Способ получения 4-андростен-3, 17-диона или 1, 4 андростадиен-3, 17-диона

(72) Альфред Вебер, Марио Кеннеке иЙоханнес Курцидим (ОЕ)(57) Изобретение относится к биотехнологии и может найти применение в промышленном масштабе для синтеза Изобретение относится к биотехнологии и может найти применение в промышленном масштабе для синтеза фармакологически эффективных стероидов,В соответствии с изобретением трансформацию проводят с применением культур микроорганизмов, которые применяют обычным способом для разложения боковых цепей стеринов. Пригодными культурами являются, например, бактериальные культуры, способные к разложению боковых цепей стеринов.Особенно предпочтительны в качестве микроорганизмов МусоЬас 1 егцгп зрес 1 ез,Я 2 1679977 А 5)5 С 12 Р 33/16//(С 12 Р 33 С 12 й 1,32) ф армакологически эффективных стероидов,Способ включает трансформацию а-ситостерина штаммами МусоЬастегцп эресеэ Ийй В, МусоЬастег 1 цп эрес 1 еэ ййй В, МусоЬастег 1 цв рЫе 1 Ййй Вили МусоЬасйег 1 ца 1 опц 1 сцп чйй 1 Вдо достижения максимальной конверсии субстрата. Используемые для трансформации микроорганизмы обеспечивают разложение боковых цепей стеринов, Процесс осуществляют без применения дополнительных ингибиторов, замедляющих 9 а-оксилирование. После трансформации культуры экстрагируют, концентрируют, подвергают хроматографической очистке с последующей перекристаллизацией целевого продукта. Непревращенный в процес- Б се а-систостерин рекуперируют,ййй В - 3805, МусоЬастег 1 цщ эрес 1 еэ чйй 1 В, МусоЬастег 1 ца рЫе 1 Мйй Ви МусоЬас 1 ег 1 цщ 1 огтц 1 тцп ййй 1. В, с помощью которых разложение а -ситостерина может быть осуществлено без применения дополнительных ингибиторов, замедляющих 9 а -оксилирование.При культуральных условиях, обычно применяемых для этих микроорганизмов, выращивают в пригодной питательной среде при аэрации погруженные культуры, Затем к культурам добавляют субстрат а -ситостерин (растворенный в пригодном растворителе или, предпочтительно, в виде эмульсии) и подвергают ферментации до до 1679977стижения максимальной конверсии субстрата,Пригодными растворителями для субстрата являются, например, метанол, этан ол, монометиловый эфир гликоля, 5диметилформамид или диметилсульфоксид, Можно, например, осуществитьэмульгирование субстрата, при этом последний в тонкоизмельченном виде или всмешивающемся с водой растворителе 10(например, метаноле, этаноле, ацетоне,монометиловом эфире гликоля, диметилформамиде или диметилсульфоксиде) растворяют при энергичном перемешивании вводе (предпочтительно не содержащей 15солей кальция), содержащей обычныеэмульгирующие агенты. Пригодными эмульгирующими агентами являются неионогенные эмульгаторы, например, аддуктыэтиленоксида или сложные эфиры жирных 20кислот и полигликолена. В качестве примера пригодных эмульгаторов можно назватьимеющиеся в продаже смачиваюцие агенты: тгин (Те 91 п ),.твин (Твееп") и спан(Ярап ). 25Оптимальные концентрации субстрата,продолжительность добавления субстрата ипродолжительность ферментации зависятот структуры применяемого субстрата и вида применяемого микроорганизма. Значения этих величин, как это вообщенеобходимо делать при микробиологической конверсии стероидов, следует определять в каждом конкретном случае путемпроведения предварительных опытов, как 35известно специалистам в данной области.Производные 4-андростен,17-диона,которые могут быть получены по предлагаемому способу являются известными ценными промышленными продуктами, которые в 40настоящее время применяются в промышленном масштабе для синтеза фармакологически эффективных стероидов.П р и м е р 1, Двухлитровую эрленмейеровскую колбу с 500 мл стерильной питательной среды с рН, 6,7 содержащей,;:Дрожжевой экстракт 1Двунатриевый гидрофосфат 0,45Калиевый дигидрофосфат0,34Твин - 80 0,2 50заражают суспензией МусоЬастег 1 отзресез ЙВВ 1. В - 3805 и в течение трех днейвстряхивают при 30 С при 190 об/мин.Десять эрленмейеровских колб (емкостью 500 мл) со 100 мл стерильной питательной среды с рН 7,0 содержащей, 7,;Экстракт кукурузной замочки 2,5Диаммониевый гидрофосфат 0,3Соевая мука 0,25Формула изобретения Способ получения 4-андростен,17-диона или .1,4-андростадиен,17-диона общей формулыО в которойобозначает простую или двойную связь, предусматривающий трансформацию соответствующего субстрата-стероида культурой микроорганизма, способного к расщеплению боковой цепи замещенных в 17 положении алкилом с последующим выделением и очисткой целевого продукта хроматографией, о т л ич а ю щи йс я тем, что, в качестве субстрата используют а-ситостерин формулы,На трансформацию асМусоЬас 1 ег 1 це зМусоЬас 1 ег 1 ое зМусоЬас 1 ег це рили Мусоьас 1 ег 1 цве ЙЙЙ 1 ществляют есез ЙЙВ. ес 1 ез ййй 1.1 е 1 МВЯ 1.е 1 оа 1 аммами В, В, В8153 Твинф 80 0,25 заражают 5 мл посевной культуры МусоЬассег 10 е зрес 1 ез 1 чйй. Ви в течение 24 ч встряхивают при 30 С при 230 об/мин, Эатем в каждую колбу с культурой добавляют 100 мга -ситостерина; растворенного в З,О мл диметилформамида, и подвергают дальйейшей ферментации в течение 96 ч при ЗО С.Соединенные культуры экстрагируют этиленхлоридом, экстракт концентрируют в вакууме, остаток очищают методом хоматографии в колонке над силикагелем и получают после перекристаллизации из диизопропилового эфира 16 мг 4-андростен,17-диона с Тпл 171 - 173 С,Наряду с этим рекуперируют 385 мг непревращенногоа-ситостерина.П р и м е р 2, При условиях, описанных в примере 1, но с применением МусоЬастег 1 от зрес 1 ез ЙВЙ Вполучают в целом 1000 мг конвертированного а -ситостерина, обрабатывают его и получают кроме 630 мг непревращенного а-ситостерина, 140 мл 1,4-андростадиен,17-диона с Тпл 139-141 С.