Способ выявления холерных вибрионов

О П И С А Н И Е (11) 514496ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз СоветскихСоциалистицескихРеслублик К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ) Приоритет -асударстаенныи комитетСовета Министров СССРпо делам изооретеннйи открытий(72) Авторы изобретеии азиатский научно исследовательский прэтивэчумныи ед 71) Заявитель институт ОЛЕРНЫХ ВИБРИОНО(дигидрэхлпоявляетсяцэ. ид ткэ е и заннь видазы ув (10 клипа) 68 аммов неагИзобретение относитсяпредназначено для ферментной диагностикимикробов,Известен способ выявления холерныхвибрионов, заключаюшийся в посеве исследуемого образца на жидкие среды с последующим пересевом всех культур на плотную среду и дальнейшим изучением свойстввыделенных культур.Однако данный способ не обеспечиваетмалого объема выполняемых работ и быстроты получения ответа.С целью сокрашения объема выполняемых работ и ускорения ответа в предлагаемом способе пересеву на твердую среду и двльнейшему исследованию подвергают лишь образцы, давшие положительнуюреакцию на оксидазу в жидкой среде,Способ выявления холерных вибрионовосуществляют следуюшим образом,Во вторую пептонную воду посл нкуобации в течение 6-9 час при 37 С добаляют 2-4 капли на 1 мл среды 0,04-0,05%-ного свежеприготовленного водного раствора диметилпарафенилендиамина После пересева из первой среды накопления (засеянной исследуемым материаломна холеру) вэ втэрую среду накопления( 1%-ная втэрая пентонная вода), последнюю .инкубируют при 37 С в течение 6-9 час,Затем во втэрую среду накопления добавляют из расчета 2-4 капли ца 1 мл средыО, 04-0, 05%-ного свежепригэтэвленнэговодного раствора диметилпарафенилендиамина (дигидрохлорида) с рН,0. При наличии вибрионов на поверхности второй сре ды накопления через 1-10 мин после добавления реактива появляется четкое розово-малиновое кольцо (положительная проба на оксидазу), Для дальнейшего бактериологического исследования на холеру 20 берут только пробы с положительным результатом на оксидазу.П р и м е р. Ука м способом определен фермент окс 223 штаммовхолерных вибрионо ассического и 25 213 Эль-Тор биотштСоставитель В. ОстапчукТехред А. Богдан Корректор Н. Ковалева Редактор Т. Девятко Заказ 732/69 Тираж 575 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская набд. 4/5 филиал ППП "Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 глютинируюшихся вибрионов и 199 штаммов бактерий кишечной группы (возбудителя дизентерии, брюшного тифа, паратифа А,В, салмонеллеза, псевдотуберкулеза и кишечная палочка), засеянных в 1%-ную пелтон ную воду (рН,8) через 6-9 и 24 часоинкубирования в термостате при 37 С.Во всех сроках наблюдения положительную реакцию на оксидазу дают все штаммы холерных, не агглютинирующихся вибрионов 10 а бактерии кишечной группы дают отрицательный результат. На выявление фермента оксидазы не влияет бактерий рода ЕсЬеиспа,5 аРюоиеЦДа,д вСйоЬасЕе(в дозах 10 -10 ) при их совместном выращивании с холерными и неагглютинирующимися вибрионами (в дозах 10 -8 -10 ).В первую 1%-ную пептонную воду (1 среда накопления) засеяны испражнения, Е.СоВ и штамм вибриона в дозах, соответственно 10 -10 микробных клеток, В этойвсерии опытов использованы 6 штаммов холерного вибриона обеих биотипов и 2 штам- р ма неагглютинируюшихся фО" холерной сывороткой вибрионов (НАГ), Через 6 час сделан пересев во вторую среду накопления и через 7 час отмечали положительную реакцию на оксидазу во всех пробирках за ЭО исключением пробирок, где засеяны лишьЕ, Со Р ( испражнения.Положительная реакция на оксидазу отмечена (в посевах на 1%-ную пептоннуюводу) у различных штаммов вибрионов взависимости от посевной дозы в сроки 6-9 час. Четкая положительная реакция наоксидазу отмечалась при концентрации вибрионов в 1 мл 10 клеток,8Контакт в течение 9-24 час диметилпарафенилендиамина в 1%-ной пептонной водесо штаммами холерных и НАГ-вибрионов неприводил к изменению высеваемости, морфологии, подвижности, агглютинабильности,биохимических и серологических свойству вибрионов,Формула изобретения Способ выявления холерных вибрионов в исследуемом материале путем посева на жидкие среды с последующим пересевом на плотную среду и дальнейшим изучением свойств выделенных культур, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, пересеву на твердую среду и дальнейшему исследованию подвергают лишь образцы, давшие положительную реакцию на оксидазу в жидкой среде.