Питательная среда для выявления и количественного учета анаэробных бактерий

"707957 К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ополнительное к авт. свид-ву 2) Заявлено 29,08,77( 51)М. Кл.С 12 ВЗ/ОС 12 К 1/О 2523097/28-13 присоединение вкн .йй Гкудерстмииьй кенвпт СССР ю дтлвн изебрейе и Онрьтвй,18 (088.8 1.80. Бюллетень Ия описания 05,01,8 а опублнкова, Я, Овруцкая,72) Авторы нзобретеии Погодаева Новицкая ц Всесоюзный научно-исследовательский институт о производству продуктов питания из картофеля(71) Заявитель 54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ И КОЛИЧЕСТИННОГО УЧЕТА АНАЗРОБНЫХ БАКТЕРИЙ формазон дое Китт-Тароц-.ествить не тольствецный учетов в исследуемы вается в красный трибавление этой соли кци дает возможностько выявление, но и ко щл ос анаэробных микрооргобъектахОднако из-аа сво щз ного, солоо рующего по- а среда неск лтого цветарозовой окра цц и явлеци ичия и учета обенности пр удобна для выявленияанаэробных бактерий, впроизводстве картофеле в. является н Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно кмикробиологическому контролю производства картофелепродуктовИзвестные питательные среды, такие как Мак-Кой, Мак-Кланга, Китт-Тароцци и др., для выявления наличия анаэробных микроорганизмов, цз-за сложности их применения практически це используются для количественного учета этих мцкроор 1 О гани змов.Известна питательная среда для выявления и количественного учета анаэробных бактерий, содержащая источники углерода и азота, пептон, 2,3,5-трифецилтетразолий хлористый, компонент, поглощающий кислород, и вазелицовое маслоИ.Эта среда Китт-Тароцииаиболее близкой к описываемой.20Благодаря тому, что в результате редупирующей способности бактерий бесФ цветная тетразолиевая соль 2,3,д-трцфецилтетразолия хлористого восстацавлиБель изобретения - создание питательной среды, обеспечивающей ускоренное выявление и более точный учет ацаэробцых бактерий,Поставленная пель достигается тем,что указанная питательная среда дополнительно содержит дрожжевой автолизат,аскорбиновую кислоту и углекислый кальций, а в качестве источника углерода иазота и компонента, поглошающего кислород, используют соответственно карто3 707,.фельный отвар и картофель при следующем соотношении компонентов, г/л:Картофель 200-300Пелтон 10 15Дрожжевой автолизат. 20-25Аскорбиновая кислота 0,0001-0,000152, 3, 5-три фени лтетразолий хлористый 0,023-0,027Углекислый кальций 18-20Вазелиновое масло 70-80Картофельный отварОстальноеДля приготовления питательной среды200-300 г очищенного картофеля нарезают кубиками и помещают в пробирки состерильным углекислым кальцием, взятымиэ расчета 10-12 г на 1 л добавляемогокартофельного отвара,Картофельный отвар готовят следующим образом, 2200-300 г неочищенного, тщательноотмытого и нарезанного на кусочки картофеля варят в.1 л воды в течение 2530 мин, фильтруют через бумажныйфильтр и, добавляя водудоводят фильтрат до первоначального объема. К полученному отвару добавляют 10-15 г пеп-тона, устанавливают рН 7,4-7,6Пробирки с картофелем и углекислымкальцием заливают приготовленным картофельным отваром до высоты 11-13 см,на поверхность которого наносят стерильное вазелиновое масло слоем 0,7-1,0 см(70-80 г/л среды) и стерилизуют 2530 мин при 125 С.Перед посевом пробирки со средойподвергают регенерации (кипячению втечение 25-30 мин для удаления растворимого кислорода с быстрым охлаждением среды до 40 С). Затем в среду вносят 0,023-0,027 г 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого, 20-25 г стерильногодрожжевого автолизата и 0,00010,00015 г стерильной аскорбиновой кислоты (все компоненты взяты из расчетана 1 л среды.),На подготовленную таким образом питательную среду высевают смыв с полуфабрикатов и готовых картофелепродуктов. Содержание анааробных и факульта тивно-анааробных бактерий в 0,1 г сухого картоф 15 ельноо пюре 2,5 х 10 2,0 х 10 1,5 х 10 3,5 х 10 25 х 10 1,5 х 10 7,5 9,0 2,0 14,5 18,0 в р в В результате ности бактерий фенилтетразолий вается в красны рый окрашивает зовы и цв Для приготовления ого картофеля наомеш.д 1 т в пробирки средыреэаю редуцирующей способесцветный 2,3,5-трихлористый восстанавлии трифенилформазон, кото среду в интенсивно-роПредложенная среда позволяет обна.ружить присутствие анааробных бактери 57 4через 6-11 ч в зависимости от инфниированности полуфабрикатов и готовой продукции,При количественном учете анааробных бактерий подсчет количества анааробов производят по скорости появленияи степени интенсивности розового окрашивания с помощью специальной табли. цы, эмпирически составленной по подсче 0 там высевов методом Мак-Реди и трубки Вейона. При меры приготовления сре ды.П р и м е р 1. Для приготовлениясреды 200 г очищенного картофеля нареЗ 0 зают кубиками и помещают в пробиркисо стерильным углекислым кальцием, взятым в количестве 20 г на 1 л добавляемого картофельного отвара.Картофельный отвар готовят следуюЗБ щим образом.300 г неочищенного, тщательно отмытого и нарезанного на кусочки картофеля варят в 1 л воды в течение 30 мин,фильтруют через бумажный фильтр и, добавляя воду, доводят фильтрат до пер оначального объема, К полученному отвау добавляют 12 г пептона, устанавлиают рН. 7,6.Пробирки с картофелем и углекислымкальцием заливают приготовленным картофельным отваром до высоты 12 см, наповерхность которого наносят вазелиновое масло слоем 0,7 см 70 г на 1 лсреды) и стерилизуют 30 мин при 125 С,После регенерации среды, осуществляемой перед посевом, в нее вносят0,027 г 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого, 25 г стерильного дрожжевогоавтолиэата и 0,00015 г стерильной аскорбиновой кислоты,Пример 2,253 г очищент куС,;ками и и707 Г) со стерильным углекислым кальцием,взятым в количестве 19 г/л добавляемого кар-офельного отвара.Картофельный отвар готовят следующим образом,250 г неочищенного, тщательно отмытого и нарезанного на кусочки картофеля варят в 1 л воды в течение 30 мин,фильтруют через бумажный фильтр, и, добавляя воду, доводят фильтрат до перво Оначального объема. К полученному отварудобавляют 10 г пептоца, устанавливают рН 7,5. Пробирки с картофелем и углекислымкальцием заливают приготовленным кар 15тофельным отваром до высоты 12 см, наповерхность которого наносят вазелиновое масло слоем 0,9 см (75 г/л среды)и стерилизуют 30 мин при 125 С.0После регенерации среды, осуществляемой перед посевом, в нее вносят0,025 г 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого, 23 г стерильного дрожжевогоавтолизата и 0,00013 г стерильной аскорбиновой кислоты.П р и м е р 3, Для приготовлениясреды 300 г очищенного картофеля нарезают кубиками и помешают в пробиркисо стерильным углекислым кальцием, взятым в количестве 18 г/л добавляемогокартофельного отвара,Картофельный отвар готовят следующим образом,200 г неочищенного, тщательно отмытого и нарезанного на кусочки картофеляварят в 1 л воды 30 мин, фильтруют через бумажный фильтр и, добавляя воду,доводят фильтрат до первоначального объема. В полученный отвар вносят 35 гпептона, устанавливают рН 7,6.Пробирки с картофелем и углекислымкальцием заливают приготовленным картофельным отваром до высоты 12 см,на поверхность которого наносят вазелиновое масло слоем 1 см 80 г/л среоды) и стерилизуют 30 мин при 125 С,После регенерации среды, осуществляемой перед посевом, в нее вносят 0,023 г2,3,5-трифенилтетразолия хлористого,20 г стерильного дрожжевого автолизата и 0,0001 г стерильной. аскорбиновойкислоты. Питательная среда для выявления и количественного учета анаэробных бактерий, содержащая источник углерода и азота, пептон; 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый, компонент, поглошающий кислород и вазелиновое масло, о т л и ч аю щ а я с я тем, что, с целью ускоренного выявления и более точного учета анааробных бактерий, она дополнительно содержит дрожжевой автолизат, аскорбиновую кислоту и углекислый кальций, а в качестве источника углерода и азота и компонента, поглощающего кислород, используют соответственно картофельный отвар и картофель при следующем соотношении компонентов, г/л;Картофель 200 - 300Пептон 10-15дрожжевой1Га в толи за т 20-2 дАскорбиноваякислота 0,0001-0,000 152,3, 5-трифенилт тразолий хлористы й О, 023-0,027 На питательную картофельную среду для анаэробж 1 КАН), приготовленную согласно указанным примерам, производят высев 1 мл Газведения смыва с 0,1 г продукта для количественнот о учета ана 576эробных бактерий,;асеянные пробиркиподогревают на водяной бане и помещают в термостат при 37 + 0,5 С,Наблюдения ведут каждые 30 мин через 5 ч от начала инкубирования посевовдо появления розового окрашивания.После появления розового окрашивания инкубирование посевов прекращают,По появлению розового окрашивания судят о наличии роста микроорганизмов, а повремени его появления - о количествеэтих микроорганизмов в продукте.Высокие питательные свойства и светлая окраска предложенной среды обусловливают ускоренное выявление и болееточный учет анаэробных бактерий, в томчисле СЕ ЬоСоброщ, СЮ.реЯгщЕнЭ,СЮьрогодеоеэ, С 6.Ье)еги МПредложенная среда более удобна иаффективна по сравнению с известной дляосуществления ускоренного выявления иучета анаэробных микроорганизмов на полуфабрикатах и готовых картофелепродуктах, Применение атой среды пает возможность улучшить микробиологический контроль производства, что способствует повышению качества выпускаемой продукции ипре дотв ращению возможности возникнове ни япищевых отравлени й. Формула изобретения.707957 18-20 70-80 Остальное Составитель М, ЛаринаРедактор Л, Ушакова Техред И. Асталош Корректор 9, Синицкая Подписное Заказ 8436/23 Тираж 522 ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб,; д, 4/5Филиал ПГ 1 П фПатентф, г, Ужгород, ул, Проектная, 4 Углекислый кальцийВазели новое маслоКартофельныйотвар Источники информации,принятые во внимание при акспертизе