Штамм вируса гриппа гкв n 2263, используемый для приготовления диагностических препаратов

(51)5 С 12 й 7/00 39/14 НИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ОП В ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯРИ ГКНТ СССР ТОРСКОМУ СВИДЕТ(71) Институт микробиологии и вирусологии АН КазССР(72) М.Х. Святое, Р.У. Бейсембаева, И.Л, Колыванова, Е.И. Исаева и Р.Б. Кайсарбекова (56) Беляков В,ДГоликов Д.Б. и др.Вестник АМН СССР, 1983, М 5, с. 23 - 28.Апп МсгоЫооду, 1975, 126 В, р. 461-470. (54) ШТАММ ВИРУСА ГРИППА ГКВ %2263, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ (57) Использование; медицина, вирусология, приготовление диагностических препаратов. Сущность изобретения: штамм Изобретение относится к вирусологии иможет быть использовано для получения диагн,стикума вируса гриппа.В последние годы вирусы гриппа всехсероподтипов, в том числе и А(НЗМ 2) характеризуются резко выраженной гетерогенностью, Нарастачие гетерогенности вирусов А(НЗИ 2) может предшествовать появлению нового антигенного варианта, В связи с этим прогностическое значение может иметь установление направленности процесса изменчивости антигенной структуры возбудителя, а таже оперативное выявление новых антигенных вариантов. Изоляты эпидемий 1990 г, В Казахской ССР относились к сероподтипу А(НЗИ 2) и в основном были близки международным референс - штаммам А(Сычуань) 2/78, А (Гуандонг) 39/89,Предлагаемый штамм А(Чимкент) 48/90представляет собой дрейфвариант протовцруса гриппа ГКВ %2263 А/Чимкент/48/90 представляет собой дрейф-вариант прототипного штамма А/Сычуань/2/87 (НН 32), Он хорошо репродуцируется в системе куриного эмбриона при 370 С в течение 48 ч до инфекционного титра 5 ед ЭИД 5 о/0,2 мл. Штамм хорошо агглютинирует эритроциты кур, в низких титрах эритроцитц морской свинки и белых крыс, практически не элюирует с куриных эритроцитов, слабопатогенен для белых мышей, обладает низкой генаагглютинирующей активностью и высокой иммуногенностью. Бйл выявлен оригинальный антигеннцй компонент, специфичный только для данного штамма, 5 табл. типного штамма А (Сычуань) 2/87. Штамм выделен из носоглоточного смыва больного человека на развивающихся куриных эмбрионах в январе 1990 г, во время эпидемической вспышки гриппа в городе г, Чимкентке (Казахская ССР) и хранится в коллекции Института вирусологии им. Д,И, Ивановского АМН СССР (депонент М 2263),Целью изобретения является получение штамма вируса гриппа А (Чимкент) 48/90 (НЗМ 2), обладающего специфической иммуногенностью, позволяющей испольэовать его для приготовления диагностических препаратов при идентификации вновь выделенных вирусов.Идентификацию гемагглютинина вновь выделенного штамма проводили согласно рекомендациям ВОЗ а реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с использованием набора иммунных сывороток к эталонным штаммам вирусов гриппа сероподтиповА(Н 1 М 1), А(Н 2 Я 2), А(НЗМ 2) и серотипа В, Идентификацию нейраминидазы осуществляли в реакции пассивной гемагглютинации (РОГА) с антительнйми эритроцитарными диагностикумами к рекомбинатным вирусам Р(Нер 182) и Р(НерЮ), Антигенную структуру гемагглютинина изучали в РТГА с набором поликлональных иммунных сывороток к эталоннйм штаммам вируса А(НЗМ 2). Дополйительно проводился тонкий иммунологический анализ изолята в РТГА с моноклональиыми антителами к вирусу А (Филиппины) 2/82 и моноспецифическими энтителами к отдельным антигенным детерминантам гемагглютинина подтипа НЗ, Результаты изучения антигенной структуры представлены в таблицах 1 - 5.В РТГА с поликлональными референссыворотками штамм А (Чимкент) 48/90 до 1/4 - 1/16 гомологичного титра взаимодействует с сыворотками к эталонам А (Филиппины) 2/82, А (Кен) 1/84, А (СССР) 2/85, А (Ленинград) 360/86, А (Виктория) 7/87, А (Сычуань) 2/87. Применение моноклонэльиых антител к вирусу группа А(Филиппины) 2/82 позволило выявить антигенное своеобразие нового штамма, Эпитопы его опознавались 6 из 13 использованных моноклональных антител.Использование в иммунологическом анализе моноспецифических (монорецепторных) антител к отдельным детерминантам гемагглютинина, полученных методом специфической иммуноэдсорбции. дало возможность получить в РТГА объективную оценку антигенной новизны гемагглютинина, В составе гемагглютинина вируса А (Чимкент) 48/90 имеются общие детерминанты с актуальным референс-штаммом А (Сычуань) 2/87 - Н 3.14, Н 3,16, и, что особенно важно, был выявлен качественно новый оригинальный антигенный компонент, характеризующий специфичность нашего штамма (штаммоспецифическая детерминанта). Эти данные подтверждены при иммуноадсорбционном анализе крысиной сыворотки к вирусу А(Чимкент) 48/90, которая реагировала с вирусом А (Сычуань) 2/87 до 1/4 гомологичного титра.Адаптационные свойства, Выделенный от человека вирус А (Чимкент) 48/90 репродуцируется в системе куриных эмбрионов при оптимальной температуре (37 С) до инфекционного титра 5 19 ЭИД 5 о/0,2 мл, Штамм обладает низкой гемагглютинирующей активностью(1;32-1:128) и высокой иммуиогеиной (титр в РТГА 1:640 - 1:1280).Свойство агглютииации, Вирус обладает узким спектром гемагглютинирующей ак 10 15 20 25 30 35 40 45 50 тивности. Он хорошо агглютинирует эритроциты кур (1:32-1;128), слабее - морских свинок (1:16-1:32); в низки титрах агглютинирует эритроциты белых мышей (1;4-1:8) и совершенно не взаимодействует с эритроцитами лошади, овцы, свиньи, крупного рогатого скота и белых мышей. Терморезистентность (Т 56-признак), Предлагаемый вирус обладает термостойким гемагглютинином, Гемагглютинирующая активность его сохранялась после прогревания при 56"С в течение 4 ч и утрачивалась при 62 С за 1 ч,Ингибиторочувствительность, Исследуемый штамм проявляет чувствительность к термолабилным / -ингибиторам сывороток белых мышей, кролика, овцы., крупного рогатого скотг, резистентен по отношению к сывораточнь 1 м ингибиторам лошади, мооских свинок, свиней, кур, белых крыс,Адсорбционно-элюирующая активность. Новый штамм обладает высокой адсорбирующей способностью по отношению к эритроцитам кур (90-95%) и практически не элюирует с эритроцитом.Штамм, выделенный от человека (А/Чимкент/48/90), предназначен для про. изводства гриппозного антигенэ, который может быть использован при серологической диагностике гриппа. С этой целью штамм размножают путем заражения 10 - 11 дневных куриных эмбрионов в аллантоисную полость,П р и м е р, Лабораторные животные - белые крысы. Схема иммунизации. Иммунные сыворотки получают в результате 4- кратной внутрибрюшинной иммунизации белых крыс вируссодеркащей аллантоисной жидкостью с недельным интервалом, Животных обескровливают через 10 дней последней иммунизации. Иммунную сыворотку освобождают от неспецифических ингибиторов обработкой отечественным препаратом нейраминидазы нехолерного вибриона.Титр иммунной сыворотки предлагаемого препарата в РТГА с гомологичиым антигеном составляет (1:640) - (1:1280), с гетерологичными антигенами вируса гриппа человека реакция отрицательна,Таким образом, предлагаемый штамм вируса гриппа А (Чимкент) 48/90 сероподтипа А(НЗК 2), изолированный от человека, и приготовленные на его основе диагностические препараты должны найти применение в вирусологической практике при идентификации вновь выделенных штаммов вируса гриппа и изучении лолуля1756353 Ф ормула из об рете ни я ционного иммунитета населения с целью надзора за распространением вируса гриппа в природе и процессом антигенной изменчивости возбудителей гриппозной инфекции. Штамм вируса гриппа А(НЗМ 2 ГКВМ 2263, используемый для приготовления 5 диагностических препаратов. Таблица 1 Исследование антигенной структуры гемагглютинина штамма вируса гриппа А(Чимкент) 48/90 в РТГАгом Н Н Н Н 2 НЗ 202020 НЗ НЗ НЗ НЗ НЗ НЗ НЗ ь и в последующих таблицах титры даны в обратных величина мечани аблица Анализ в РТГА иммунной сыворотки к штамму вируса гриппа А(Чимкент) 4 А(свинья/Айова) 15/30А(РВ ) 8/34А(СССР ) 090/77А(Сингапур ) 57А(Гонконг ) 1/68А(Порт - Чалмерс ) 1/73А(Виктория ) 3/75А(Техас) 1/77А(Филиппины) 2/82А(Кен ) 1/84А(СССР ) 2/85А(Ленинград) 360/86А(Виктория )7/87А(Сычуань ) 2/878(Сингапур) 222/79 1280 2560 2560 2560 1280 640 1280 1280 1280 1280 640 ао 80 80 160 160 160 320 201756;)53 Таблица 3 Исследование антигенной структуры нейраминидазы штамма вируса гриппа А(Чимкент) 48/90 в РПГА с антительными эритроцитами диагностикумамиТаблица 4 Изучение антигенных взаимосвязей штамма вируса гриппа А)Чимкент) 48/90 с моноклональными антителамиблица 5 Исследование состава антигенных детещтамма вируса гриппа А (Чимкент)специфической иммуноадсо инант гемагглютин/90 методомции Титр с РТГА с монсс к антигеннын де 0)тамм вируса цифическими антителарминантам 1 О 13 после истощения виру"сом А(Сычуань)2/87 А 1 Гоннонг) С/6 2560 2 20 2 О 2 А(техас) 1/77А(филиппины) 2 1280с 20 с 20 2 ыч у ам ь ) 2/8 инкент) 48 г 20 с 20 20 Антигенныедетерминантыв цифровомобоэначении