Способ получения иммунореагента для выявления антигенсвязывающих лимфоцитов в реакции розеткообразования

(19) (11) 1) Л 61 К 39/00 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ забр гент лиза Цель оцце4 ч свидетельство СССР А 6 1 К 39/00, 198 перемешивают и выдерживают 24 ч при37 С при периодическом осторожномперемецдвации Фиксированные эритроциты трижды отмывают ЗФР центрифугированием при 3000 об/м в течение5 миц и ресуспендируют в таком жерастворе до 20 Х Фиксированные эритро(ть нагружают тейхоевой кислотой(ТК) из клеточных стенок золотистогостафилококка в следующем режме:смеиваот равные объемы 202 взвесиэритроцитов, раствора ТК и 0,57.раствора хлорцда хрома, смесь выдержвают 5-6 миц при комнатной температуре. Сецсибилизцрованные эритроциты трижды отмывают ЗФР (рН 7,2), содержащм 0,02% бычьего сывороточцогоальбума, (ецтрфугроваем прц1500 об/миц в течение 3 мцц ц ресуспендируют в таком же растворе до10/-ой концентрации. зобретен иолог относится нно к приготовлеци медицине, а име реагентов для и следований,1 ель изобрет бильности реаге ра получаемых и исмунологическ ст пе ения - повышениецта, расширениеммунореагецтовэритротов при сни- енси ние гемол изации.Примеьности имм ста 1, Определениереагента,Нативн жды кур тр раство рц 1500 до 107. ым ф зСмеши е эритроциты иологическим м пуб/мц ц мывают фитем центр15 мин иконцентраческим ра фугирования и есуспендируют ции забуферец твором (ЗФ 1). емом 14,47-ь ида, содержащнатрия. Смес- цоцолог вают с растго О,равным о ацетальд во осторожно ист ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологиии инфекционных болезней(56) Зауэр Х. Методы иммуцньж розеток. В кн. Иммунологические методы/Под ред. Г. Фримеля, М., 1987,с. 278-282.АвторскоеЮ 1218524, кл 3,54) СПОСОБ ПОЛУЧГНИЯ ИММУНОРЕЛГЕНТАДЛЯ ВЬ(ЯВ 11 ЕНИЯ АНТИГЕНСВЯЗЫВА(ЯЦИХ ЛИМ 01 ИТОВ В РЕАКЦИИ РОЗЕТКООБРЛЗОВАНИЯ Изобретение относится к медицимеццо к иммуцодиагностике.Цельетения - повышение стабильности реа, расширение спектра получаеммуцореагецтов и снижение гемоэрцтроцитов при сенсибилизации.достигается фиксацией эритроциур а.етальдегдом в конечнойцтрации 7,2+ 0,057, в течениепри 37.( 0,5 С.40 45 50 11 ммуцорелгецты Готовят в день постлц 0 си зс 1педелю 70 ГОстттцовки1 д 12 тес до цостлтттвкт реакции розеткообрлзотдцця (РРО),1 РО стдпят слеутсдП образом.О, мл лцмфоццтов от кджой цз трех больш,тх мдстцтом сттеттптвстттт с 0,1 мл 0,27,-тсго цммуцорелгецтл, смесь вы 5 р,дтВ 15 т 5 мттт Лрц 37" С, затем центрцфугцруют 1 О мцц пртт 1000 об/мтт т ттдержтВеют дополтц сльцо 1 ч при ,С, 11 з ослдкд готОят мдзок на предттетц 0. стекле, Адксир ют его метанолом ц Окгдшцвдтет мс.тц ецоьтд синим. 1 рц этот цммуцорелгецт сохраняетст;тбттгт,наст В течение 12 мес (срок5 5Е я ) 5 В ТО В 5 Е 55 КДК ЦМУЦОредгецт, црцготовлс нный цл цдтивных 01 ттт 50 цтттстх кур, лцзцрует уже к седьттому дтпл ос гтодтучеццтт,1 р ц и е2. Л.тя оценки воз.Ожтост; Логтучецця иммуцоредд ецта прт цомслп рлздцтчттттх приемов сетдсцоилизд И цксцровдццые предлагаемым способом ц цдтцвште эрцтроццты кур цагругплнт различными бдктерцдльтцпми дцтцгецлтп црц цсцользовдццц оцтцмлльцых для каждого дцтцгецл способовсеттсцбцтттздтдттт; протейцымц ц псевдоттоттттцттттд лцпополцслхдрцддмц без посредццков; Т. эотдотцстого стлфцлококкд ц экзотоксццом Л (ЭТ) сццегцойцой и;цтоткц прц помоьттт хлорцдл хрома;соляОкцслымц экстрлктлмц (СЭ) сташдттотОктсо т Г тдфцлОкО е кО Вь д на токсицом дт гтт,:тротссцттстьтцттстдтттц лцтцгендми (1 т) протее црц тотот лмцдола, Во Всех случаях, коглл цммутсредгецтмог 6 ыть получен известным спцсобом,оц бып получен ц даццым способом,пр этом результаты РРО с релгецтами,получетцымц обоими способлмц, це разлцчдются., 1(ОГдл Оптцтальтьтм котьОГирути агентом бьд дмцдоц, цлтттуттореагент Известным способом получитьбьс 5 о цел зя, д гдьцтым можно.11 р ц м е р 3. КуИте эрцтроццтп отю,ттлют, клк отс.с г прцм. -150 1, 11 Осле этОГО сметптс 5 1 ттттыеГ)6 ъет 5) 10/ Взвеситттртттт1 В ку 15ц тттксцрутего рлстт 0 рл. Фтттс 1 ттцс,т 150 Оптпрц 20 и 37 С В течение 12 о,72 ч црт отттетттр 1 ттттх дтьцегтдл вфцксцрутещей смеси 14, l;0,8; 7, 2;э, 4; 3, 57 Ер 5 те тогс, трцтротцтыкур серунт 1 артаст., Гц;ом Гсвсех случаях 51 лКсц ую 5 Ом.сцс 0 .г,. 5я е т 7 , 2 , :. ), е т:е В т е " 10 15 20 25 30 35 хлорида натрия 0,857. Всего фиксируют 40 проб эритроцитов в условиях, рлзлтчлттдтхся хотя бы по одному параметру. Результаты оценивают по следующим показателям: гемолиз при фиксации; гемолцз при хранении; спонтанная агглютицацця эритроцитов; спонтанное розекообразовате с лтмфоттами человека при использовав нецагруженцых эритроцитов. Дополнительно сравнивают пригодность эритроцитов связывать различные бактериальцые антигены при применении рлзличньгх методов сенсибилизации. Дегтя этого каждую отобранную пробу эритроццтов нагружают бактериальными антигенами при использовании оптимального метода сецсибилизации: СЭ эпцдермального стафилококка и стафилококковым ацатоксином - при помощи амдола ЛПС синегнойной палочки - без посредников, ЭТА синегнойной папочки - при помощи хлорида хрома. Для каждого дцтигена и каждой пробы эритроцитов подбирают оптимальную сенсибдддтизирующую дозу. Уровень сенсибилизации проверяют в реакции пассивной гемагглютинации с гомологичцыми иммунными сыворотками.Таким образом, оптимальными оказались следующие условия фиксации: содержание ацетальдегидд в смеси 7,24. 0,05 Х, 24 ч 37 + 0,5 С. 1 ри использовании фиксированныхданным способом эритроцитов кур были приготовлены 4 стафилококковых,8 псевдомонадных и 9 протейных иммуцореагентов. Они используются втечение года и сохраняют свою стабильность. С их применением обследовано102 больных с бактериологическимподтверждением диагноза,Полученные данные демонстрируютвысокую специфичность ацтигенсвязывающих лимфоцитов с иммуцореагентами,приготовленными по данному способу,обеспечивающему стабильность иммуцо-редгентл и возможность его полу.ения оптимальным для каждого используемого ацтигенд методом. Формула изобретения Способ получения иммунореагента дпя выявления антигенсвязывающих лимфоцитов в реакции розеткообразоВдция, включающий сенсибилизациюСоставитель О, ПетрачеваТехред Л.Олийнык Корректор С.Черни Редактор Н. Горват Заказ 712 Тираж 452 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно в издательск комбинат "Патент", г.уагород, ул. Гагарина, 101 51 Ь 3428 эритроцитов кур антигеном, о т л и - ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения стабильности реагента,раснирения спектра получаемых имиунореагентов, а также снижения гемо 5 4 6лиза эритроцитов при сенсибилизации,перед сенсибилизацией эритроциты обрабатывают ацетальдегидом в конечнойконцентрации 7,20 + 0,053 ь течение22-24 ч при 36,5-37,5 С.