Способ определения продуктов перекисного окисления липидов крови

(57) Использование; медицина, биология, диагностика патологий, контрольадаптациитерапии, Сущность изобретения: пробу крови или ее фракций экстрагируют 100-ЬОО -кратным избытком смеси гептан-изопропанол в соотношении 1;1, аликвоту гептановой фазы смешивают с водным раствором 2-тиобарбитуровой кислоты при ее конечной концентрации в смеси 0,33 - 0,5%, проводят нагревание при 105-115 С в течение 5 - 15 мин и добавляют после охлаждения н-бутанол в объемном соотношении к пробе 1: (5 - 10). Регистрацию проводят флюориметрически. и инУшкас. 25-27 ДУКТОВ ПИДОВ тан - изопропилму), делят фазы, го экстракта, сме 2-тиобарбитуровконцентрации 05 - 15 мин при (1холодильником, 10 мл н-бутанола рованля выража интенсивностей ТБЧ =Е-,6 д ф О где ТБЧ - тиобарбитуровое число;- интенсивность флуоресценции рабочего (р) и фонового (ф) раствора.ееюееП р и м е р 1. Пробу плазмы донора Б, 27 лет объемом 0,02 мл смешивают со 100-кратным избытком смеси гептан - изопропанол в соотношении 1;1 по объему. Отбирают 0,5 мл гептанового экстракта, добавляют 0,5 мл 1%-ного водного раствора тиобарбитуровой кислоты (конечная ее концентрация в пробе 0,5%), термостатируют при 115+0,2 С в течение 5 мин, охлаждают до комнатной темОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМРИ ГКНТ СССР(71) Тюменский государствен ныйский институт(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛКРОВИ Изобретение относится к клинической медицине и биологии, а именно к способам контроля уровня перекисного окисления липидов (ПОЛ) крови доноров в зависимости от возраста, пола, географической широты обитания, и может быть использовано для диагностики патологий, протекающих с изменением уровня перекисного окисления липидов, для контроля адаптации к мобильным формам организации труда, новым климато-географическим условиям, способам контроля антиоксиданто- витамино-,гемотерапии,Цель изобретения - упрощение способа за счет сокращения ч 1 сла трудоемких операций и расширение возможностей способа за счет использования цельной крови или ее фракций при одновременном повышении точности,Способ осуществляется следующим об 0,02-0,1 мл цельной крови или плазмь рови, или эритроцитов экстрагируют 100 - 00-кратным избытком бинарной смеси геповый спирт 1;1(пообье- ( отбирают 0,5 мл гептановошивают с 0,5 мл раствором ой кислоты до конечной ее ,33 - 0,5%, термостатируют 05 - 115)-0,2 С с обратным охлаждают, добавляют 5 - , результаты флуориметри д ют в единицах отношения 41737339 40 50 Составитель Н.ГуляеваТехред М,Моргентал Корректор Л.Бескид Редактор М.Циткина Заказ 1887 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 пературы, добавляют 10 мл н-бутанола. Образуется прозрачный раствор, который флуориметрируют при волне возбуждения 515 нм и волне флуоресценции 535 нм против бутанола. Параллельно анализируют 6 проб, получая среднее значение показателя ТБЧ, равное 3,21.ф.0.61.П р и м е р 2, Пробу эритроцитов белых крыс объемом 0,1 мл смешивают с 500-кратным избытком бинарной смеси гептан-изопропанол в соотношении 1:1 по обьему, отбирают О, 5 мл гептановой фазы, добавляют 0,5 мл 0,67-ного водного раствора тиобарбитуровой кислоты (конечная концентрация 0,33/), термостатируют 10 мин при 110-0,2 С, охлаждают, смешивают с 6 мл н-бутанола, флуориметрируют при волне возбуждения 515 нм и волне флуоресценции 535 нм против бутанола. Параллельно анализируют 3 пробы, получают среднее значение показателя, равное 2,76":0,55,П р и м е р 3. Пробу цельной крови донора В. 30 лет объемом 0,02 мл гомогенизируют с 300-кратным избытком смеси гептан - изопропанол в соотношении 1:1 по объему, центрифугируют для разделения фаз, отбирают 0,5 мл гептановой фазы, добавляют водный раствор тиобарбитуровой кислоты до конечной ее концентрации 0,4, термостатируют в течение 15 мин при 105 С, охлаждают, смешивают с 5 мл н-бутанола, флуориметрируют прозрачный раствор при волне возбуждения 515 нм и волне флуоресценции 535 нм против бутанола. Параллельно анализируют 5 проб и получают среднее значение ТБЧ, равное 2,70.0,25,По сравнению с прототипом в предлагаемом способе сокращено 11 трудоемких 5 операций, способ позволяет использоватьне только плазму крови, но и цельную кровь и ее фракции. Достоверный анализ по прототипу производится в пробе объемом не менее 0,03 - 0,05 мл, а по предлагаемому 10 способу - начиная с 0,01 мл, причем воспроизводимость способа возрастает не менее чем в 1,5 раза. Формула изобретения 15 Способ определения продуктов перекисного окисления липидов крови, включающий добавление к исследуемой пробе 2-тиобарбитуровой кислоты, нагревание, охлаждение, добавление н-бутанола и флуори метрический анализ, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения числа трудоемких операций и расширения возможностей способа путем использования цельной крови или ее фрак ций при одновременном повышении точности, исследуемую пробу экстрагируют 100-500-кратным избытком смеси гептанизопропанол в соотношении 1; 1, аликвоту гептановой фазы смешивают с водным раство ром 2-тиобарбитуровой кислоты при ее конечной концентрации в смеси 0,33-0,5, проводят нагревание при 105 - 115 С в течение 5 - 15 мин, охлаждают, добавляют н-бутанол в объемном соотношении к пробе 1: 5-10).35