Способ получения 21-ацетата ацетонида -фторпрегнен-4-тетрол 11, 16, 17, 21-диона-3, 20

448244 ОП ИСАНИ Е ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 29. с присоединением заявки-Гооударственныи комет Совета Мннкстров ССС по делам изобретений и открытийЛата опубликован писания 04,0 2) Авторы нзооретення ва, Г. А. Клубничкика, Т В. М. Рыж Всесоюзнь(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 21.-ФТОРП РЕГН ЕН-ТЕТРОЛцовном, 0,1 - 0,3 г/л, что ведет к повышенным расходным коэффициентам сырья. Кроме того, во всех указанных случаях использовались культуры микроорганизмов, не применя емые в СССР.С целью упрощения процесса предлагаютиспользовать отечественный штамм культуры АЬз 1 йа огсЫйз (Т 1 едЬегпе 1 а огсЫйз).Предлагаемый способ получения 21-ацета та ацетонида б-а-фторпрегнен-тетролр,16 и,7 а, 21-диона,20 заключается в том, что ацетонид би-фторпрегцец-триола, 17 а, 21-диона,20 подвегают микробиологическому превращению с помощью отечественно го штамма культуры АЬяйа огсЫйз (ТедЬегпе 1 а огсЫйз) и полученный при этом ацетонид би-фторпрегнен-тетролр, 16 а, 17 и, 21-диона,20 ацетилируют по 21-положению.По предлагаемому способу трансформиру,я ющую культуру выращивают на среде, содер.жащей углеводы, органические источники азота и соли фосфора н к выросшему мнцелию добавляют 5 О/о-ный раствор стеронда в диметнлформамиде нз расчета конечной концен трации 05 г/лДобавление стеронда осуществляют дрооцо таким образом, чтобы исключить выпадение стероида в кристаллической форме, что обеспечивает полноту трансформации, Время ЗО подачи стероида рассчитывают на основе пред 1Изобретение относится к области усовершенствования способа получения 21-ацетата ацетопида бк-фторпрегнен-тетролр, 16 а, 17 к, 21-диона,20, являющегося промежуточным продуктом в синтезе высокоактивных кортикостероидов.Известен способ получения 21-ацетата ацетонида ба-фторпрегнен-тетрол.11 р, 16 а, 17 и, 21-диона,20, заключающийся в том, что ацетонид ба-фторпрегнен-триола, 17 а, 21 диона,20 подвегают микробиологическому гидроксилированию с помощью культуры Сцпппдтагпе 11 а Ьа 1 езесапа и полученный нри этом ацетонид би-фторпрегнен-тетрол, 1 ба, 17 а, 21-диона,20 ацетилируют по 21-положению. Используемая нагрузка исходного стероида 0,1 г/л,Известны также способы получения ацетонида ба-фторпрегнен-тетролр, 16 к, 17 и, 21-диона,20 путем микробиологического 11 р-гидроксилирования ацетонида бсс-фторпрегцеп-триолби, 17 к, 21 диона,20 с помощью культур Сцпп 1 пдЬагпе 11 а Ьа 1 пеп и Сцгчц 1 апа 1 цпаа с последующим ацетилнрованием.Однако в этих способах или не указан выход целевого продукта, или це приведены показатели качества продукта, что не позволяет сделать определенные выводы об эффективности того или иного способа. Используемая нагрузка исходного стероида низка, в осЦЕТАТА АЦЕТОНИДА6 и, 17 а, 21-ДИОНА,20Корректор М. Лейзерман Редактор Т. Никольская Заказ 1095 Изд. Мз 1819 Тираж 529 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5МОТ, Загорский филиал 3варительного изучения скрости реакции гидроксилирования и растворимости стероида вусловиях проведения опыта.По окончании реакции культур альнуюжидкость экстрагируют не смешивающимся сводой растворителем, растворитель упаривают и образующийся ацетонид бо,-фторпрегнен-тетролр, 16 сс, 17 и, 21-диона,20 ацетилируют по 21-положению и целевой продуктвыделяют.Выход целевого продукта по предлагаемому способу составляет 75 - 80%,Пример.Культуру гриба Т 1 ед 11 егпе 11 а огсп 1 йз выращивают на скошенном сусло-агаре в пробирках в течение 2 - 3 недель при 26 - 28 С, Споры гриба смывают с поверхности агара 5 млфизиологического раствора и споровую суспензию в количестве 1 мл вносят в 100 млстерильной среды следующего состава:Глюкоза, г 30Кукурузный экстракт (сухой вес), г 5Пептон, г 3Дрожжевой автолизат, г 3КНзР 04 г 5Вода водопроводная, млрН 6,8 - 7,2, 1000Первый инокулят выращивания в коническихколбах емкостью 0,75 л на круговой качалкепри 220 об/мин при 26 - 28 С. Через сутки содержимое четырех колб (400 мл) переносятв 4 л среды того же состава, Выращиваниетрансформирующей культуры осуществляютв стеклянном ферментере (рабочая емкость6 л); подача воздуха 0,5 л/л/мин, число оборотов мешалки в 1 мин 400, температура28"С. Через сутки роста вносят первую порцию ацетонида 6 м-фторпрегнен-триола,17 а, 21-диона,20 в количестве 0,5 г в 100 млдиметилформамида; вторую порцию стероида 4в количестве 1 г в 20 мл диметилформамида вносят через 5 час после первой; через 8 час после второй вносят третью порцию стероида - 0,5 г в 10 мл диметилформамида.5 Трансформацию проводят при том же ре.жиме, что и выращивание культуры.Продолжительность процесса составляет20 - 27 час и контролируется методом хроматографии на пластинках Ыц 1 о 1. При содер О жании исходного стероида не более 5% опытзаканчивают, культур аль ную жидкость отфильтровывают от мицелия и экстрагируют 4 л хлористого метилена, Экстракт промывают водой, сушат безводным сульфатом нат рия, растворитель упаривают в вакууме. Остаток ацетилируют 7 мл уксусного ангидрида, 0,87 г ацетата бария и 15 мл уксусной кислоты. Реакционную массу оставляют на ночь при комнатной температуре, затем выливают 20 в 150 мл воды.После перекристаллизации из хлористогометилена и метанола получают 1,68 г 21-ацетата ацетонида ба-фторпрегнен-тетролр, 16 а, 17 и, 21-диона,20; т. кип. 267 в 2 С;25 1 а 1 т +132 (СНС 1 з); 1 од в 4,17; Л , 236 -238 мм), что мало отличается от литературных данных (т. пл. 261 - 263 С; 1 а 1 о+ 135 (СНС 1 з); 1 одв 4,18; Л , 236 - 238 мм). Способ получения 21-ацетата ацетонида6 а-фторпрегпен-тетролР, 16 к, 17 к, 21-диона,20 путем микробиологического превра щения ацетопида бсср-фторпрегнен-триоли,17 а, 21-диона,20 с последующим ацетилированием, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве микроорганизма используют штамм культуры АЬ 81 йа огс 111 с 11 з.