Способ получения аналогов линкомицина и клиндамицина

(1% О 1) ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Н ПАТЕНТУ 1 - в.вв Он . тем, чтоа гидрируют где К о т л- этил и чающ твин кат ние обще бут й с зать орму прису соеди кнце значе ет Х -л-т хлорме ин т по пр м 23. 11. 79 при 19,05.80 при б) Рил в ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССОРо юююю нннввюню н вою ювн(72) Роберт Дейвид Виркенмайер (. (71) две Ащрюн Компани (ПЯ)(54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНАЛОГОВ шнковнюнн н вннюнвннвн овй формулы Я нЪо н-а-Си,О 1Изобретение относится к способу получения новых соединений аналогов линкомицина и клиндамицина структурной формулы К СНО БС-С 1 К охлажденному до 10 С раствору67 г (0,357 моль) аминокислоты НС 9(0,714 моль) тризтиламинаацетонитрила одной порциейют 47,6 г (0,354 моль) изо;формиата. Эту смесь (раствмешивают при 10 С в течениоРаствор Б приготовляют расем 97,7 г (0,357 моль) 7 Св теплой смеси 1500 мл ацетона и1500 мл воды, охлаждают до 30 С иодной порцией добавляют к растворуА. Реакционную смесь перемешиваютпри 25 С в течение 18 ч, ацетон и Смесь из 4,05 г (0,01 моль) исходного материала, 40 мл воды, 60 мп метанола, 1,0 мл 373-ного хлористого водорода и 8,0 г катализатора на основе двуокиси платины восстанавливают в гидрогенизаторе Парра под давлением 3,4 кг/см в течение 3 ч, Данные ТСХ реакционной смеси на силикагелевых пластин 2Цель изобретения - получение, основанное на известном методе, новых антибиотиков, обладающих более сильными бактериостатическими свойствами по сравнению с широкораспространенными аналогами линкомицином и клиндамицином. 1. Амид-цис-этилкислоты 7-СМТЛ ), где МТЛ - метиламинад. ацетонитрил удаляют в вакууме. Белый, мягкий остаток отфильтровывают и кристаллическое вещество собирают и высушивают с получением 95 г чистого продукта, Переработкой фильтрата путем хроматографии п чают еще 10 г продукта. Общий в составляет 737Подсчитано: С 50,42; Н 6,22;И 6,92, Я 7,92, С 1 8,76.С,НС 1 И,ОР,Найдено: С 50,67; Н 6,40;И 6,64; Б 7,90; С 1 8,70.о 3 оСНССТ; (С,0) + 293 С Часть 11. 50 ках в системе СНС 9 . метанол (б:1)показывают, что весь исходный мате риал превращен в два более полярных вещества, находящихся в соотно шении , 1:1. В целях отделения ка тализатора реакционную смесь отфильтровывают и Фильтрат концентрируют в вакууме с получением белого мягкого кристаллического ве1169543 МБК, мкг/мп Организм Штамм Соединение Ч ици 6685 6686 0,5 6687)5 ВСарЬу ососсцв ацгецв 1 гергососсцв гаесасхв вгерососсцв руоаеп Бгер 1 ососсцв чхгИапвПдр 1 ососсцв рпецшопдае 1Вдр 1 ососсцв рпецшопдае 11ЕвсЬегдсЬза со 1 д Таблица 1 25 25,06 862 8 5,6 ше 1 ап ьпо реп с Вас Сего Ые 6512 0 1 зазопдз 6518,06 ТозйгЫжш егЕц 6508 7,8 03 0 0,06 гойецз чцТаг 1 зКЕеЬзе 11 а рпецшопх а 1 шопеТ 1 а зсЬоСгшце Рзецс 1 ошопаз аегц 8 жоз Указанные испытания проводятсяледующим образом,Значение МБК обоих соединений относительно аэробных бактерий определяют методом последовательных разведений. В качестве питательной среды используют бульон из мозга и сердца. Пластинки инкубируют при 37 С в течение 20 ч. Штаммы Яацгецз ЧС 6685-6696, выделяющиеся в клинических условиях,асйегоЫез ЕгауТдз ВасегоЫез шеХапдпо 8 епсцСоозйгЫд регГгдпдепз СТозСгЫжш сайачегдз Продолжение табл. Штамм3Клиндамицин Соединение являются устойчивыми к одному или более торговым антибиотикам. Символ ПС означает зарегистрированный товарный знак коллекции ТЪе Пр 1 оЬп Сошрапу СцТСцгцге Со 11 ес 1 оп, в г. КаТшазоо в.штате Мичиган, из которой по запросу можно получить указанные культуры.МБК клиндамицина и соединения Ч относительно грам-положительных и грам-отрицательных анаэробных бактерий представлена в табл. 2.Т а б л и ц а 21169543 12 ИБК, мкг/млЧС Организм 2,0 0,5 6505 6 0,03 с 0,03 6521 6506 0,25 0,06 0,50 6507 6834 7 э 7 3,9 6857 125 250 6858 3,9 3,9 6860 500 500 6861 2,0 0,12 6564 0,06 6575 0,060,03 6515 2,0 2,0 6522 0,50 1,0 5920 0,25 0,25 6516 0,12 0,06,0,06 6324 3,9 15,6 0,06 0,06 0,50 0,25 0,06 0,05 Рерйососсцз шапиз 1 0,03 0,06 0,12 0,12 С 1 овСгЫизш вогйеЕЕИ С 1 ов Сг Идиш гепйатп СЕовйгЫдиш Вогцйпцш А СЕозйгИыш ВИегшепйапв СЕовйгЫцш йхНьсдЕе РгордопдЬасгегыш аспев ЕцЬасСегдиш Ишовиш.ЕцЬасгегдцш 2 епСцш Асйпошусев паез 2 щЫЫРивоЪасгегъцш пис 2 еайцш РезоЬасйегжш чагцш РцвоЬасСегдцш песгорЬогиш 6568 Рерсососсиз авассЬаго 3 цйсцв 6214 Рерйососсцз аагояепев 6319 Регйовйгергососсив апаегоЬии 6321 Указанные испытания проводят следующим образом.Приготовляют серию разведений соответствукщего антибиотика в отношении 1:2 в бульоне Шедлера (по 1,О мл), а затем добавляют 9,0 мл Продолаение табл. 2 Клиндамицин Соединение Ч расплавленной при 47 С агаровой среды Вуилкенса Чалгрэна. После смешивания с антибиотиком агаровую среду выливают на чашки Петри (100 млЮО мм) и перед засевом последниевыдерзивают в течение ночи. Культу+ЭД , мг/кг 0 ры засеивают штрихам на чашки с агаром Вуилкенса-Чалгрэна и, выращивают их в течение 48 ч при 37 С. Собирают газон микробов и готовят суспензию клеток в бульоне Педлера до мутности 0,5 МаЕаг 7 апй Бйап 4 агд (10 клеток/мл). Полученную суспенЭзию пипеткой переносят в резервуары аппарата БСеегз гер 1 саГог и из него около 1-2 мкл наносят на поверхность агаровых,пластинок. После высыхания посеянной суспензии в течение нескольких минут пластинки помещают в сосуд (857 И, 107. Н, 57. СО )ои инкубируют при 37 С в течение 72 ч. МБК означает минимальную концентрацию действующего начала, задерживающую рост бактерий, причем очень тонкая пленка бактерий, т.е. менее 3 колоний, считается отрицательным результатом. Агаровая среда Вуилкенса-Чалгрэна.Растворитель - следующие компонен. ты, г, в 1000 мл дистиллированной воды (рН 7,0, 7,2);Триптиказа 10Гелисат 10Дрожжевой экстракт 5глюкоза 1ИаС 5 Микроорганизм и способ применения действующего началаУказанные испытания проводят следукщим образом.Группы по 10 обычных лабораторных мьппей штамма СРвесом 18-20 г внутрибрюшинным путем заражают приСвободный от аргининаНатриевая соль пи 5ровиноградной кислоты 1. Агар 15Добавляют растворы гема и витамина К с получением окончательной 10 концентрации 5 мкг/мл гемина и витамина К. Выдерживают автоклав при121 С в течение 15 мин в аэробныхусловиях. Основной раствор гема:0,5 г гемина + 10 мл 1 н. МаОН + 15 + 990 мл Н. Выдерживают автоклавпри 121 С в течение 12 мин. Добавляют 10 мл основного раствора налитр среды. Основной раствор витамина К. 0,05 мл раствора витамина 2 О К + .20 мл 957.-ного этанола. Стерилизуют фильтры. Добавляют 0,2 млосновного раствора на литр среды.Среднее значение ЛД (внутрибрюшинно у мышей) соединения У из двух 25 идентичных определений составляет592 мг/кг,что приблизительно в двараза превышает ЛД 50 клиндамицинаНС 1, т.е, острая внутрибрюшиннаятоксичность соединения У приблизи- ЗО тельно в два раза меньше, чем уклиндамицина НС 1.Испытания на защиту мьппей. Методика приведена в табл. 3.Таблица 3 близительно 100 дозами ЛД нормированных суспензий клеток бактерий, которые предварительно замораживали при -170 С, а затем быстро размоораживали и должным образом раэбавля"1169543 16 ли. Сразу-же начинают лечение и про/должают его в течение 4 сут (препа-, рат вводят раз в день, первый суточ. ный период равен единице. Группы необработанных зараженных мышей служат в качестве вирулентного контро" ля культуры.Через 7 дн. после начала лечения выживших животных умерщвляют и вычисляют среднюю ЗД антибиотикаи его 953-ный доверительный интервал в пересчете на смертность среды обработанных животных согласно методу Спэрмена и Карбера с помощью ЦВМ 360. Р-Цис-изомер УА при испытании с рассмотренным в связи с табл. 1 бульоном из мозга и серд- . ца оказывает антибактериальное действие. Результаты испытаний представлены в табл. 4.Таблица 4 Значения МБК, мкг/мл, Ч 1 у различных бактерий представлено в табл. 5. Таблица БК Ч 1 Микроорганизм О 0,125 76 Я. ацгецв 0,25 570 746 0,062 Я, Гаеса 11 в 0,25 694 0,008 152 Б,руоеепев П, рпецшопдае 41 0,016 45 31,258 7,8 Е. со 13.К рпецшоп 1 ае УС МБК,мкг/мл Микроорганизм 25 Б всЬоййшце 11 егд 126 31,2 250 76 Я, ацгецв Рв. аегцддпоза 95 125 1000 570 125 746 Испытания проводят по методу,указанному в примере 1. Действиевещества Ч 1 испытывали на обычныслабораторных мышах, которых дляэтой цели заражали бактериями, причем его сравнивали с действием Ч.Результаты опытов показывают, чтона Р, рпецшоп 1 ае и вещество 111в мьппах и вещество ЧТ оказываетгораздо. большее действие чем вещество У. Против Я, ацгеца и 4 Я. пешовусцсцв вещество Ч 1 обладаетв основном такой же активноСтьюкак и вещество Ч. Я.Геса 1 дв 694 1000 62,5 152 Б, руоеепезО.рпецшоп 1 аеЕ, со 11К,рпецшоп 1 ае 62,5 41 11000 45 1000 58 Я всЬог.сшце 1 Тегд 126 1000 Рв, аегцр.поза 951000 Составитель Ю. БелоусовРедактор В. Данко ТехредЛ.Мартяшова Корректор В.Бутяга Юф Заказ 4633/57 Тираж 354 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5