Способ определения активности трипсина в биопсионном материале желудочно-кишечного тракта

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 11 4 С 01 Н 33/48 ИЗО САН ЕТЕНИ ЕТЕЛЬС ВТОРСНОУУ в А.М изучения я в клини-,(5 ТР рак 50 Ж варения, чтоет улучшитьгастроэнраиного пищедь, поэзоцелого ряких за яния мем в свою о агностик и оценить терологиче эффективно боле ения ть л И а т обр к Ц ости ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЦТИЯМПРИ ГКНТ СССР(56) Масевич Ц.Г., Угобелинский Э.К. Методикпристеночного пищевареческих условиях, - ТерВ 8, с. 53-57,4) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОС И,ИПСИНА В БИОПСИОННОМ МЛТЕРИЛЛЕ ЖЕЛУДОЧНО-ИШЕЧНОГО ТРАКТА (57) Изобретение относится к медицине, в частности гастроэнтерологии, и может быть использовано для диагностики нарушения пищеварения. Цель изобретения - повышение точности спо соба за счет дополнительной оценки состояния мембранного пищеварения, Для этого биоптат слизистой оболочки тонкой кишки (5-12 мг) помещают в 3 мл охлажденного раствора Рингера и проводят последовательную десорбцию ферментов в шюттель-аппарате. К 0,5 мл полученного смыва биопсионного материала добавляют 1 мп веронал-мединалового буфера с рН 8,6 и 2 мл 40 мгХ раствора бензоил-Ж-аробретение относится к медицине, тности гастроэнтерологии, и моыть использовано для диагностйрушений пищеварения,ль изобретения - повышение точспособа за счет дополнительной гинин-п-нитроанилнда в буферном растворе (вероналовом) с рН 9,2. Этусмесь инкубируют при 37 С в течение1 ч, после чего добавляют 0,5 мл.0,5 Х раствора НС 1 для прекращенияреакции, С помощью спектрофотометраопределяют оптическую плотность надлине волны 410 нм. В качестве контроля вместо смыва берут 0,5 мл раствора Рингера и 0,5 мл 0,5 И НС 1добавляют сразу после раствора субстрата. Далее биоптат гомогениэируют, отделяют супернатант, инкубируют в тех же условиях и определяютсостояние мембранного пищеварения.Активность трипсина определяют поформуле, приведенной в описании изобретения. Активность трипсина рас"считывают как сумму полученных активностей. Предлагаемый способ позволяет повысить точность определенияактивности трипсина в биопсинномматериале желудочно-кишечного тта по сравнению с известным наэа счет дополнительной оценки сосоценки состояния мембранного пищеврения. особ осуществляется следующиом.лучают бинкой кишк оптат слизистои оболо и, последний помещаютр:1000 мед/мг, (А-В) 2 К,фо рмула из о 6 ре тения Составитель Г.Чуич Редактор М,Келемеш Техред И,Верес Корректор С,ЧерниЗаказ 5535/47 . Тираж 789 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101 3 1508151 в охлажденный раствор Рингера (3 мл, Т= +2-4 С) и производят десорбцию ферментов в шюттель-аппарате. К 0,5 мл полученного смыва приливают 1 мл веронал-мединалового буфера с рН 8,6 и 2 мл 40 мгЕ раствора бензоилИ.-аргинин-п-нитроанилида в вероналовом буферном растворе с рН 9,2 и смесь инкубируют при 37 С в тече О иние часа, После этого в смесь добавляют 0,5 мл 0,5 Ы раствора НС 1 для прекращения реакции и спектрофотометрируют при длине волны 410 нм на спектрофотометре Сф, В качестве 15 контрольной пробы вместо смыва берут 0,5 мл раствора Рингера и 0,5 мл 0,5 И раствора НС 1 добавляют сразу после раствора субстрата, Расчет производят по формуле20 где А - оптическая плотность опытногораствора;25В - оптическая плотность контрольного раствора;2 - пересчет на 1 мл смыва;К - коэффициент оптической плстности, равный 0,6; . 30К - коэффициент разведения смыва,равный 0,16;мг - пересчет на 1 мг ткани биоптата;1000 - пересчет на миллиединицы.Активность трипсина определяют каксумму полученных активностей,П р и м е р 1. При определенииактивности трипсина (вес биоптата9 мг, коэффициент разведения К =0,16) 40получены результаты А=О,032; В=О, 01 1,"Р=17,5 мед,П р и м е р 2. При определении активности трипсина; вес биоптата 6 мг;К =0,16; А=О,ООЗ; В=0,001; Р=2,5 мед. 45Для 11 здоровых (добровольцев) и23 больных с поражением тонкой кишкибыло проведено определение активности трипсина по предлагаемому способу. В результате получены следующие данные: активность трипсина на уровне 2-перстной кишки в норме 4,1 ф 0,4 и при патологии 3,00,3; для проксимального отдела тощей кишки в норме 3,70,3 и при патологии 2,70,2,Использование предлагаемого способа позволяет повысить точностьопределения активности трипсина в биопсионном материале желудочно-кишечного тракта по сравнению с известным на 507. за счет дополнительной оценки состояния мембранного пищеварения, что приводит к улучшению диагностики целого ряда гастроэнтерологических заболеваний и позволяет оценить эффективность проводимого лечения. Способ определения активности трипсина в биопсионном материале желудочно-кишечного тракта, включающий инкубацию биоптата в физиологическом растворе с добавлением бензоил- ВЬ-аргинин-п-нитроанилида, обработку пробы соляной кислотой с последующим фотометрированием продуктов реакции при длине волны 410 нм, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повьппения точности способа за счет дополнительной оценки состояния мембранного пищеварения, биоптат предварительно обрабатывают для десорбции трипсина, полученный после обработки раствор инкубируют при рН 8,6 в течение 1 ч и определяют в нем активность трипсина, далее биоптат гомогенизируют, отделяют супернатант, инкубируют в тех же условиях, определяют состояние мембранного пищеварения, а активность трипсина рассчитывают как сумму полученных активностей.