Способ получения пироглутамил-серил-глицинамида

.Г1.ОП ИСАЙ ЙЕИЗОБРЕТЕНИЯ пц 469687 Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 27.07,73 (21) 1939296/23-1) М, Кл, С 07 с 103/52 с присоединением заявкисенный комитет ннистроо СССР Госуда Совета(088.8) изобретений по дела итиры Дата опубликования описания(71) Заявитель 1. А, 1 Одаев, 3. Ф. Утешева, Ю, П. Ювачкиц и А. П, Смирнова Институт экспериментальной эндокринологии и химии гормонов АМН СССРПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПИРОГЛУТАМИЛСЕРИЛГЛ И ЦИ НАМ ИДА ги мокцо провод цзвестцх реа ь при ентов, 30 Изобретение относится к способу цолучецц 5путем полного химического синтеза пептцда,являющегося стимулятором освобождения ростового гормона, представляющего собой пироглутамил-серил-глицицамид, который может найти применение в медицине.Указанный пептид может быть выделен изгипоталамуса животных,Предлагаемый способ получения пцроглутамил-серил-глицинамида основан на извест Оных в химии пептидов методах с использованием доступных производцых глцццна, серина, глутамина или глутаминовой кислоты илипироглутаминовой кислоты.Способ заключается в том, что известным 15методом, например карбодиимидным, конденсируют в любой возможной последовательности в растворе или гетерогенной смеси соответственно защигценные или незащищенныепо аминогруппе, карбоксилу и функциоцальным группам производные аминокислот: глицина, серина, глутамина, глутаминовой илипироглутаминовой кислоты, причем в любоймомент синтеза амидируют остаток глицинаи образуют остаток пироглутаминовой кислоты с последующим удалением защитнь 1 х группи выделением целевого продукта известнымиметодами,Реакцию коцденсацгитиспользовании любыхг ооеспечцвающих ооразовацце петцдцых связей, например различных карбодицмидов, активированцых эфиров, азцдов и смешанных а;ццдридов.Обычно синтез ведут с применением нерастворимого цли растворимого полимерного носителя. Все аминокислоты, кроме глицица, имеют 1.-конфигурацию.П р и м е р. Синтез пцроглутамцл-серил-глццинамида.В круглодоццую колбу, снабженную обратным холодцлыиком, вносят 20 г хлорметилированного сополимера стцрола с 17 О дцвинилбензола (содержа це хлора 7%), прибавляют 150 мл безводного этанола, б,5 г трет-бутилоксикарбонилглиццна ц 7,5 мл безводного триэтцламица. Реакционную смесь нагревают прц температуре кипения 48 час, поддерживая рН 7,0 - 7,5. Затем твердую фазу отделяют фильтрованием, вещество промывают ца фильтре безводцым этанолом (3 Р,100 мл), хлористым метцлецом (3 К 150 мл), метано(3 К 150 мл), дцэтцловым эфиром (1150 мл), петролейцым эфиром (1 ; 50 мл) и высушавают в вакуум-эксикаторе над пятиокцсыо фосфора в течение 30 мин. Сухое вещество помещают в реактор, прибавляют к нему 200 мл 10,о-ного раствора хлористого водорода в сухом диоксане и смесь выдерживают 30 мцн при 20 С (стадия де469687 5 10 15 20 25 30 35 45 50 55 60 Заказ 1823/5 Подписное Изд.668 Тираж 529 Типография, пр. Сапунова, 2 блокирования). Далее смесь фильтруют, вещество в реакторе промывают последовательно сухим диоксаном (3 Р,200 мл), метанолом (3 К 200 мл), диэтиловым эфиром (3 Х 200 мл), петролейным эфиром (3 Х Х 200 мл) и высушивают 30 мин в вакууме. После этого к веществу приливают 20 мл 3%-ного раствора триэтиламина в диоксане, смесь выдерживают 10 мин при 20 С (стадия нейтрализации) и фильтруют.Вещество в реакторе промывают последовательно хлористым метиленом (3;х,200 мл), метанолом (3 )(200 мл), диэтиловым эфиром (3 к, 200 мл), петролейным эфиром (ЗХ 200 мл), после чего высушивают в вакууме в присутствии пятиокиси фосфора в течение 30 мин. Затем при 0 С приливают раствор 8,6 г трет.-бутилоксикарбонил-О-бензилсерина в 150 мл хлористого метилена, смесь выдерживают 10 мин и прибавляют к ней предварительно охлажденный раствор 6 г дициклогексилкарбодиимида в 50 мл хлористого метилена, После перемешивания смесь выдерживают 18 час при 20 С, затем фильтруют, промывают вещество в реакторе смесью хлороформ-метанол (2: 1) (3 (200 мл), метанолом (3 ( 200 мл), диэтиловым эфиром (3 К 200 мл) и петролейным эфиром (3200 мл), после чего проводят описанные выше стадии деблокирования и нейтрализации. Далее прибавляют при 0 С раствор 10,4 г п-нитрофенилового эфира трет.-бутилоксикарбонилглутамина в 220 мл безводного диметилформамида, смесь выдерживают 24 час при 20 С, фильтруют и последовательно промывают диметилформамидом (5 К 250 мл), метанолом (3 К 200 мл), диэтиловым эфиром (3 Х 200 мл), петролейным эфиром (Зр,200 мл), после чего проводят стадии деблокирования и нейтрализации, как описано выше, К полученному веществу приливают 250 мл насыщенного при 0 С раствор аммиака в безводном метаноле и смесь выдерживают 48 час при 5 С, после чего нерастворившееся вещество отфильтровывают, промывают безводным метанолом (3(200 мл), промывную жидкость присоединяют к основному фильтрату и объединенный раствор упаривают в вакууме.Остаток растворяют в 40 мл метанола и полученный раствор выливают в 500 мл сухого эфира. Выпавшее в осадок вещество отделяют и высушивают в вакууме, Затем 1 г полученного вещества растворяют в 100 мн метанола и уксусной кислоты (1: 1), к образовавшемуся раствору прибавляют 200 мг свежеприготовленной палладиевой черни и смесь гидрируют 2 час при 20 С и атмосферном давлении. Далее палладиевый катализатор отфильтровывают, раствор упаривают в вакууме и от остатка трижды отгоняют порции метанола (50 мл) для удаления следов уксусной кислоты, После этого остаток растворяют в 40 мл метанола и раствор приливают к 400 мл эфира. Выпавшее в осадок вещество отделяют, высушивают и растворяют в 50 мл воды,Полученный раствор кипятят 10 час в колбе с обратным холодильником, а затем упаривают. Следы воды отделяют азеотронной отгонкой с этанолом, остаток обрабатывают кипящим этилацетатом (50 мл К 2), растворяют в 40 мл метанола и раствор приливают к 400 мл безводного диэтилового эфира, Выделившееся в осадок вещество отфильтровывают, промывают и высушивают. Полученное вещество подвергают противоточному распределению в системе н.-бутанол - уксусная кислота - вода (4: 1: 5) (500 переносов, К, 0.16), Затем 220 мг образовавшегося вещества растворяют в 2 мл воды и водный раствор пропускают через колонку (30 (2 см) с ионообменной смолой Дауэкс 50 р,8 (Н+- форма), собирая фракции по 10 мл. Фракции 5 и 6 объединяют, упаривают в вакууме, остаток растворяют в 20 мл метанола и высушивают прибавлением к 200 мл эфира. Получают 165 мг (73%) индивидуального пироглутамил-серил-глицинамида (РФРГ), Я 1 0,26 (н.-бутанол в уксусн кислота в во, 4:1: 5); К 1 0,51 (н.-бутанол в пиридин в уксусная кислота в во, 15: 10: 3: 12) (БХ); К 1 0,38 (вт.-бутанол в муравьин кислота в во, 75: 13,5: 11,5), 0,60 (н.-бутанол - пиридин - уксусная кислота в во, 15; 10: 3: 12), 0,43 (н,-бутанол в уксусн кислота в во, 4; 1;1) (ТСХ), Электрофоретическая подвижность - 0,2 (система пиридин - уксусная кислота - вода, рН 6,5, стандарт отнесения гистидин); о - 34 (с 1,0, вода); а о - 23 (с 1,0, уксусная кислота). Аминокислотный анализ: Гли 1,0; Сер 0,82; Глу 1,0,Предмет изобретения 1, Способ получения пироглутамилсерил. глицинамида, о т л и ч а ю щи й с я тем, что конденсируют в любой возможной последовательности в растворе или гетерогенной смеси соответственно защищенные или незащищенные по аминогруппе, карбоксилу и функциональные группам производные аминокислот; глицина, серииа, глутамина, глутаминовой или пироглутаминовой кислоты любым известным методом, например карбодиимидным, причем в любой момент синтеза амидируют остаток глицина и образуют остаток пироглутаминовой кислоты с последующим удалением защитных групп и выделением целевого продукта известными методами.2. Способ по п. 1, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что процесс ведут с использованием нерастворимого или растворимого полимерного носителя.3. Способ по пп. 1 и 2, отл и ч а ю щи й ся тем, что в качестве конденсирующего агента используют симметрично или несимметрично Х,К-дизамещенные карбодиимиды.