Способ получения циклопептида

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК ПАТЕНТУ 1 п) 535902 Союз Советских Социалистических Республик(23) Приоритет (31) 125842 (33- (32) 25.10.67 анция .76. Ь)оллстс)н42 сударственныи комите овета Министров ССС(088.8) публиковано делам изобретени и открытий Дата опубликования описания 28.03.7 72) Автор изобрете Иностранец Жорж Жоллес) Заявитель ОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦИКЛОПЕПТИД;нснсотт - Сн,сн-сн)ст 4),- со о-с н-сосн и-ссн, сн, сн(сн,дящих в и серы и ескольки- итрогруплкилоием 1 -где К означает ацильный радикал, который может входить в следующую группу радикалов: алканоил, аценоил, алкадиеноил, алкилоксикарбонил, аралканоил, ароил, арилсульфенил, арилсульфинил, арилсульфонил, циклоалкилкарбонил, гетероциклилкарбонил, гетероциклилалканоил или остаток линейного или циклического пептидного радикала, который одной карбонильной группой связан с атомом азота 1.-4-транс-метилпролина в боковой цепи циклопептида.Алкильные, аценильные или алкадиенильные части вышеуказанных радикалов представляют собою линейные или разветвленные цепи, содержащие 1 - 50 атомов углерода, возможно замсщенные одним или несколькими атомами галогена или радикалов (амин- ного или алкилтиолового с содержанием 1 - 5 атомов углерода).Алкильные части а ксикарбонильных радикалов с содержан 5 атомов углерода могут быть замещены диалкоиламинорадикалом, дающим алкильные части с содержанием каждая 1- 5 атомов углерода.Ароматические части аралканоильных, ароильных, арилсульфенильных или арилсульфонильных представляют собою бензольное или нафталиновое кольцо, возможно заме- щенное одним или несколькими радикалами: алкилами, гидроксилами, бензоилом, амино группой, диалкиламиногруппой, алканоиламиногруппой или нитрогруппой, алкильными радикалами и алкильными частями других радикалов с содержанием 1 - 12 атомов углерода.15 Гетероциклические части гетероциклилкарбонильных или гетероциклилалканоильных радикалов представляют собою моноциклические гетеросоединения, содержащие один или несколько гетероатомов, вхогруппу атомов азота, кислорода илвозможно замещенных одним или нми алкильными радикалами или нпой.Циклоалкильные части циклоалкилкарбонильных радикалов представляют собою пятичленные или шестичленные циклоалкильные радикалы, возможно замещенные одним или несколькими амин ными радикалами, аминорадикалы, замещающие алкильные, алцениль ные или циклоалкильные части радикалов, 535902природа которых указана выше, причем аминные функции пептидных линейных или цик.лических радикалов могут быть замещены одним или несколькими алкильными, алканоильными, аралкильными, алкилоксикарбонильными, аралкилоксикарбонильными или алкилоксиаралкилоксикарбонильными группами. Алкильные радикалы или алкильные части других радикалов могут содержать 1 - 30 атомов углерода.В соответствии с изобретением циклопептид указанной общей формулы получают из соответствующего циклопептида со свободной иминной группой пролина путем конденсации с активированным производным кислоты, например карбодимидным методом.Циклопептид А (К в этом случае замещен атомом водорода) может быть получен путем контролируемого гидролиза антибиотика 11072 КР, синтез которого описан во французском патенте 1393208, Антибиотик 110072 йР может быть гидролизован в циклопептид А органической или неорганической кислотой в органическом растворителе. Лучше всего использовать для этого безводный метанол в соляной кислоте. Реакция выполняется при 20 С в течение 2 ч.В качестве методов конденсации можно упомянуть, например, методы с использованием карбодимида, например дициклогексилкарбодимид, метод со смешанным ангидридом.В соответствии с этими методами свободные функциональные группы, которые не должны участвовать в реакции, замещают группами, обладающими способностью к последующему элиминированию без взаимодействия с остальной частью молекулы. Обычно используют для этой цели остатки, которые могут быть удалены гидролизом или восстановлением. Аминогруппа обычно защищается такими алкилоксикарбонильными соединениями, как трет-бутилоксикарбонил, аралкилоксикарбонил, как бензилоксикарбонил или аралкил (как бензил).Смешанный ангидрид обычно получают действием алкилхлорформиата, например этилового или изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты, на кислоту К - ОН в органическом растворителе, например в хлористом метилене в присутствии органического основания, например триэтиламина при - 10 С.Продукты согласно изобретению обладают ценными свойствами в терапии.Это антибиотики с высокой антитуберкулезной активностью и высокой активностью в отношении грам-положительных и грам-отрицательных бактерий,Эти соединения дали хорошие результаты при испытаниях их на противотуберкулезную активность. Они угнетают размножение вирулентных туберкулезных бацилл, например штаммов, действующих на человека, коровьего штамма и различных устойчивых мутантов.Активность 1 п и 1 го определяется путемраз 10 15 20 25 80 35 40 45 50 55 60 65 бавления сред Дюбо. В этих условиях минимальная угнетающая концентрация находится между 0,005 и 1 мкг/мл.Особенно интересны продукты общей формулы, где К - это алканоильный или альценоильный радикал, замещенный амино- или алкилтиогруппой, или же линейным пептидным радикалом, причем аминные радикалы могут быть еще замещены по вышеуказанному,Активность 1 п что определяется на экспериментальных инфицированных мышах путем введения указанных соединений в течение трех недель, начиная со дня, следующего за заражением. Нелеченые мыши погибали за 20 - 30 дней. В этих условиях были определены минимальные эффективные дозы 50 - 300 мг/кг (через рот),Особенно эффективны продукты общей формулы, где К - это алканоильный радикал, замещенный аминогруппой или линейным пептидным радикалом, причем аминные радикалы сами могут быть замещены по вышеуказанному.В медицине можно использовать новые соединения в виде оснований солей от присоединения к ним кислот или четвертичных аммониевых солей, приемлемых для фармацевтики, т. е, нетоксических в тех дозах, в которых они используются.Как примеры получения продуктов от присоединения фармацевтически приемлемых соединений, можно назвать соли минеральных кислот - хлоргидраты, сульфаты, нитраты, и фосфаты или соли органических кислот (как ацетаты, пропионаты, сукцинаты, бензоаты, фумараты, малеинаты, тартраты, метансульфонаты, бензолсульфонаты, теофиллинацетаты, салицилаты, фенолфталинаты, метиленбис - бетаоксинафтеаты) или замещенные производные этих кислот.В качестве четвертичных аммониевых солей, приемлемых с точки зрения фармацевтики, можно назвать сложные эфиры неорганических или органических производных. Сюда относятся хлорметилаты, бромметилаты, йодметилаты, соответствующие этилаты, аллилаты или бензилаты, метил- или этилсульфаты, метансульфонаты, бензолсульфонаты или замещенные такого рода соединения.Качество продуктов в нижеследующих примерах определяют хроматографически в тонком слое насиликагеле.П р и и е р 1. Получение циклопептида А 150 г пептида - антибиотика, полученного по французскому патенту Мо 1393208, растворяют в 1320 мл 4,5 н. раствора хлористого водорода в метаноле. После перемещения в течение 2 ч при 20 С раствор концентрируют и выпаривают его досуха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. Остаток экстрагируют дважды, каждый раз порцией по 250 мл метанола. Эти вытяжки дают после выпаривания аморфный остаток, который растворяют в смеси хлороформа - метанола (95 и 5 объе.5мов соответственно). Полученный раствор сливают через колонку диаметром 11 см, заполненную 2 кг силикагеля, Элюирование проводят тем же растворителем. Собирают фракции до 640 мл каждая. Фракции 10 - 16 дают 123,3 г хроматографически чистого циклопептида А с выходом 95,57 с.К - 0,55 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол=65: 35 по объему); (а) = - 62 (с=0,5 в метаноле),П р и м е р 2. Растворяют 3,35 г циклопептида А в 70 мл этилацетата. Добавляют 1,13 г К, -ацетил-Х:. -бензилоксикарбонил.-лизина. Смесь охлаждают в ледяной бане и добавляют 0,8 г дициклогексилкарбодимида. Перемешивают 2 ч при внешнем охлаждении в ледяной бане, затем выдерживают в течение 15 - 20 ч при 20 С. Добавляют 5 капель ледяной уксусной кислоты и отфильтровывают нерастворимую часть. Осадок промывают этилацетатом, объединяют органические вытяжки и выпаривают их досуха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. Остаток растворяют в 10 мл этилацетата и промывают полученный раствор последовательно 2/, -ным р аствором двууглекислого натрия, нормальной соляной кислотой и дистиллированной водой. Органическую фазу высушивают над безводным сернокислым натрием, фильтруют и выпаривают фильтрат досуха при 25 мм рт. ст.3,14 г сырого остатка пропускают через колонку диаметром 3 см с содержанием 75 г силикагеля. Последовательно элюируют бензолом, смесями из 9 объемов бензола и 1 объема этилацетата, затем смесями 5: 5 (также в объемах), далее смесями 90: 10 или 75: : 25. Фракции, элюированные этилацетатом и двумя смесями этилацетата и метанола (95: 5 и 90:10 или 75:25) объединяют и выпаривают досуха при 25 мм рт, ст. Получают 2,13 г (И, -ацетил-М; -бензилоксикарбонил. - лизил)-циклопептида А с выходом 48,57 с.М = 12,43(теоретически 12,20); (а)= = - 67,7 (с=0,5 в метаноле); К -- 0,73 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол=8: 2 по объему).Таким же образом из подходящих исходных продуктов получают:(теоретически 2,64); К,=0,77 (силпкагель, со отношение хлористый этилен:метанол=65:535902 пальмитоил-циклопептид АС=64,45/о (теоретически 65,24); Н 9,41 о(теоретически 9,51); К=10,30 О/о (теоретически 10,53); К=0,77 (силикагель, соотношение хлористый этилен : метанол=8: 2 по объему);ундеканоил-циклопептид АС =64,78 о(теоретически 64,0); Н=9,28 /о (теоретически 9,21); И= 10,9 О/о (теоретически 11,18); К=0,52 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол=8: 2 по объему);додеканоил-циклопептид АИ= 11,1/о (теоретически 11,05); К=0,78 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол=8:2 по объему); (Е (+) - 6 метилоктаноил)-циклопептид АС=63,63 о(теоретически 63,41); Н=8,50(теоретически 9,03); И= 11,12/, (теоретически 11,47); К 1=0,77 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 8: 2 по объему);бензоил-циклопептид АХ= 11,88 О/О (теоретически 11,86); К=0,85 (силикагель, хлористый этилен:метанол = =65: 35 по объему).изоникотиноил-циклопептид АК= 13,14 /о (теоретически 13,17); Ку=0,83 (силикагель, хлористый этилен:метанол = = 65: 35 по объему);Салицилоил-циклопептид АИ= 11,97/о (теоретически 11,68); К -- 0,80 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 65:35 по объему);деканоил-циклопептид ЛС=63,98(теоретически 63,69); Н=9,41 /о (теоретически 9,15); Ку=0,70 (силикагель, соотношение хлористый этилен:метанол = 65: : 35 по объему);хлоргидрат - (К - гексил.-валил)-циклопептида А 4И (для основания) 12,25 О/О (теоретически 12,27); Ку = 0,37 (силика гель, соотношение хлористый этилен: метанол = 8: 2 по объему);; метанол = 8: 2 по объему).5 Пример 3. Растворяют 0,21 г Х - третбутилоксикарбонил.-валила в 25 мл хлористого метилена, к которому предварительно добавляют 0,14 мл триэтиламина. Охлаждаютдо - 7 С и приливают 0,1 мл этилового эфи 10 ра хлормуравьиной кислоты и перемешиваютв течение 35 мин при - 5 С, После этого при.ливают раствор 0,96 г циклопептида А в10 мл хлористого метилена +0,14 мл триэтиламина. Вновь перемешивают в течение15 18 ч при внешнем охлаждении в ледяной бане, Выпаривают досуха при остаточном давлении 25 мм рт. ст, Всего получается 0,97 г(Ы - трет-бутилоксикарбонил - 1. - валил)- циклопептида А в виде сырца с выходом 84 О/о.20 Продукт растворяют в этилацетате. Растворфильтруют и промывают водой. После выпаривания досуха при 25 мм рт. ст. получают0,73 г (К-трет-бутилоксикарбонил - 1. - валил) - циклопептида А с выходом 63 О/о.25 К = 11,7 О/о (теоретически 12,1); Ку = 0,70: метанол=8: 2 по объему).Пример 4. Растворяют 1,43,ггептановойкислоты в 5 мл диметилформамида и добав 30 ляют 0,173 г И - оксисукцинимида. Охлаждают до - 10 С, добавляют 0,31 г дициклогексилкарбомида, перемешивают 1 ч при 10,затем 2 ч при 0 и 18 ч при 20 С.Образовавшуюся дициклогексилмочевину от 35 фильтровывают, после чего приливают кфильтрату раствор 1,44 г циклопептида А в75 мл диметилформамида с добавкой 0,21 млтриэтиламина, Затем перемешивают 18 ч при20 С. Реакционную среду выпаривают досу 0 ха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. Полученный остаток растворяют в 50 мл этилацетата и последовательно промывают водным5 о/О -ным раствором двууглекислого натрия, 1 и.соляной кислотой и водой. Органическую фа 5 зу сушат над безводным сернокислым натрием и отфильтровывают и фильтрат выпаривают досуха при остаточном давлении25 мм рт. ст.Остаток хроматографируют с использованп 0 ем двадцатикратноГо веса силикагеля и сэлюированием смесями хлороформа и метанола, в которых постепенно повышают содержание метанола. Гептаноилциклопептид А элюируют смесью хлороформом: метанол (98: 2),5 Соответствующие фракции концентрируют досуха при 25 мм рт. ст,Получают 0,92 г гептаноилциклопептида Лс выходом 37 О/о.И= 11,2/О (теоретически 11,77); С=62,6/о(теоретически 62,83); Н=8,9 /, (теоретически8,94), К=0,82 (силикагель, хлористый этилен: метанол = 65: 35) .Таким же образом, но с применением надлежащих веществ можно получить следую 5 щис продукты:стеароилциклопептид АС=65,80 О/о (теоретически 65,70); Н=9,60/О (теоретически 9,62); Ку=0,82 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол=65: : 35 по объему);и-бутирилциклопептид АС =60,9/о (теоретически 61,9); Н= 8,7 О/о (теоретически 8,72); Я=0,55 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 65: 35 по объему);сорбоилциклопептид АХ = 11,99% (теоретически 11,97); К 1= 0,75 (силикагель, соотношение хлористый этилен: : метанол = 65: 35 по объему);хлоргидрат 11 - пирролидиноундеканоилциклопептида АИ=10,9 о(теоретически 11,35); С 1=2,05(теоретически 2,87); Ку=0,60 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 65: : 35 по объему);хлоргидрат 2 - пирролидиногексаноил-циклопептида АИ= 11,81 % (теоретически 12,05); К=0,70 (силикагель, соотношение хлористый этилен: : метанол = 65: 35 по объему).Пример 5. Растворяют 2,5 г 1. (+)-6-метилоктаноил - Иа - бензилоксикарбонил.-а- диаминобутирил.-треонил - Х - бензилоксикарбонил - 1. - а - у - диаминобутирилгидразида в 75 мл ледяной уксусной кислоты и 7,08 мл н. соляной кислоты, Охлаждают до 2 С и добавляют ледяной раствор 0,232 г азотистокислого натрия в 2,5 мл воды. Перемешивают 15 мин при 0 С и переливают в ампулу, также охлажденную до 0 С, после чего приливают 200 мл водного 5%-ного раствора двууглекислого натрия. Сливают органическую фазу и промывают ее пять раз последовательно с применением 60 мл ледяного 5/,-ного раствора двууглекислого натрия. Промывные воды вновь экстрагируют 100 мл ледяного этилацетата. Органические вытяжки промывают ледяным 5 О/,-ным раствором двууглекислого натрия. Объединяют все органические вытяжки и высушивают их над безводным сернокислым натрием при 0 - 2 С. Быстро фильтруют и приливают раствор 1. (+) -6- метилактаноил - Ху - бензилоксикарбонил.-а-у - диаминобутирил - 1. -треонил- Х - бензилоксикарбонил.-а-у-диаминобутирилазида к ледяному раствору 3,23 г циклопептида А в смесь 100 мл этилацетата и 0,47 мл триэтиламина. Перемешивают в течение 18 ч при 0 - 2 С и 48 ч при 20 С.Полученный раствор выпаривают досуха при давлении 25 мм рт. ст, Остаток растворяют в 100 мл воды, растирают до полного измельчения, отфильтровывают и сушат при пониженном давлении (0,3 мм рт. ст.) в присутствии пятиокиси фосфора. Полученный продукт растворяют в 20 мл ацетона, отфильтровывают небольшой осадок и выпаривают досуха при 20 мм рт, ст.Таким образом получается 4,44 г 1.(+)- 6-метилоктаноил - у - бензилоксикарбонил.5 10 15 20 25 Зо 35 40 45 50 55 60 55 10а - у - диаминобутирил - 1. - треонил-И-у-бензилоксикарбонил.-а - у - диаминобутирил 1- циклопептида А с выходом 79% .К= 11,54% (теоретически 11,75); К=0,92 (силикагель, соотношение хлористый этилен: : метанол = 1: 1 по объему).Таким же образом, но с применением других необходимых исходных веществ получают (Ха-пальмитоил - И - в - бензилоксикарбонил - 1. - лизил) - циклопептид А.Х= 10,51 % (теоретически 10,51); С=64,65 о(теоретически 65,03); Н=8,89% (теоретически 9,05); К=0,75 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 8: 2 по объему);(Иа. (+)-6-метилоктаноил - Иу - бензилоксикарбонилдиаминобутирил) - циклопептид АК= 11,13% (теоретически 11,56); С= = 63,00 о/о (теоретически 63,08); Н = 8,51 о/о (теоретически 8,55); Ку=0,55 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = = 8: 2 по объему);П р и м е р 6. Синтез проводят по примеру 4, используют следующие исходные продукты:2,5 г 1. (+) -6-метилоктаноил-М-у-бензилоксикарбонил.-а-у-диаминобутирил - 1. - треонил - Ху - бензилоксикарбонил.-а-у-диаминобутирилгидразида; 75 мл ледяной уксусной кислоты; 7,08 мл 1 н. соляной кислоты; 232 мг азотистокислого натрия; 3,6 г (Х-метил.-валил) - циклопептида А в виде раствора в 2,5 мл воды, 100 мл этилацетата и 0,94 мл триэтиламина.Получают 5,3 г 1. (+) -6-метилоктаноилИу - (бензилоксикарбонил.-а-у-диаминобутирил - 1.-треонил - Х-у-бензилоксикарбонил.-а-у-диаминобутирил-К-метил - 1. - валил)- циклопептид А с выходом 87,5/ Продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя 50 г силикагеля на 5 г продукта, который элюируют в чистом виде этилацетатом и этилацетатом-метанолом, взятыми в отношении 9:1 по объему. Эта очистка дает возможность получить 2,81 г 1.(+)-6-метилоктаноил-И-у-бензоилоксикарбонил - 1. - а - у диаминобутирил - Е - треонил-Х-у-бензоксикарбонил.-а-у-диаминобутирил - М - метил. - валил) - циклопептид А в хроматографически чистом виде с выходом 47 О/о.: метанол = 8: 2 по объему),Таким же путем получают следующие продукты:К - стеарил - 1. - валил (циклопептид А);К=10,46% (теоретически 10,58); Я=0,45(силикагель, соотношение хлористый метилен: метанол = 8: 2 по объему).П р и м е р 7, Растворяют 2 г циклопептида А в 40 мл хлористого метилена и добавляют еще 0,28 мл триэтиламина. Смесь охлаждают до ( - 5) - ( - 10)С, затем приливают втечение 10 мин одновременно два следующих раствора: 0,56 мл триэтиламина в растворе в 15 мл хлористого метилена и 0,684 гхлоргидрата 11-диэтиламино - ундециловогоэфира хлормуравьиной кислоты. Перемешивают в течение 2 ч при 0 С и затем 18 ч при20 С, промывают реакционную среду 5%-нымраствором двууглекислого натрия и затем насыщенным раствором поваренной соли. Высушивают над сернокислым натрием, фильтруют и выпаривают досуха при остаточном давлении 25 мм рт, ст. Остаток хроматографируют на 25 г силикагеля, засыпанного в колонку диаметром 12 мм. Фракции элюируют смесями этилацегата: метанола, соотношение98:2 и 95:5 по объему, объединяют и выпаривают досуха при остаточном давлении25 мм рт. ст. Остаток растворяют в 40 мл воды, добавляют по каплям н, соляную кислотудо рН=3. Отфильтровывают небольшой остаток и лиофилизуют фильтрат. Получают1,24 г хлоргидрата 11-диэтиламиноундецилоксикарбонил - циклопептида А с выходом50/,.И=10,87% (теоретически 11,07); Йу=0,64: метанол = 65: 35).Таким же образом получаются следующиесоединения:децилоксикарбонил - циклопептида ЛС =63,50 % (теоретически 63,08); И== 8: 2 по объему),Смешивают 2,98 г циклопептида А, 0,569 гхлористого ортонитрофенилсульфенила иЭ,42 мл триэтиламина в 40 мл этилацетатапри 2 С. Перемешивают 18 ч при охлаждениив ледяной бане, после чего выпаривают досуха при давлении 22 мм рт, ст. Получают3,45 г сырого продукта, который хроматографируют на силикагеле в колонке диаметром 20 мм. Фракции, элюированные этилацетатом, выпаривают досуха при 25 мм рт. ст.Получают 1 г ортонптрофенилсульфенилциклогсптида А. 12Х =12,1 о(теоретически 12,6); 5 =2,85 /о (теоретически 2,88); К=0,79 (силикагель,соотношение хлористый этилен: метанол = 8: 2 по объему).Таким же образом, из соответствующих исходных продуктов получают следующие соединения:1 - диметиламинонафталинсульфонил - 5- циклопептид АИ=11,66% (теоретически 11,75); 8=2,69% (теоретически 2,69); К=0,70% (силикагель, соотношение хлористый этилен; метанол = = 8:2 по объему);паратолуолсульфонилциклопептид А К= 11,10 % (теоретически 11,33); 8=2,56% (теоретически 2,88); Ку=0,74 (силикагель, соотношение хлористый этилен; метанол = = 8; 2 по объему);пар аацетиламинобензосульфонилциклопептид АК=11,71 /о (теоретически 12,12); 5=2,93 о(теоретически 2,77); К=0,82 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 8: 2 по объему),П р и м е р 8. Растворяют 863 мг Иа-ацетилИв - бензилоксикарбонил - . - лизил)-циклопептида А в 25 мл метанола. Добавляют 863 мг палладиевой черни с 3/о активного металла, Гидрируют при интенсивном перемешивании в течение 2 ч при 20 С и давлении 760 мм рт. ст.Фильтруют полученный раствор и промывают осадок 10 мл 0,5 н. соляной кислоты, Фильтрат и промывные воды объединяют и выпаривают досуха при остаточном давлении 25 мм рт. ст. на вращающемся испарителе, Остаток растворяют в 5 мл ацетона и высаживают продукт 50 мл ледяного эфира. После охлаждения в течение 3 ч до 4 С отфильтровывают осадок, который промывают эфиром, высушивают 18 ч при давлении 0,3 мм рт. ст. в присутствии пятиокиси фосфора. Получается всего 0,46 г (Ха=ацетил-лизил) - циклопептида А с выходом 57,6/о, И=13,0% (теоретически 13,23); (аЯ =77,2 (с=0,5 в метаноле); Ку= 0,56 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 1: : 1).Таким же образом получают следующие соединения:метансульфонат .-валилциклопептида А К= 11,83 О/, (теоретически 12,14); Ку=0,55 (силикагель, соотношение хлористый этилен: метанол = 65:35 по объему);хлоргидрат .(+) - 6 - метилоктаноил-.-ау-диаминобутирил - . - треонил-.-а-у-диаминобутирил-циклопептида А.С 1=5,08% (теоретически 4,81); К=0,14 (силикагель, соотношение хлористый этилен: :метанол = 1:1 по объему);хлоргидрат .(+) - 6 - метилоктаноил-.-ау-диаминобутирил - 1. - треонил-.-а-у-диаминобутирил - М - метил-.-валил-циклопепти да Л.Корректор Л. Котова Редактор Т, Девятко Заказ 774/5 Изд.1764 Тираж 575 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5(И - метилпарадиметиламинофенил - Р,1.- аланил) - циклопептид А,М = 13,05% (теоретически 13,25); Ку=0,5 (силикагель, соотношение хлористый этилен: : метанол = 8:2 по объему).П р и м е р 9. 0,5 г (параметоксибензилоксикарбонил - 4 - аминоциклогексилкарбонил)- циклопептида А растворяют в 10 мл диоксана, добавляют 0,25 мл 4 н, безводного раствора НС 1 в диоксане и перемешивают полученный раствор в течение 18 ч, Растворитель отгоняют при давлении 30 мм рт. ст. и 35 С и растворяют остаток в 20 мл этилацетата. Полученный раствор промывают 20 мл воды, сливают органическую фазу и выпаривают досуха при давлении 30 мм рт. ст. и 35 С,Остаток растворяют в 10 мл диоксана и обрабатывают 4 ч 0,84 мл 4 н. безводного хлоргидрата диоксана, Растворитель отгоняют в вакууме при 30 мм рт, ст. и 35 С и растворяют остаток вновь в 20 мл этилацетате. Раствор промывают 20 мл воды. Сливают водную фазу, которую объединяют с водной фазой, полученной при первой обработке. Раствор концентрируют и выпаривают досуха при 35 С и 0,3 мм рт. ст, Остаток растворяют в 10 мл воды, фильтруют для освобождения от легкого осадка и выпаривают досуха в вакууме. Остаток растворяют в 10 мл воды и лиофилизуют,Таким образом получают 0,355 г 4 - аминоциклогексилкарбонилциклопептида А с выходом 78%.И=12,75% (теоретически 12,51); К 1=0,43 (силикагель, соотношение хлористый этилен: . метанол = 8: 2 по объему),П р и мер 10. 10 г циклопептида А растворяют в 200 мл хлористого метилена и добавляют 1,4 мл триэтиламина. Полученный раствод охлаждают при - 5 С и добавляют к не му в течение 10 мин ледяной раствор 1,81 гхлористого трихлорацетила в 20 мл хлористого метилена, Реакционную смесь 2 ч перемешивают при - 5 С, а затем еще 18 ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняют в 10 вакууме при 30 мм рт. ст. и 50 С и растворяют в 100 мл этилацетата. Отфильтровывают муть и промывают фильтрат последовательно дважды 75 мл 5%-ного ледяного раствора двууглекислого натрия, дважды 75 мл 1 н, со ляной кислоты и затем 30 мл насыщенногораствора поваренной соли. Органическую фазу сушат над сернокислым натрием, фильтруют и выпаривают досуха при 30 мм рт, ст.при 50 С, Получают 7,23 г сырого продукта, 20 который растворяют в 20 мл этилацетата иэлюируют через колонку с 125 мл силикагеля диаметром 20 мм. Для элюирования пользуются этилацетатом. Продукт собирают в виде фракции между 150 и 450 мл элюата после 25 отгонки вытяжек при 30 мм и 50 С. После сушки при 30 С и 0,1 мм рт. ст. получают 76 г трихлорацетилциклопептида А свыходом 53%.30 И =10,9% (теоретически 11,13); К 1 = 0,8: метанол = 65: 35 по объему). 35 Формула изобретения Способ получения циклопептида общейформулы. где К - ацильный радикал, отличаю щ и й с я тем, что активированное производное кислоты К - ОН конденсируют с соответствующим циклопептидом известным способом, например карбодиимидным, азидным, методом активированных сложных эфиров, и методом смешанных ангидридов или хлорангидридов.