Способ получения антивирусных полипептидных комплексов

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧ ЕСНИХРЕСПУБЛИН Э) П А 61 К 7/О И мии и може из чении б ыть юл, Р 10 научно-исследо т эпидемиологии9(088.8)Лекции п123.клеазы. нтибиоти мп М,: Меди ци на,ъе явля ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГННТ СССР ПИСАНИЕ ИЗОБ Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Белорусскительский инстити микробиологии(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИВИРУСНЫХЕПТИДНЫХ КОМПЛЕКСОВИзобретение относится к биохи 1 зобретение относится к биохимии и может быть использовано приизучении биохимических процессов,обуславливающих антивирусную резистентность клетки,Целью изобретения ется упрощение способа и увеличение антивирусной активности.Для этого клеточньп) экстракт получают кислотной обработкой ткании нагреванием, после чего клеточньп.экстракт защелачивают до рН 11,011,5, с помощью НаСО , нейтрализуют НС 1 и вновь защелачивают ИаОН дорН 11,0-11,5. Конечный продукт получают из надосадка после фракццонирования этанолом путем упаривания изакисления.П р и м е р 110 флаконов смонослоем фибробластов эмбрионов кур(ФЭК), содержащих 5 млн клеток и5 мл поддерживая.щей среди199,дважды заморажинавт и размораживают т б использовано приу иохимических процессов, обуславливающих антивирусную резистентность клетки. Целью изобретения является упрощение способа и увеличение антивирусной активности Для этого фракционируют клеточньп 1 экстракт, извлекаемый из клеток посредством обработки последних слабой кислотой и нагреванием, Спас.об позволяет получать полипептидные ко лексы как из инфицированных, так инативных клеток, Получаемые комплексы обладают выраженной активносв отношении вирусов гриппа и ВЭЛ,после чего клеточную суспензию обдиняют. Гомогенат закисляют 2 н.НС 1 до рН 2 и нагревают 5 мин на кипящей водяной бане, охлаждают и центрифугируют при 5000 об/мин 20 мин.Осадок отбрасывают, а клеточный экстракт доводят 207-ным ИаСОз дорН 11,0-11,5. Выпавип)й осадок удаляют центрифугированием при 5000 об/мин20 мин. Супернатант сливают и нейтралируют 5 н. НС 1, после чего опятьзащелачивают 5 и, 1)аОН до рН 11,011,5. К 65 мл полученного раствораприливают двойной объем (130 мл)этанола и оставляют в холодильникепри 4 С на 14 ч, Выпавший осадок удаляют центрифугпрованием при 5000 об/мин20 мин, после чего раствор нейтрализуют 2 н. НС 1 и образовавшиеся200 мл раствора упаривают до 10 мп,концентрируя его таким образом 20 раз.Далее раствор подкисляют цо рН 2 спомощью 2 н. НС 1 и вьп)авший осадок6342 ЬЗ 15 20 Формула изобретения Гоставцтель И. ТарееваТехред Л.Олийцк Корректор С.Черни 1 с; 3 ТОэ НГОр 33 аТ 3:3,;3 3 712 Тираж 437 Подписное1 Н:1 осуд 3 э тцецного комитета по изобретениям и открытиям ри ГКНТ СССР133) , 1 сэссва, Ж-З 5, Раушская цаб., и. 4/5. . 3 з яс до овецо-изд;т ьский комбинат Пате нт", г, Ужгород, ул. Гагарина, 101 отделяют не 3 гриФугровацием при5000 об/миц, Надосадочуо жидкостьслиают, а осадок растворлот в 0,025 Мрс:-бу 3 ере рН 8,5 и непа;ьзуот дляс слсцовацй.Образец хроматограс)эирусэт ца пласИах Гпу)оп 3 разделяющей систе.е ц-бутацол:уксусная кислота;вода,зец согот пз пяти полипептидовсосэтэетсттэуо 3". РФ; О, 25; О, 20;О, 6; ), 2; 000,Цр хэо;.зтог)эстф 3 и образца ца сефадессе30 устца 3 лВВот что он Выо 31; 33 сэ, с 3 от3 асЗООООД3 3,553 3 эо 3 ерки ацтиви 1 эусэых сВойс ГВ, ека .,угую серию клеток инФци 3 русо еттесу;эльског о эццефало.Яст;с;сэдсэ( (ВЭЛ) с такой же.ожес 33 сццсэст 33, что и гирус гриппа1 сэгтцые образцы вносят препарат в доземг а 3335 акоп. Эта доза це эс ИЛ 335 КЛЕТОК, В КОНтрОЛЬНЫЕ ,163 эсзцз ре 53:рат це носят. Учет титэ ц 333 эс эц осущсствляют по цитопатичес ,33 у д.отио (Ь 1,1),,э33 с 3 е 33 пус.3 рпп состаВля ст 2, 15, П 1,", /мл, а вируса ВЭЛ3,0 1;, ТН,.1,/л.Н р и м е р 2, Осуцествлот получ.ис с 3 ти 3 эусцэго полипс.птдцого счтессс из 3 ц 333(3 эоэаццсх клеток..:Я этого мсэцос;эй к 3 еток ФЭК ицс 13 ицируют вирусом ВЭЛ мцожественностью0,1 ТН 1/клетка, Через 1 сут послеинсоицировация клетки обрабатываютаналогично примеру 1. Полученныйпрепарат представлен шестью полипептидами с РФ 0,25; 0,20; 0,16; 0,12;О, 1 0; О, 00 .Хэоьатоградэия препарата на сефадексе Гпоказывает, что его мол,мас составляет 330001000 Д, Препарат аналогично примеру 1 выходитодним пиком,Антивирусное действие препарата,полученного из иц 1 ицированцых клеток,устанавливается аналогично примеру 1,В этом случае препарат подавляет размцожецие вируса гриппа на 3,5 1 яТЦД /кп, а вируса ВЭЛ ца 6,0 1 дТИД /мл,Способ получения антивирусных полипептидцых комплексов, заключающийсяв получении клеточного экстракта кислотной обработкой ткани с последующимс)эракцонтровацием этанолом и вьделецием целевого продукта, о т л и ч ао щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа и увеличения антивирусной активности, клеточный экстрактполучают из Фибробластов эмбрионовкур, кислотную обработку осуществляют нагреванием нри рН 1-3, после чегоклеточный экстракт защелачивают 13 а СО2 3до рН 11,0-11,5, нейтрализуют кислотой и вновь защелачивают до рН 11,011,5, а целевой продукт вьделяют изнадосадка путем упаривания и закисле