306121

Союз Советских Социалистических РеспубликЗависимое от авт. свидетельства69 ( 1391053/23-4) аявлено 29.Х соединением заявкириорит Комитет по делам изобретений и открытий,71.19 ри Совете МиниСССР ата опубликования описания 2.Л 11.197 вторыобретенияаявитель К. Н. Габинская, В. ф. Шнер, В, М, Рыжкова и Н. Н. Суворов Всесоюзный научно-исследовательский химико-фармацевтический институт имени Серго ОрджоникидзеОЛУЧ ЕН ИЯ 11 а-ОКСИа-МЕТИЛ ПРО ГЕС А ПО Изобретение относится к способам получеНия полупродуктов, которые используются в медицинской промышленности для синтез а высокоактивных 16 а-метилкортикостероидов.Известен способ получения 11 а-оксиа-метилпрогестерона путем гидроксилирования 16 а-метилпрогестерона грибом КЫгорцз п 1 ог 1- сапз АТССВ при использовании питательной среды, содержащей кукурузный экстракт и глюкозу. Недостатком такого способа является применение кукурузного экстракта, имеющего сложный и нестандартный состав, что приводит к колеблющимся выходам целевого продукта и затрудняет выделение трансформированных стероидов.С целью устранения указанных недостатков предложено процесс осуществлять при помощи отечественного штамма КЫгорцз п 1 дг 1 сапз ВНИХФИна синтетической среде, состоящей из источника углерода, например глюкозы, лимонной, яблочной, фумаровой кислот, источника азота, например аммония азотно- кислого, янтарнокислого, фосфорнокислого, калия фосфорнокислого и магния сернокпслого, и целевой продукт выделяют известными приемами с выходом 80%.П р и м е р 1. Культуру КЫгорцз п 1 рт 1 сапз ВНИХФИподдерживают на сусло-агаре. В колбы на 250 мл со 100 мл среды следующего состава (в %): глюкоза 1, аммоний азотнокислый 0,17, калий фосфорнокислый одно- замещенный 0,3, магний сернокислый 0,1, рН 5,0 вносят 2 мл водной суспензии спор. Выращивание мицелия и стадию трансформации 5 проводят на качалке при 28 С и интенсивности аэрации 0,2 г Ол(час. Через 24 час мицелпй отфильтровывают от среды, промывают водой и переносят в 0,5 сс-ный раствор глюкозы (рН 5,0). Затем вносят 40 ттг 16 а-метил прогестерона, растворенного в 1 ял ацетона.Опыт снимают через 48ас ферментацип. Определение 11 а-оксиа-метилпрогестерона проводят методом хроматографии на бумаге.Стероиды дважды экстрагпруют из 10 лт,г 15 культуральной жидкости 20 ял хлороформа.Экстракт концентрируют и разгоняют в си.стеме гептан-метанол-этилацетат-вода (2,5: :2,5:4;1), Количественное определение проводят спектрофотометрически на СФ. Выход 20 11 а-оксиа-метплпрогестерона 40 Я 25%исходного 16 а-метплпрогестерона остается пепрореагировавшпм в виде кристаллов на дне колбы, 15",с исходного стероида превращается в диоксисоединенпе и 20 исходного стеро ида находится в растворенном виде в культуральной жидкости.П р и м е р 2. 40 яг 16 а-метилпрогестеронарастворяют в 2 лл ацетона при прочих условиях таких же, как в примере 1, Выход 50 11 а-оксиа-метилпрогестерона 71%.306121 Предмет изобретения Составитель Л. Голубовская Редактор 3. Н. Горбунова Техред А. А. Камышникова Корректор Н. РождественскаяЗаказ 2159/15 Изд. гЧз 886 Тираж 473 Подписное ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, Ж, Раушская наб., д. 45Типография, пр. Сапунова, 2 П р и м е р 3. 40 лгг 16 а-метилпрогестеронарастворяют в 3 лгл ацетона при прочих условиях таких же, как в примере 1, Выход11 а-оксиба-метилпрогестерона 76 о/о.П р и м е р 4. 40 мг 16 а-метилпрогестеронарастворяют в 5 мл ацетона при прочих условиях таких же, как в примере 1. Выход11 а-оксиа-метилпрогестерона 12%.П р и м е р 5. 40 мг 16 а-метилпрогестеронарастворяют в 1 мл этанола при прочих 10условиях таких же, как в примере 1. Выход11 а-оксиа-метилпрогестерона 66 о/о.П р и м е р 6. 40 мг 16 а-метилпрогестеронарастворяют в 2 мл этанола при прочих условиях таких же, как в примере 1. Выход 1511 а-оксиа-метилпрогестерона 73%.П р и м е р 7. 40 мг 16 а-метилпрогестерона растворяют в 3 мл этанола при прочихусловиях таких же, как в примере 1. Выход11 а-оксиа-метилпрогестерона 80 о/о. 20П р и м е р 8. 40 мг 16 а-метилпрогестеронарастворяют в 5 мл этанола при прочих условиях таких же, как в примере 1, Трансформация не идет.Пр имер 9. 1,4 г/л аммония сернокислого 25и 40 мг 16 а-метилпрогестерона растворяют в2 м г этанола при прочих условиях таких же,как в примере 1. Выход 11 а-оксиа-метилпрогестерона 65%,П р и м е р 10, 14 г/л аммония фосфорнокислого и 40 мг 16 а-метилпрогестерона растворяют в 2 мл этанола при прочих условияхтаких же, как в примере 1. Выход 11 а-окси 16 а-метилпрогестерона 63%П р и м е р 11. 2,5 г/л аммония янтарнокис- З 5лого и 40 мг 16 а-метилпрогестерона растворяют в 2 лгг этанола при прочих условиях такихже, как в примере 1, Выход 11 а-оксиа-метилпрогестерона 69 о/о.П р и м е р 12, 10 г/л фумаровой кислоты, 402,5 г/л аммония янтарнокислого и 40 мг1 ба-метилпрогестерона растворяют в 2 мл этанола при прочих условиях таких же, как впримере 1. Выход 11 а-оксиа-метилпрогестерона 7 /о. 45П р и м е р 13. 10 г/г яблочной кислоты,2,5 г/л аммония янтарнокислого и 40 мг 1 ба-метилпрогестерона растворяют в 2 мл этанола при прочих условиях таких же, как в примере 1. Выход 11 а-оксиа-метилпрогестероца 75%.Пр и м е р 14, 10 г/г лимонной кислоты, 2,5 г/л аммония янтарнокислого ц 40 мг 1 ба-метилпрогестерона растворяют в 2 мл этанола при прочих условиях таких же, как в примере 1. Выход 11 а-оксиа-метилпрогестерона 70 о/оПр и мер 15. В колбы на 750 мл с 200 мл среды, такой же как в примере 1, вносят 4 мл водной суспензии спор КЫкорцв п 1 рг 1 сапз ВНИХФИ. Выращивание мицелия в условиях примера 1. Затем 2 л мицелия, выросшего в течение 24 час, переносят в стеклянный ферментер на 20 л, добавляют б л стерильной воды, устанавливают рН 5,0 и вносят 3 г 16 а метилпрогестерона, растворенного в 150 мл этанола, Ферментацию проводят в течение 48 час при аэрации 0,4 г 0,(л/час. Культуральную массу извлекают хлороформом(1 раз - 4 л и 2 раза по 2 л). Затем из экстракта упаривагот растворитель, остаток (5,16 г) растворяют в бензоле и помещают на колонку с 400 г окиси алюминия (11 степень активности, обработана 2,5 г ледяной уксусной кислоты). Злюируют бензолом, затем хлороформом. Из элюата упаривают в вакууме растворитель и получают 2,43 г (77,5%) 11 а-окспа-метилпрогестерона, т, пл. 159 в 1 С (из разбавленного диметилформамида),Способ получения 11 а-оксиа-метилпрогестерона путем микробиологического гидроксилирования 16 а-метилпрогестероца, отличаюгчийся тем, что, с целью стандартизации процесса и повышения выхода продукта, процесс осуществляют при помощи штагпма Иыорцз г 1 гдпсапз ВНИХФИна синтетической среде. состоящей из цстоппшка углерода и исто - цика азота, кализ фосфорнокислого и магния сернокцслого, и целевой продукт выделяют обычными приемами.