Способ определения содержания прекалликреина в плазме крови

СООЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК 11 4 С 01 Ч 33/ НИЯ ЕЛЬОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕ НА В ПЛАЗМЕ КРОВ(54) СПО ПРЕКАПЛИ (57) Изо цинской бу опред креина в бретение тносится к медиа именно к спосолли- брет ия - и пособа еского тора Длэ пере ом в пла онечной као активац ляют мет ации 1-1 добацент ри ком 2 ч 1 т отамин 5 мин ста%-нойВ ь ния не е еГОСУДАРСТ 8 ЕННЫИ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГННТ СССР ПИСАНИЕ ИЗО АВТОРСКОМУ С(56) Веремеенко К.Н Волохонская Л.И., Кизим А,И. и др. Методы пределения прекал."икреин-калликре вой системы в крови человека. Медические рекомендации, Киев, 1978 Изобретение относится к медицинской биохимии, а именно к способамопределения в плазме крови компонентов протеолитических систем, и можетбыть использовано в клинико-диагностических лабораториях.Цель изобретения - повышение чувствительности способа,Способ осуществляют следующим образом.В полиэтиленовую пробирку вносят0,4 мл плазмы и монометиламина в конечной концентрации 1,2% и оставляютна 1 ч при комнатной температуре,затем эту пробирку помещают в водяную баню при 25 С и вносят 0,4 млсуспензии 1%-ного раствора каолина,После 1-минутного контакта плазмы скаолином отбирают по 0,2 мл смеси впробирки, содержащие 0,4 мл 0,05 Ммединалового буфера, рН 7,6. Добавля ирхимии,ления содержания прекаплазме крови. Цель изоышение чувствительностипределения за счет специфвязывания свободного ингилликреина - 1 -макроглобутого в известном способе ламин в к кон 2%, выдерживают 1,5- ной температуре. ют О, 2 мл 1%-ного раствора пр сульфата и инкубируют пробы 1 при 37 С, после чего реакцию навливают, добавляют 0,8 мл 2 трихлоруксусной кислоты (ТХУ) контрольные пробы протаминсул вносят после ТХУ, После осажд расщепившегося протаминсульфа пробы центрифугируют 20 мин и 8000 об/мин,В прозрачном центрифугате опр д ляют содержание аргинина по реакции 1Сакагучи в модификации Храмова и соавторов. Для этого к 1 мл центрифугата добавляют 1 мл арствора энтеросептола, 1 мл 2,5%-ного раствора БаОН и 1 мл ХаВгО, После добавления очередного реактива пробы тщательно перемешивают или встряхивают. Интенсивность окраски определяют на ФЭКечающий активацию плазмы каолином, инкубацию активной плазмы с протаминсульфатом, остановку реакции трихлоруксусной кислотой и определение содержания калликреина по аргинину,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью повышения чувствительностиспособа за счет специфического связывания свободного ингибитора калликреина --макроглобулина, перед активацией каолином в плазму добавляютметиламин в конечной концентрации1-1,27 выдерживают 1,5-2 ч при комнатной температуре и определяют содержание прекалликреина,/мин л, при использовании Р п/п прототипа предложенного способа Составитель Н.ЛитвиненкоРедактор М,Келемеш Техред И.Верес Корректор С,Черни Заказ 5535/47 Тираж 789 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 13035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5(светофильтр 11 5, кювета 10 мм),сравнивая опытную пробу с контрольной.Количетсво аргинина в пробах служит мерой определения активированно 5го прекалликреина,Активность прекалликреина выражают в микромолях аргинина, отщепленного от протаминсульфата 1 л плазмыкрови за 1 мин по формуле где Р - количество аргинина в пробе, мкг; 5Ч - обьем инкубированной смеси, мл;обьем плазмы в пробе, мл;С - время инкубации;М - молекулярная масса аргинина; 201000 - пересчет на 1 мл плазмы,При расчете уровня прекалликреина учитывают разность между содержанием аргинина в плазме, активированной в течение 1 мин каолином, и неактиви-,25 рованной плазме.Полученные данные приведены в таблице.Предложенный способ может быть использован для определения истин ного значения преюалликреина при любых заболеваниях, сопровождающихся изменением прекалликреин-калликреиновой системы.Формула и з о б р е т е н и нСпособ определения содержания прекалликреина в плазме крови, вклю 1235678 9 10 11 12 Средней 128,9 112,9 110,2 109,3 122,1 114,8 107,2 103,8 112,6 115,2 103,2 124,6 114+8 215 204,3 198,3 202,0 215,1 216 184,5 200,5 204,0 192,4 202,5 220,6 204+8