликовано 05,11,75, Бюлл Государственный иомите Совета Министров СССР 3) УДК 615.372ь 4 по делам изобрете ткрыти ата опубликования описания 06.02.7ирусных энцефалитов АМН ССС(54) СПОСОБ ИНАКТИВАЦИИ ИНфЕКЦИОЗНОСТИ ВИРУСОВ Состав ПАМС и способ приготовления.Препарат аминометилольных соединений (ПАМС) получают при смешивании водных растворов 40%-ного формалина и лизина (в 0,1 М а-фосфатном буфере). Конечная концентрация формальдегида 0,166 М (рН раствора доводят до 6,8). Конечную концентрацию лизина, взятого в избытке, с целью связывания всего формальдегида, определяют константой равновесия реакции образования монометилольного производного и она равна 0,7 М. Готовый раствор двух ингредиентов содержит метилольное производное амина в концентрации, эквимолярной конечной концентрации СН,О 0,166 Ы, а также свободный амин (0,54 М). Свободный формальдегид в растворе отсутствует. При приготовлении ПАМС формалин разводят в 80 раз, а содержание метилольного производного амина в препарате эквимолярно исходному формалину, для сравнения результатов проводившихся испытаний ПАМС и формальдегида все разведения ПАМС делают с учетом исходного разведения 1: 80. Эта технология обеспечивает полную инактивацию инфекциозности вируса с сохранением иммуногенных и анти генных свойств.Препарат а мино метилольных соединений (ПАМС) применяют на двух моделях; для инактивации вируса клещевого энцефалита Изобретение относится к биологической промышленности и касается получения вирусныхпрепаратов.Известен способ инактивации инфекциозности вирусов путем воздействия на вирусную 5взвесь формалином в концентрации 1: 2000 втечение 72 час при температуре 32 С под защитой клеточного белка,Однако известный способ длителен и необеспечивает высокой иммуногенности препарата.С целью повышения иммуногенности препарата и сокращения длительности технологического процесса в качестве инактивирующегоагента используют продукт взаимодействия 15формальдегида с аминокислотой в конечнойконцентрации 1: 2000 в : 4000 в течение 47 -49 час.Способ осуществляют следующим образом,Для инактивации используют высокоочищенные инфекциозные сливы с зараженныхкультур ткани. Для этого культуральный инфекциозный слив сразу же подвергают обработке на сепараторе для удаления клеточногодетрита и ультрафильтрации через фильтры с 25диаметром пор 220 - 450 ммк.В фильтрат культурального вируса вводятпрепарат ПАМС в конечной концентрации1:4000. Инактивацию осуществляют при 31 -33 С в течение 47 - 49 час. 30490824 Предмет изобретения Составитель С. Малютина Редактор В. Смиригина Техред 3. Тараненко Корректор О. ТюринаЗаказ 30/8 Изд. Мз 65 Тираж 529 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж.35, Раушская наб;, д, 4/5,КЭ) выращенного в культуре ткани куриного змбриона и вируса крымской геморрагической лихорадки (КГЛ), размноженного в мозгу зараженных новорожденных белых мышей и одновременно для стабилизации их антигенов, Инактивацию вирусов проводят с целью изготовления иммуногенпых препаратов, создающих достаточно высокую иммунологическую резистентность у вакционированных белых мышей (против КЭ) или пригодных для иммунизации животных-доноров гипериммунных глобулинов (против КГЛ) или в качестве антигенов в реакции связывания комплемента.Под воздействием формалина в разведении 1: 2000 и препарата ПАМС в разведении 1:4000 при температуре 32 С в бесклеточной среде с одной серией вируса свидетельствуют о значительном превосходстве ПАМС. Титры вируса КЭ под воздействием ПАМС резко падают уже через б, 12, 18 час и полностью отсутствуют, начиная с 24 час после начала опыта, в то время как формалин не полностью инактивировал вирус КЭ даже через 48 час после начала опыта. Обе партии вируса; с формалином и с ПАМС выдерживают при 32 С в течение 72 час, затем используют для вакцинации белых мышей по стандартной методике. Испытание иммунологической резистентности двух групп вакцинированных мышей показало, что вакцина, приготовленная с ПАМС, обладает приемлемой иммуногенностью, ее индекс равен 4,0, вакцина, приготовленная с формалином имеет индекс 2,9 и не удовлетворяет требованиям официального стандарта иммуногенности. Инактивация двух серий вируса тремя разными разведениями ПАМС дает в пяти случаях из шести высокопммуногенпь.с вакцины, тогда как из двух серий вакцины с при менением формалина одна не соответствуеттребованиям стандарта.При инактивации препаратами формалинаи ПАМС вируса крымской геморрагической лихорадки, находившегося в 10 во взвеси моз га новорожденных белых мышей, при температуре 24 С, когда оба препарата представлены в разведении 1:4000 и 1:8000, скорость инактивации вируса с помощью ПАМС значительно больше, чем при обработке фор малином.Все опыты по инактивации как культурального вируса КЭ, так и в мозговой взвеси вируса КГЛ показывают значительные преимущества применения ПАМС по сравнению 20 с формалином. 25Способ ин актив ации инфекциозности вирусов путем обработки вируссодержащей жидкости инактивирующим агентом, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения 30 иммуногенности препарата и сокращениядлительности технологического процесса в качестве инактивирующего агента используют продукт взаимодействия формальдегида с аминокислотой в конечной концентрации 35 1: 2000 в : 4000 в течение 47 - 49 час.