Способ ферментативного превращения соласодина

сооз соеетсииясоциАлистичео ввРЕСПУБЛИК эр 4 С 12 0 ЫТИИ с 1 ЗОБРЕТЕНИ(71) Институт молекулярной б ии и биохимии АН КазССР(56) Копдо Е., Иазцо Е. Рзецдо-сгуз-. , м 11 о 1 егвепгай 1 оп о 1 зсего 1 д: а пей ргосезз аког ргераг 1 пд ргедп 1 зо 1 опе Ьу в 1 сгоогдап 1 зюз.-,1. Оеп. И 1 сгоЬ 1 о 1 1961, ч. 7, У 2, р. 113-117.Мартинек К. и др, Доклады АН СССР 1977, 236, с, 920-923,(57) Изобретение относится к биотехнологии, биологии и медицине. Целью изобретения является увеличение выхода дегидрированного соласодина, что приводит к увеличению возможности трансформации его в активном центре иолог риглазова РЕВРА ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕ ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ферментов, снижение денатурирующегодействия инкубационной среды и повышение выхода продукта, Способ заключается в применении однофазной трехкомпонентной системы для растворениясоласодина, содержащей диметнлсульфокснд, хлороформ и водный раствор со".ласодиндегидрогенида в соотношении97:2:. В однофазной системе отсутствуют границы раздела Фаз и нет затрудне".ний при связывании субстрата Ферментоми освобождении продукта реакции. Такаясистема позволяет осуществлять переносэлектронов при использовании искусственной цепи переноса .электронов отэлектронов от кофермента к тетразолевым солям, что необходимо при регист"рации активности ферментов. Предлагаемая трехкомпонентная система не оказывает деиатурирующего действия наферменты. Использование способа позволяет увеличить выход дегидрирован-.нога соласодина.Изобретение относитсе к биотехнологии иможет быть использовано в биолОГР 1 и зеЕзимох 101 Епе у микробиологиее и медицине.Ьехеь изобретения - увеличе 1111 е вы- .5 , хода дегидрированцого соласодина,СИОСОЕе эакх 1 ючается в цроведеРЕии иикубации соласодииа с соласодиндегидрогецаэой ез смеси деЕметилсульфоксееда )О (ДИСО), хлороформа и воды в соотношении 97:2;1 (по объе 1 еу), Фермент выце;. лают .из ткани растений (семейство ао)апе 1 п 1) или микроорганизмов, напри" мер гриб Аэрегц 111 ееэ осЬгасеееэ, Полу чеццый Фермептный препарат имеет удельцуЕо активность 40 ед/мг белка. Концентрация белка в препарате составляет 0,5 мг/мл, Белковый препарат находится в 0,05 И трРЕС-НГ 1 бу 111 ере, 20 рН 7,4. Соласодин растворяют в смеси ДМСО-х 1 ороформ,(9712). до достижения предельной концентрации 0,1 мг/мп, В полученный раствор вводится Ферме 11- тный препарат соласодиндегидрогецазы 25 так, чтобы количество его составило 1 х. от объема раствора соласодина. Приоблюдении укаэацеЕых соотношений ДИСО,оуоформа и водной Фазы, содержащей 11 ермент (9 Т:211), образуется гомоген" 30ый раствор в котором эффективно Еротекаег превращение соласодина. Зыод дегидр 11 роваццого соласодиЕеа воэ" атает в 10 по сравцеиею с Резвест-".Еми способами.Т 1 ,З.Ф., р и и е р 1. Соласодин раство.":яют в 100 мл смеси ДМСО; хлороформ96:3) до достижения концентраций, 11 г/мх 1, затем добавляют 1 мл ФерЕейтпого препарата саласодиндегидро- )Оецазы, раствореццого в 0,05 И трцс,Н 01 буфере, рН 7,4 содержащего оаст.Ф1 Ор ИЛДФ и концентрации О, м 1/мл 6 0 5 мг белка цамл раствора с 1 дчьРЕой активностью ;0 ед/м 1. Смесь ее образует истпццого раствора, рас-. (хеаивается ца две Фазы; ДИСО 1 1 О 1 хлороформ 1 ую э Количество ОесисхЕеп Р)ого соласодица определяется спектро" 4 отометрцеески по поглощец 11 ю УФ при Молне 340 цм, специфичной дпя НЛДЮП, 50 с 1 бразовавше 1 ося в зквРЕвапецтньРх коли- ЧествРЕХ с Окисленным соласоди 11 ом в эоде каталнтеп 1 еской реакции. КолРечество образоеавшегося 1 ЩФН ОммохЕь/мин.55П р и и е р 2, Соласодиц раство"роняют в 100 мл смеси ДИСО: хлороформ(,96.2) до достижения концентрации0,Р ь 1 гхмл. Затем добавляют 2 мп Фермеитного препарата сласодиндетидро: геназы. Наблюдается расслоение систе- мы . Количество образОвавшегося 1 ЛДФН 12 ммоль/мин.П р и м е р 3. При соотношении ДИСОЕСНС 1 э.Н О = 9712: обРазУетсЯ гомогенвый раствор, Количество образовавшегося НАДФН 32 мкмоль/мин.При использовании такой Однофаэной трехкомпонентной системы для растворения соласодина, содержащей диметилсульфоксид (ДИСО), хлороформ (СНС.1 ) и воду (Н О) в соотношении 97:2:) отсутству 10 т границы раздела Фаэ и иет затруднений при связывании субстрата Ферментом и освобождении продукта реакции (пример 3). Такая система позволяет осуществлять перенос электро" нов при использовании искусственной цепи переноса электронов от кофермента к тетразолевым солям, что необхо- . димо при регистрации активности Ферментов.Предлагаемая трехкомпонентная ситема ДЕСО-СНС 19-Й О не оказывает де" натурирующего действия на ферменты (например, на глутамат- и соласодин" дегидрогеназы) прн использовании ее в качестве.инкубационной среды.Для установления указанного соот" цошегпЕя компонентов расслаивающиеся смеси хлороформа и воды (1:1) титровали ДМСО до исчезновения границы раздела Фаз. Установлено, что увеличение содержания хлороформа в смеси приводит к усилению денатурирующего действия ее на Ферменты, а прн увеличении содержания воды наблюдается выпадение соласодина в осадок, Предельная растворРемость соласодина в данРеой системе 0,4 мг/мл.1 аким образом. использование предлагаемого способа позволяет увеличить выход дегидрированного соласодина при Ферментативном превращении соласодинаФормула и э о б р е т е н и яСпособ Ферментативного превращения соласодина вкл 10 чающий инкубацию соласодина с соласодиндегидрогенаэой в присутствии органических растворителей, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью увеличения выхода дегидрированного соласодина, инкубацию со" ласодина с соласодиндегидрогеназой проводят,в смеси дюетилсульфоксРеда, хлороформа и воды в соотношении 97;2:1 (по объему).