Способ получения бактериального лектина, специфичного к сиаловым кислотам

СООЭ СОВЕТСКИХюиииеижРЕСПУБЛИН ОБРЕТЕНИЯ Н АВТОРСКОМУ ДЕТЕЛЬСТВУ(56) Лахтин В.И.Лектины в исследовании белков и углеводов. /Итоги науки и техники, ВИНИТИ: Биотехнология, 1987, с,288.Бондарчук А,А., Ах-.едкий Т.В. Характеристика Фермеитативного комплекса иэ Вас.вевепег 1 сцв.-Микробиологический хурнал, 1981, 40, Р б,с.687-690(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЬАКТЕРИАЛЬНОГО ЛЕКТИНА, СПЩИФИЧНОГО К СИАЛОВЬИ КИСЛОТАИ(57) Иэоб носится к микробиологиче енности,а именно ретение отской промьапл я к микробиоти, а именно к риального лекаловым кисло" Изобре относи логической промывлен способу получения ба тина, специфичного к там. Пель изобретен- повышение выкта и упрощение проду а целевсоба.В качес сырья исполь тура Васс 11- 2466, у коость к биоалоспецидщчных щивается еде, содермулятора пред ка е исто эуется непатогенна 1 ив вевепгег 1 сцв Я торой обнарухена с синтезу внеклеточн лектинов. Продуцен глубинным способом кащей в качестве б ул Восо си выр ос ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ.801622397 А 1 151)5 С 12 Р 19/04//(С 12 Р 19/О 4, С 12 В 1:125) 2к способу получения бактериального лектина, специфичного к сиаловым кислотам. Пель изобретения - упроеение способа получения бактериального сиалоспецифического лектина, а такхе увеличение выхода целевого продукта. Сущвость изобретения заключается я том, что, в качестве источника сырья используют непатогенную культуру Васс 11- 1 ив вевепгег 1 спв ВКПИ В, способ" ную синтезировать янеклеточные сиалоспецифичные лектины. Продуцент выращивают в течение 14-16 ч глубинным способом на лолусинтетической среде с биостимулятором - лятолиэатом из пивных дрохжей; Целевой продукт с выходом 46,8-60% получают осахдением культуральной хидкости сульфатом аммония при насыщении 60-70%, лиализом и хранят в заморохенном состоянии при -О С. 1 з.л.ф-лы. почтительно автолизат иэ пивных дроххей, что сокращает время культивирования до 14-16 ц по сравнению с 21- 24 ч выращивания на среде, солерхащей автолизат из хлебопекарских дроххеа. Препарат вселяют осахдением сериокислым аммонием при насыщении 60-703 и очисткой диализом, хранят вф эаморохеином состоянии при -10 С. Выход целевого продукта 46,87, - 607,.П р и м е р 1. Бактерии Вас(1- 4 Ецв вевепгег 1 сцв ВКПБ Ввыращивают глубинным способом на качалках (160 об./мин) в течение 21-24 ч прй 37 С в колбах Эрленмейера со 100 мл питательной среды следующего1622397 Составитель О.Скородумова Техред Л,Олийнык Корректор С.Шевкун Редактор Н.Яцола Заказ 88 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям н открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,0 состава, г/л: желатин 10,0, КНРО1,6, М 8804 0,75, Еп 804 0,25, Ре 804%О 0,02, Ма(,1 0,02, (ИН)з ЯО 4, 0,05, СаС 1 0,08, мальтоза 1,0, автолиэат из хлебопекарских дрожжей 1,5. Бактериальную биомассу отделяют центрифугирояанием при 6000 8 в течение 20 мнн. К культуральной жидкости (1 л) прибавляют 242,03 г 10 (ВН 4) 804 (40 Ж насыщения) и оставляют на ночь при 4 С. Выпавший хлопьевидный осадок отделяют центриФугироваиием при 6000 8 в течение 25 мин, растворяют в 5 мл дистиллированной 15 воды и диализуют 6-8 ч против водопроводной воды при комнатной температуре, затем ночь - против дистил. лированной воды при 4 С, осадок отделяют центрифугированием при ЯООО 8 20 в течение 15 мин, супернатант хранят в замороженном состоянии при -10 С. Выход целевого продукта по активности 2,63.П р и м е р 2. Условия выращива ния, питательная среда и выделение бактериального лектина аналогичны приведенным в примере 1, за нсклю" чением сульфата аммония, используемого для осаждения препарата: на 1 л 30 культуральной зидкости (КЖ) 390,0 г (ЮН 4)804 (603 насыщения). Выход целевого продукта по активности 16,1 Е.П р и м е р 3. Условия выращивания, питательная среда, выделение бактериального лектина такие же, как в примере 1, за искюпочением количества сульфата аммония, используемого для осаждения лектина: на 1 л КЖ добавляли 472,0 г (БН 4) ЯО (703 40 насыщения) . Выход целевого продукта по активности ЗЗ,ОХ.П р и м е р 4. Условия культивирования продуцента и выделение лектина (403 насыщения сульфатом аммония) 45 аналогичны приведенным в примере 1, В питательной среде в качестве биостимулятора вместо автолиэата из хлебопекарскнх дрожжей испольэовали автолиэат из пивных дрожжей из такого же расчета. На 14-16 ч роста продуцента из культуральной жидкости (после отделения биомассы) проводили выделение сиалоспецифичного лектина, как описано н примере 1. Выход целевого продукта по активности 2,2 Х,П р н и е р 5. Условия выращивания и питательная среда с автолизатом иэ пивных дрожжей аналогичны приведенным в примере 4. Лля осаждения препарата из 1 л КЖ испольэовали 390,0 г сернокнслого аммония (607, насыщения). Выход целевого продукта по активности 46,87.П р и м е р 6. Условия выращивания и питательная среда с автолизятом иэ пивных дрожжей такие же, как и в примере 4, Для осаждения сиалоспецифнчного бактерияльного лектнна иэл КЖ использовали 472,0 г сернокнслого аммония (707 насыщения). Выход целевого продукта по активности бОХ.Дальнейшее уяеличение процента насыцения (ИН) 804. не ведет к увеличению выхода целевого продукта, Формула изобретения 1, Способ получения бактериального лектина, специфичного к сналовым кислотам, включающий выращивание бактериальной культуры-продуцента глубинным методом на питательной среде с биостимуляторами, отделение биомассы, осаждение препарата сернокнслым аммонием и очистку диализом, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта н упрощения способа, в качестве культуры-продуцента используют штамм бактерий Вас 111 це шееепйег 1- сое ВКПМ В2. Способ по и. 1, отличающ и й с я тем, что при осаждении используют сернокислый аммоний при степени насыщения 60-70 Х.