Способ получения водорастворимых антигенов из опухолевых тканей

(5)5 А 61 К 39/О РЕТЕН итут фицине точЦель изотивности времени вую ткань подкисляляют хлона 6-75 с лировано ийный матеоперации,вают и храняе работы, свого целевого ли полткань Все пре- лучени- роводят риал опух опухолевую при -20 С.занные с и продукта п Биопс уча ют на заморажи паративны ем активн при+4 С. Образ шивают и логическоСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ И ГКНТ СССРОПИСАНИЕ ИЗ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(56) Авторское свидетельство ССМ 1079246 А 61 К 39/00, 1984. Изобретение относится к медицине, точнее к клинической иммунологии, и касается оценки состояния клеточно-опосредованного иммунитета у человека, может найти применение в онкологии для диагностики активности опухолевого процесса, а также для прогнозирования и определения эффективности противоопухолевой терапии, для изучения физико-химических и биологических свойств антигенов опухолей.Цель изобретения - увеличение выхода, активности целевого продукта и сокращение времени его получения,Способ осуществляют следующим обраец ткани размораживают, взвегомогенизируют на льду в физиом растворе хлористого натрия, рН(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДОРАСТ РИМЫХ АНТИГЕНОВ ИЗ ОПУХОЛЕВ ТКАНИ(57) Изобретение относится к меди нее к клинической иммунологии.бретения - увеличение выхода ак целевого продукта и сокращение его получения. Для этого опухоле гомогенизируют и одновременно ют, фильтруют, охлаждают, добав ристый калий, хроматографируют элюцией целевого продукта дистил ной водой. 4,5 - 5,0. Гомогенат фильтруют через капроновую сетку. Фильтрат охлаждают до 2-3 С и при рН 4,5-5,0 постепенно по мере раство- Я рения с помощью мешалки добавляют сухую навеску хлористого калия до конечной концентрации его в филь грате 3 М.Экстракцию проводят при 3-5 С при постоянном перемешивании на магнитной мешалке в Фь течение 15-17 ч. Материал подвергают уль трацентрифугированию. Проводят очистку С) полученного супернатанта от хлористого калия и балластных веществ ММ ниже 50 кд на 0, колонке с сефадексом 8-75, элюцию осуществляют дистиллированной водой. В качестве целевого продукта берут фракции в свободного объема с ММ свыше 50 кд. Лиофилизируют их.П р и м е р 1, 0,4 г опухолевой тканИ ретинобластомы, полученной после. энуклеации пораженного глаза, гомогениэируют в 0,9, физиологическом растворе хлористого натрия с рН 4,5 в соотношении вес: объем 1:9 (г на мл), Полученный гомогенат фильтруют через капроновую сетку, в фильтрат1747076 доноры 105 + 4,5%, с другими опухолями 106 +6,8%, с неонкологическими заболеваниями 109,8 ч,2%.П р и м е р 4, Все процедуры выполняют аналогично за исключением того, что препарат выделяют их опухолевой ткани аденокарциномы яичника. Основное содержание препарата составляет фракция 50 - 100 кд около 75%. Препарат проявляет специфическую иммунологическую активность в тесте 5 10 миграции лейкоцитов при испытании в группе больных с аденокарциномой яичника. Оптимальная концентрация препарата по белку 200 - 400 мкг/мл опухолевой ткани позволяет увеличить выход препарата по белку в 30 раз, повысить биологическую активность в 10 раз в отличие от прототипа, получать иммунологически активн яе нетоксичные препараты с ММ в области 50-100 кдобладающие диагностической ценностью в клеточных тестах, а также уменьшить затрачиваемой рабочее время в 3 раза (с 6 - 7 сут по прототипу до 2 - 3 сут при использовании предлагаемого способа) за счет ликвидации стадии обессоливания и последующего концентрирования, что предотвращает частичную потерю активного материала до 20-30%. Формула изобретения Способ получения водорастворимых антигенов иэ опухопевой ткани путем ее гомогениэации, подкисления до рН 4,5-5,0, фильтрации, охлаждения, добавления хлористого калия до 3 м, центрифугирования, гель-хроматографии и элюции целевого продукта,отличающийся тем,что,сцелью увеличения выхода, активности целевого продукта и интенсификации способа, гомогенизацию ткани проводят одновременно с подкиспением, а гель-хроматографию - на сефадексе 6 75 с элюцией целевого продукта дистипп ирова н ной водой. Составитель В,ЛитовченкоТехред М,Моргентал Корректор Н,Король Редактор А.Долийич За,э 2453 Тираж Подписное ВНИИПИ Госудаоственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, К-З 5, Раушская наб 4/5Производственно-иэдательский комбинат "Патент", г, Ужгород, уп.Гагарина, 101 обьемом 4 мл с рН 4,9 по мере растворения при постоянном перемешивании вносят сухой КС до конечной его концентрации 3 М (0,89 г КС), оставляют при постоянном перемешивании на 16 ч при 40 С. Затем филь- трат центрифугируют при 30000 об/мин 1 ч при 4 С. Супернатант подвергают очистке на колонке с сефадексом 6-75 (4 х 15 см), удаляют хлористый калий и растворимый материал с ММ ниже 50 кд, элюцию проводят дистиллированной водой, Материал, проявляющий диагностическую активность в тесте торможения миграции лейкоцитов, собирают во фракциях внешнего объема колонки в области ММ выше 50 кд, До 95% материала в препарате имеет ММ 60 - 70 кд,П р и м е р 2, Все процедуры выполняют, как в примерах 1 за исключением того, что источником препарата служит смесь биопсийного материала ткани ретинобластомы, полученной от нескольких больных, Экстракцию проводят при рН 4,5, Выделяют целевой продукт на колонке с сефадексом 6-75. Проводят анализ материала методом высокоэффективной хроматографии на колонке с СК 3000 ЯЮ, Доля оптической плотности материала с ММ 60-70 кд составляет 68% от общего спектра оптической плотности материала, выделенного предлагаемым методом.П р и м е р 3, Все процедуры выполняют, как в примере 1 эа исключением того, что препарат получают из ткани меланомы кожи. Выделяют фракцию с ММ более 50 кд после хроматографии на колонке с сефадексом 0-75. Проводят анализ ММ препарата. Основное содержание препарата составляет фракция с ММ около 70 кд до 85%, Активность препарата определяют в тесте миграции лейкоцитов у больных с мепаномой кожи до лечения: индес миграции.85 +5%, Оптимальная концентрация препарата по белку 200 - 400 мкг/мл, В группах контрольных доноров ИМ был выше ипи равен 100%: здоровые 15 Предлагаемый способ получения водо- растворимых антигенных препаратов из