Н. л. о. п. шарипо и ф. ю. рышка

252124 Союз Сооетсних Социалистичесних РеспублинЗависимое от авт. свидетельства М л, 421, 3/О 1 явлено 01,И.1968 (Лто 1246673/23 соединением заявки М МПК 6 01 пУДК 543.865.07(088,8 Комитет по делам зобретений и отнрыти при Совете Министров СССР. Н, Чамин . Шарипо и Т" ) 1 11:,г;лростроенйя Им 43 рТЕд явитель Специальное конструкторское бюроАН С налитическогР СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОСЛЕДОВАТ АМИНОКИСЛОТНЫХ ОСТАТКОВ В ПЕПТИДНОСТИ1 Х ЦЕПЯХ Известен способ определения последовательности аминокислотных остатков в пептид - ных цепях, заключающийся в том, что дициклогексилкарбадиимидные производные анализируемого пептила сочета 1 от с полимером-носителем с последующим определением методом последовательного отщепления аминокислотных остатков. Однако такой способ не позволяет анализировать высокомолекулярные пептиды ввиду высокой степени сшиваемости синтетического полимера-носителя, а также ввиду того, что ароматические аминокислоты имеют высокое сродство к полимеру-носителю.С целью создания возможностей для анализа высокомолекулярных пептидов, в качестве полимеров-носителей предложено брать линейный природный полимер, например аминоэтилцеллюлозу а-аминобепзилцеллюлозу, а в качестве производных пептидов их фенилтиокарбамилпроизводные.П р и м е р, Определение аминокислотной последовательности пептидных цепей, Фенплтиокарбамилпроизводное пептида получают по известному методу (например, по способу Ларсена), 20 лг фенилтиокарбамилпептида растворяют в 3 .ил абсолютного тетрагидрофурана, В реакционную смесь добавляют 0,4 г аминоэтилцеллюлозы с обменной емкостью О,б мл экв/г, приготовленной взаимодействием целлюлозы с эпихлоргидрином в щелочной среде, Раствор охлаждают до - 10 С и медленно добавляют 1 .цл 21/с-ного раствора дициклогексилкарбадиимида в пиридине. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 час 5 при - ОС, а затем еще 30 мин при комнатной температуре. После окончания реакции побочный продукт - дициклогексилмочевину удаляют из реакционной среды декантированием, используя для эгого тетрагидрофуран. О Осадок, освобожденный от дициклогексилмочевииы,промывают раствором 5",Ха 11 СОз с ХаСОз, взяты.; в соотношении 3: .Приготовленное таким способом соединениепептида с полимером, как правило, имеет большое количество в полимере незамещенных аминогрупп, присутствие которых зах 1 етно снижает эффективность ступенчатого расщепления. Для блокирозания их фенилтиокарбамилпептид, соединенный с полимером, суспендируют в трех обьемах этилового спирта, подщелоченного до рИ 9, и смешивают с одним объемом 1 -ного раствора динитрофторбензола, Сус пензию перемешивают в течениечас, а затем отфильтровывают и многократно промывают диэтпловым эфиром.Промытый осадок 72 л 1 г помещают в колонку и подвергают ступенчатому расщеплению по следующей методике.Колонку с анализируемым образцом термоо статируют при 50 С, а затем промывают257124 10 Предмет изобретения Составитель Е. УстиноваРедактор Л. Г. Герасимова Техред Л. В. Куклина Корректор Г, С. Мухина Заказ 696/12 Тираж 480 Подписное Ц 11 ИИПИ Коъштета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва Ж, Раушская наб д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 2,5 мл нитрсметана, насыщенного хлористым водородом, или 2,5 мл ледяной уксусной кислоты, также насыщенной хлористым водородом. Скорость пропускания раствора подбирают таким образом, чтобы весь цикл промывки составлял 30 - 40 мин, При воздействин безводной сильнокислой среды происходит отщепление аминокислотного остатка, соединенного с фенилизотиоцианатом, с последующей рекомбинацией в фенилтиогидантоиновое производное аминокислоты. Промывные воды с растворенным фенилтиогидантоином собирают и в них идентифицируют природу аминокислот. ного остатка известным методом хроматографии или при помощи тонкослойной хроматографии.Уменьшенный на один аминокислотный ра. аикал пептид, соединенный ковалентно с носителем, промывают, не извлекая из колонки, вначале этиловым спиртом, а затем водным раствором коллидина, кислотность которого откорректирована до,рН 9.После промывки через колонку пропускают 50 мл 1%-ного раствора фенилтиоизоцианата в этиловом спирте, подщелоченного органическими основаниями до рН 9. Скорость пропускания через столб сорбента составляет 10 - 12 мл/час. После окончания проведения соче тания фенилизотиоцианата с укороченнымпептидом содержимое колонки промывают в течение 10 мин 20 мл бензола, а затем 2 м. нитрометана Способ определения последовательностиаминокислотных остатков в пептидных цепях путем сочетания производных анализируемого 15 пептида с полимером-носителем с последующим последовательным отщеплением аминокислотных остатков по Эдману, отличающийся тем, что, с целью создания возможностей для анализа высокомолекулярных пептидов, в ка честве производных пептидов берут их фенилтиокарбамилпроизводные, а в качестве полимера-носителя - природный линейный полимер, например аминоэтилцеллюлозу, п-аминобензилцеллюлозу.