Способ получения 1, 2-диацил-s -глицерина

г г) от,в веронале отделей фермент лхолина в ДАГ выдехлорофсро 4 с ользованы ин, выпуятием по епаратов, атидилхоГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Московский институт тонкой химической технологии, Научно-п роизводственное объединение "Фермент" Всесоюзногонаучно-исследовательского института прикладной энзимологии и Харьковское предприятие бактерийных препаратов(56) Евстигнеева Р,П., Звонкова Е,Н,реникова Г.АШвец В,И. Химия лМ.; Химия, 1983, с. 17 - 24,Кейтс М. Техника липидологии. М.: Мир,1975, с. 284. Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения 1,2-диацил-Яп-глицеоина (ДАГ) из фосфатидилхолина (ФХ) природного происхождения.Цель изобретения - упрощение способа получения ДАГ.Способ заключается в обработке фосфатидилхолина фосфолипазой С из Васоз сегецз ВКПМ В, иммобилизованной на силикагеле, в среде этанола с последующим выделением целевого продукта промывкой силикагеля хлороформом, Способ обеспечивает получение 1,2-диацил-Яп-глицерина почти с количественным выходом.Получение ДАГ по предлагаемому способу осуществляется следующим обра(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1,2-ДИАЦИЛЯй-ГЛИЦЕРИНА(57) Изобретение относится к биотехнологии. конкретно к способу получения 1,2-диацил-Яп-глицерина из фосфатидилхолина (ФХ) природного происхождения. Цель изобретения - упрощение процесса, Способ получения 1,2-диацил-Яп-глицерина включает ферментативное расщепление фосфатидилхолина фосфолипазой С из Васцз сегена ВКПМ В, иммобилизованной на силикагеле. Процесс ведут в этаноле при 35 - 38 С и концентрации ФХ 7-12 аг с последующим выделением целевого продукта с сорбента промывкой хлороформом. 1 з.п.флы, 1 табл. свг- осогг,вгсоо-сн о фасфалиаага Сн гсосг г- о - Р - о (со г) г к (Сн з) гОо+во-Р-о(сгфасфатидипколинО где Я 1, В 2 - остатки жирных кислФосфолипазу С инкубируют ловом буфере с силикагелем. Пос ния от буфера иммобилизованны переносят в раствор фосфатиди этаноле (96;), Образовавшийся ляют путем промывки силикагеля мом, Выход целевого продукта 92П р и м е р. В работе исп 10 аг(г-ный яичный фосфатидилхол скаемый Харьковским предпри производству бактерийных пр препарат фосфолипазы С (фосфлин-холинфосфогидролазы, К,Ф,3,1.4.3) изВасйоэ сегевз ВКПМ Вв 0,01 М вероналовом буфере, содержащем 0,001 МЕпС 12, выпускаемый НПО "Фермент" (Вильнюс) с удельной активностью 280 ед/мг.1 мл препарата фосфолипаэы С (120 ед)инкубируют с 1 г силикагеля40/100(СЬепато 1 ЧССР) в течение 1 сут при 4 С.Через 1 сут на силикагеле связывается до35 активного фермента. По-ле отделениябуфера полученную иммобилизованную, ФЛС смешивают с 0,5 мл раствора 56 мг Ф)в 96 этаноле и инкубируют 3 ч при 37 С,После этого всю реакционную смесь переносят на стеклянный фильтр М 4 (пор. 16) иудаляют этанол, содержащий фосфохолин,Силикагель на фильтре промывают хлороформом (Зх 5 мл), Соединенные промывкиэкстрагируют водой для удаления остатковфосфохолина, Полученный раствор ДАГ вхлороформе упаривают и досушивают при30 С в вакууме, Получено 42 мг ДАГ (93),Содержание фосфора в продукте реакции. 0,4 мкг/мг, что соответствует содержаниюФХ не более 0,8%. И 0,65 на силуфоле ОЧ 254 в системе петролейный эфир - эфир 1:2,Силикагель с фильтра, содержащий иммобилизованную ФЛС, предварительно. промытый этанолом; водой и вероналовымбуфером, пригоден для повторного использования,В таблице представлены примеры получения ДАГ по предлагаемому способу приразличной концентрации ФХ и температурепроцесса.Предлагаемый метод является новымспособом получения ДАГ из наиболее доступного природного фосфоглицерида-фосфатидилхолина, Благодаря обнаруженной высокой каталитической активности, иммобилизованной на силикагеле фосфолипазыС иэ В,сегежка, проявляемой в этаноле, удалось получить с высоким (почти количест 5 венным) выходом оптически активный ДАГ,При применении синтетических приемоввыход оптически активного ДАГ составляет10 - 35 6,Применение иммобилизованной ФЛС в10 среде спирта позволяет получить нужноевещество в одну стадию и существенно упростить его выделение, используя минимальное количество растворителей,Используемые реагенты - фосфатидилхо 15 лин и фермент фосфолипаза С из В,сегена - являются легкодоступными и производятся в СССР.Таким образом, предлагаемый способпозволяет значительно упростить и удеше 20 вить метод получения оптически активногоДАГ,Формула изобретения 1. Способ получения 1,2-диацил-Яп-гли церина путем ферментативного расщепления фосфатидилхолина фосфолипазой С с последующим выделением целевого продукта,отл ича ющийсятем,что,с целью упрощения процесса, используют фосфати дилхолин фосфолипазу С из ВасПцз сегецзВКПМ В, иммобилизованную на силикагеле, и процесс ведут в этаноле при температуре 35 - 38 С и концентрации фосфатидилхолина 7 - 1 Ц, а выделение це левого продукта осуществляют промывкойсорбента хлороформом.2, Способ по и 1, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что используют 10 ф -ный раствор фосфатидилхолина.40