Способ выявления микобактерий туберкулеза

Номер патента: 1493953

Авторы: Андросова, Владимирский, Должанский, Трахт

ZIP архив

Текст

1493953 50 3эуют 0,8 мл полученной взвеси, остальное количество замораживают. По 0,2 мл испытуемой микробной взвеси вносят в 4 лунки полистироловой плас 5 тины, предварительно обработанной поли-Ь-лизином (по 0,05 мл 0,0017-ного раствора поли"Ь-лизина в Фосфатно-солевом буфере рН 7,4 заливают в лунки пластины, через 30 мин его сообирают и хранят при -20 С для повторного многократного использования, оставшийся в лунках раствор поли-Ь- -лизина стряхивают). Инкубация с антигеном продолжается в течение ночи при 37 С. Затем лунки тщательно промывают; трижды водопроводной водой, на 1 мин пластину заливают водопроводной водой с 0,057. твина 20. Процедуру отмывки в такой последователь ности повторяют трижды, Для предупреждения неспецифического связывания в лунки вносят по 0,2 мл 107-ного раствора яичного белка в 0,02 М фосфатносолевом буфере рН 7,4, Через 1 ч 25 лунки трижды промывают водопроводной водой, после чего заливают по 0,2 мл 0,0057.-ного раствора моноклональных антител С 2 Д ВСКК (П) в 0,02 фосфатносолевом буфере с 107 яичного белка и 30 0,057. твина 20 (т,е. по 10 мкг моноклональных антител/0,2 мл).Специфическое связывание антигена и моноклональных антител продолжается в течение 1 ч при комнатной температуре.Далее лунки вновь тщательно промывают: трижды водопроводной водой и 1 мин водой с 0,057 твина 20 и так три раза. 40Для детекции комплекса антигенантитело в лунки вносят антитела против иммуноглобулинов мьппи; меченные пероксидазой. Рабочее разведение 1:1000 в 0,02 М фосфатно-солевом бу фере с 107 яичного белка и 0,057. твина 20. Инкубация продолжается 1 ч при 37 С. 3После описанной трехкратной промывки лунок реакция проявляется с помощью 0,05 М цитратного буфера, 20 мл которого содержат 4 мг ортофенилендиамина и 0,5 мл 0,57.-ной Н,0,. В качестве контроля при идентификации бактериальных культур используют музейные штаммы микобактерий туберкулеза человеческого (положительный контроль) и бычьего видов, а также атипичные микобактерии, получен- ные в 1"ИСК им, Л,А.Тарасевица (отрицательные контроли).В лунках, содержащих микобактерии туберкулеза человеческого вида, цитратный буфер окрашивается в желтый цвет, а в других (отрицательный контроль) он остается бесцветным. Реакция останавливается 507-ной серной кислотой через 5-10 мин,Предлагаемый способ иммунологической идентификации микобактерий туберкулеза человеческого вида является более специфичным по сравнению с прототипом, Достоверность ответа о видовой принадлежности возбудителя позволяет испольэовать этот метод для проведения своевременных противоэпидемических мероприятий в очагах туберкулезной инфекции, позволяет также прогнозировать течение заболевания. Простота и скорость осуществлеНия иммунологического метода идентификации вида МБТ позволяет его использовать в практике фтизиатрии, а также в ветеринарии, где идентификация человеческого вида МБТ, полученных из тканей забитых животныхснимает вопрос об их эпидемиологической опас" ности, поскольку человеческий вид МБТ не является опасным для крупного рогатого скота. Формула изобретенияСпособ выявления микобактерий туберкулеза путем инактивации бактерий, их Фиксации на твердой Фазе, обработки специфическими антителами с последующей идентификацией иммунного комплекса меченной ферментом антиглобулиновой сывороткой, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повьппения специфичности выявления МдсоЪасйегцш цЬегсц 1 овдвмико- бактерии инактивируют хлороформом в течение 4 ч, а в качестве специфических антител используют моноклоиальные антитела, продуцируемые гибридомным клеточным штаммом С 2 Д ВСКК (П),

Смотреть

Заявка

4238083, 28.04.1987

МОСКОВСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ТУБЕРКУЛЕЗА МЗ РСФСР, ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ КАРДИОЛОГИИ ВКНЦ АМН СССР

АНДРОСОВА МАРИНА ВЛАДИМИРОВНА, ВЛАДИМИРСКИЙ МИХАИЛ АЛЕКСАНДРОВИЧ, ТРАХТ ИЛЬЯ НАТАНОВИЧ, ДОЛЖАНСКИЙ ВАЛЕРИЙ МАРКОВИЧ

МПК / Метки

МПК: G01N 33/53

Метки: выявления, микобактерий, туберкулеза

Опубликовано: 15.07.1989

Код ссылки

<a href="https://patents.su/2-1493953-sposob-vyyavleniya-mikobakterijj-tuberkuleza.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ выявления микобактерий туберкулеза</a>

Похожие патенты