194300

Я 4300 Союз Советских Социалистических Республиктва Уо Кл. 39 с 6923 г 8 о МП иоритст Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министровллстснь М Дата опубликования описааг,Лвторыизобрстспи Е. Д. Каверзнева, В. П. Богданов, 1 Ои Л Н ТрофИнститут органичес.(ой х аявител СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАТИОНИТ с наоухаемостью гы на способносп ать ферменты из Зависимое от пвт. свидетел Заявлено 06.ХЕ 1965 ( 10 с присоединением заявки М 0 Опублиг(овано 30.111.1967. Б Известен способ синтеза катионита на основе салициловой кислоты, фенола и фор мальдегида, пригодный для сорбции сравнительно низ комолскулярных веществ: антибиотиков, витаминов, алкалоидов и т. д. Спо. 5 соб заключается во взаимодействии салициловой кислоты с формальдсгидом в кислои среде до получены я продукта, растворимого в воде при щелочных рН, с последующим взаимодействием полученного продукта с фе иолом, взятым в количестве 0,7 иго,гь на 1 иго,гь салициловой кислоты при рН 9 - 10, при нагревании в течение 6 - 7 час при 99 - 100 С и в течение 20 час при 120 в 1 С.Однако для ферментной промышленности 15 нужны смолы, которые могли бы сслективно сорбировать с достаточной емкостью высокомолекулярные и крайние лабильные молекулы ферментов без инактивации их.Предлагается способ получения катионита 20 на основе салициловой кислоты, фенола н формальдегида, который заключается в том, что вторая стадия реакции, проводимая с добавлением фенола, протекает при рН 10,6, при нагревании в течение 24 час при 97 - 99"С 25 и в течение 20 час при 110 в 1"С.Полученный катионит способен селективгго сороировать высокомолсг(улярные молег(улы белков 1 фсрхгеггтов) без их инактивации из разбавленных культуральггых стрептомицино вых растворов, При этом удается получит. высококонцентрированныс растворы ферментов,Катионит химически и механически стоек. СОЕ но 0,1 н. раствору ХаОН 4 лгг эквггг,П р и м с р 1, Получение растворимого линейного полимера.На 1 лголь салициловой кислоты осру 2 лоль 30 - 35)о-ного формалина. 1 хеакционную массу нагревают с ооратным холодильником до растворения и прибав.гягог 0,022 тго.гь соляной кислоты, нагревают смесь при 96 - 98 С до помутнения 136: 2 лгггн) и продолжают нагревать при этой жс температуре еще 1,5 1, где- время до помутнения. Смолу промывают водой и растворяют, добавляя 40)-ный ХаОН до рН 3 - 5.К полученному выше раствору дооавляют 0,2 лголь фенола, 0,3 иго.гь формалина и до. водят рН до 10,6, Смесь непрерывно нагревают при 97 - 98 С 24 час и затем при 110 - 112 С в течение 20 час. Полученная смола имеет набухаемость в Ха+-форхге 10+1 и статическую обменную емкость (СОЕ) 3,8: й 0,3 лгг эг(в/г.Угеличение количества фенола сшгкает на бухаемость катионита,Синтезированные смолы10; 5,5 и 3,1 были испытагконцентрировать и очищ194300 Предмет изобретения Составители Г. РусскихЗаказ 1375О Тирагк оно ПодинаоеЦ 1 ИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Центр, пр. Серова, д. 4 Типография, нр, Сапунова, 2 культуральной жидкости штамм 32-12 (пита. тельная среда полуобогащенная). Ниже приведен пример такого опыта на смоле, имевшей 10-кратную набухаемость.Г 1 р и м е р 2, Испытание смолы: сорбцпя протеаз из стрептомициновой культуральной укпдкостп.3,4 г смолы в Ха-форме уравновешивают на колонке с в М фосфатным буфером рН 6,2 и пропускают 910 гггг культуральной стрсптомнцпповой жидкости, освобожденной от стрептомпцина, с активностью 21,8 10 протеазных единиц/м.г и содсржащуго 3,18 10 в белковых единиц/мл,На колонке сорбируется 11,3 протеазных единиц, или 3,32 единицы на 1 г смолы. Элюирование боратным буфером рН 9,2 высокой ионной силы (0,5 моль КС 1) позволяет получить концентрированный раствор фермента (82 лг,г), в котором содержится 9,05 протеазных единиц (80 ото) и 0,27 белковых едигшц, что соответствует примерно 0,5 г сухого белка, пли 168 лгг на 1 г смолы в Н+-форме. Сгепень очистки по белку равна 5. Смола с набухаемостью 5,5 сорбирует толь ко 0,8 протеазных единиц/г, а смола с набухаемостью 3,1 всего 0,28 протеазной единицы Степень Очистки при этОЧ тс 1 кле зпангтюгьно ухудшается. 1 О Способ получения катионита путем взаимодействия салицнловой кислоты и формальде.гида в кислой среде с последующим взаимодействием полученного водорастворимого продукта поликонденсации с фенолом в ще лочной среде при нагревании, отличающийсятем, что, с целью получения катионита, пригодного для выделения и очистки белков, фенол берут в количестве 0,2 моль на 1 моль салициловой кислоты и взаимодействие водо О растворимого продукта конденсации салициловой кислоты и формальдепгда с фенолом проводят при рН 10,6, при нагревании в течение 24 час при 97 - 99"С и в течение 20 час при 110 в 1 С