Штамм 101 39-продуцент нейраминидазы холерного вибриона

Номер патента: 1210278

Авторы: C12R 1:19, Власов, Мишанкин, Рябухина, Шиманюк

ZIP архив

Текст

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 1) 4 А 61 К 39/1 С 12 К 1: 19 12 Я 9 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТА ВТОРСИОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ К(54) ШТАММ ЕзсЬегдсЬ 1 а со 1 д НВ 10рЮ 39 - ПРОДУЦЕНТ НЕЙРАМИНИДАЗЫХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА ну государдовательский 7)(5 ШТАММ Ея рКР 39, У 124 ственного нау Ьегсп (коллекц но-иссле дартиэац биологич ню института ста медицинских и ратов им. Л.А цент нейрамин риона,льств арасе эы хо ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(56) Авторское свидетеУ 973613, кл. С 12 Н 9 со 11 НВ 101 ия Государдовательского ии и контрол еских препаича) - проду ерного виб12102 7 Фермента ВНИИПИ Заказ 294/1 Тираж 596 Подписное Произв,-полигр. пр-тие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для получения нейраминидазы холерного вибриона.Целью изобретения является созда ние штамма, способного к продукции больших количеств нейраминидазы холерного вибриона и обеспечивающего безопасность работы.Штамм сконструирован на базе штамма кишечной палочки НВ 10 1 при проведении генноинженерных работ путем введения в него с помощью генетической трансформации искусственно полученной рекомбинантной плазмиды рЮ 39. Эта плазмида несет в своем составе ограниченный Ндпй 111 - сайтами фрагмент хромосомной ДНК возбудителя холеры биотипа эльтор (штамм 5879) с генами синтеза нейраминидаэы. Плазмида имеет молекулярную массу 7,7 мегадальтон, способна амплифицироваться в присутствии хлорамфеникола и,функционирует на основе вектора рВК 322. Она имеет 4 участка узнавания для эндонуклеазы рестрикции Ндпй 111, 2 - для Есо К Ч, 4 - для Есо К 1, по 1 - для Ба 1 С 1, Ваш Н 1, РБ 1 и 0 - для М 1 п 1.Штамм ЕзсЬегсЬа со 1 НВ рКВ 39 депонирован в коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича ИЗ СССР под номером 124.Культурно-морфологические признакиКороткие палочки размером 1,0- 2,0 х 0,3-0,4 мкм. Неподвижны. Грам О отрицательны с умеренно выраженным полиморфизмом. На агаре 1.В и Хоттингера образуют мутные колонии серовато-белого цвета. Вызывают помутнение бульона Хоттингера с образова нием хлопьевидного осадка.На минимальной среде зависят от тиамина, лейцина и пролина, Устойчивы к антибиотикам пенициллиновой группы (более 100 мкг/мл) за счет 50 образования пенициллиназы. Ферментируют с образованием кислоты и газа 8 ,2глюкозу, арабинозу, маннозу, галактозу. Не ф.рментируют лактозу, Несутмутацию в гес А гене хромосомы, всвязи с чем проявляют чувствительность к УФ-лучам и метилметансульфанату. Лизируются кишечными фагамиТ и лямбда-вир.Штамм авирулентен для белых мышей и морских свинок при подкожном,аэрозольном и внутриконьюнктиваль 9ном заражении в дозе до 10 м.кл.,что сообщает ему преимущества врежимном отношении,Штамм ЕзсйегсЬа со 1 124 образует в контрслируемых условиях большие количества нейраминидазы холерного вибриона, в 8-10 раз превышающие уровень продукции фермента родительским штаммом Ч 1 Ьг 1 о сЬо 1 егаее 1 ог 5879.П р и м е р, Для выращиванияклеток предлагаемого штамма можноиспользовать самые разнообразныепитательные середы, включая бульонМартена (рН 7,6) и бульон Хоттенгера (рН 7,4), дрожжевой бульон (рН 7,3)и бульон ЛБ (рН 7,1), различныепентоны и другие среды,Культивирование клеток штаммаосуществляют в условиях энергичноговстряхивания на шюттель-аппарате(175 об/мин) в колбах с ЗЕ-ным раствором бактопентона Дифко (рН 7,6-7,8),дополненного О, 17 хлорида кальцияи 0,5 Е хлорида натрия, при 30-37 Св течение 18-22 ч. Далее колбыоохлаждают до 4 С, клетки отделяютцентрифугированием при 6000 об/минв течение 20 мин, а надосадочнуюжидкость используют в качестве источника целевого фермента. Актив -ность нейраминидазы в жидкости ис-.следует тиобарбитуровым методомУоррена. Обычно в 1 мл культуральной жидкости содержится 300-400 ед,Штамм Е,со 1 з 124 стабильно образует нейраминидазу холерного вибриона на искусственных средах, что значительно упрощает процесс получения и очистки целевого продукта.

Смотреть

Заявка

3781026, 09.08.1984

РОСТОВСКИЙ-НА-ДОНУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ПРОТИВОЧУМНЫЙ ИНСТИТУТ

МИШАНЬКИН Б. Н, ШИМАНЮК Н. Я, РЯБУХИНА О. Ю, ВЛАСОВ В. П

МПК / Метки

МПК: A61K 39/108, C12N 9/00

Метки: 39-продуцент, вибриона, нейраминидазы, холерного, штамм

Опубликовано: 23.02.1987

Код ссылки

<a href="https://patents.su/2-1210278-shtamm-101-39-producent-nejjraminidazy-kholernogo-vibriona.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Штамм 101 39-продуцент нейраминидазы холерного вибриона</a>

Похожие патенты