Способ получения пептидов

1 ч 439967 ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК ЙАТЕНТУ Союз Советских -СоциалистическихРеспублик(61) Зависимый от пате 1) М.Кл. С 07 с 103/52 2) Заявлено 03.04.70 (21) 1421071/31) Р 1917690.0; Р 1937656.8 сударственный камнте оеета Министров ССС а делам изобретенийн открытий 33) Ф Опубликовано 15.08.74. Бюллетень ЛЪ Дата опубликования описания 10,09.75 3) УДК 547.964.4.07(088.8) Авторы изобретен Иностранцы Вольфганг Кениг и Рольф Гайгер(71) Заявитсл Иностранная фирма фарбверке Хехст АГ) СПОСОБ ПОЛУЧ 1самых удобных способов стоит в связывании Х- и 1 Ч-ацплпептпда с эфир и эфиром пептида посре лкарбодиимида (ДСС). ядов происходит значи и образование Х-ацилм рязцяют продукт сицт, 6-триметоксибе ительном колпче л-р-алании, 1,дующей добавке 2 на выделялся в зн цинимидоокспкарб токсибецзилампд, 5 илам получения ациламиноом аминодством диПри связы- тельная раочевин, коеза и сцнве сук- -трцмеПри использовании мида (ДСС) доба ОБТ) также снижае твует образованию абл. 1 в примере 1, бразоваться побочн ри добавке Х-оксис Добавки от укцинимпда дл експлкарбодцп препятствуют ы. 1 до 2 экв синтеза п пдом снци образованвалентов Х-окспптида с дициклоают рацемпзацию ю К-ацилмочевп 1-Окспбензтрпазолы значительно превосх5 дят известную добавку М-оксцсукцинимпд при синтезе пептида с ДСС,Однако Х-оксисукццнцмид реагирует с дициклогексилкарбодиимидом и нельзя получить пространственно затрудненные сложные эфиры Х-ацилпептпд-И-оксисукцинимида. Соединение пз 1 моль дициклогексплкарбодиимида и 3 моль 14-оксисукцццпмида было названо позднее сложным эфиром сукцинимпдооксцкар бои ил-р-ал ацппоксисукццнимцда. Таким образом, предложен способ получения пептидов, который заключается в том, что 20 защищенную аминокислоту или защищенныйпептид, у которых карбоксильная группа, которая должна вступать в реакцию, свободна, подвергают реакции с защищенным эфиром аминокислоты илп эфиром пептида или 5 амидом пептида, у которых аминогруппа, которая должна вступать в реакцию, свободна, в обычном в химии пептидов растворителе в присутствии карбодиимида при добавке 1 - 2 эквивалентов 1-оксибензтриазола общей фор- О мччы 1 Это соединение легко реагирует с аминами, давая производные мочевины р-аланпнамидов, При реакции а-бензилового эфира ВОС- -а-глутаминовой кислоты с М-оксисуктеинимидом ц дицпклогексилкарбодцимидом и послеОдин из пептидов со кислоты ил кислоты ил циклогексц ванин пепт цемпзация торые заг кают выхо дцциклогексилкароодика 1-окспбензтрпазолов т рацемпзацшо и препятХ-ацилмочевцн (см, Л). Кроме того, не могут е продукты, возможные укцинпмцда, 439967,45 50 5 60 6,) в которой Я обозначает водород, галоген, трифторметцл-, нптро-, группу амида сульфокислоты, карбоксампд-, цпано-, низшую алкил и/цлп метоксп-плл этокспгруппу и и обозпачает числа 1 - 4.Из Х-защищенных аминокислот ц пептидов прц помощи 1-окспбензтрцазолов и дициклогексцлкарбодццмцда могут получаться актпвированные продукты, которые используются для синтеза пептидов, Прп этом образуются активировапные сложные эфиры, которые в растворе, очевидно, находятся в равновесии с актцвированпым ампдом. В зависимости от вещества может выделяться активцроваиньш сложный эфир цлц активцровацный амид. Как цравцло, нет однако необходимости в выделении активированного продукта.Этц новыс актцвцрованные соединения исключительно быстро реагируют с первичнымп и вторпчнымп аминами. Прц синтезе У.-Р)е Ъа 1-ОСНз пз У-Р)е-ОВТ ц Н-Ча 1- -ОСНз НС прп добавке 1 эквивалента Ж-этцлморфолцна уже через 5,яин при 0 С образуется более 90% пептцда. Прп использовании эфира И-оксцсукццнцмцда лишь через 2 ч прц 0 С достигается 90%-ная ступень. Другим преимуществом является то, что сложные эфиры не требуется выделять, так как 1-оксцбепзтрцазол ц его производные, в противоположность Х-оксцсукццнимцд, це ооразуют с дпциклогексплкарбодцпмидом побочных продуктов. Это легко обнаруживается, например, хроматографией на бумаге.С дициклогексплкарбодиимцдом и 1-окспбензтриазолом тридекацептцд оставался без изменения через 15 ч.При активации М-защищенных пептидов, которые не имеют в качестве аминокислоты с концевой карооксцльной группой пролина и глнцина, происходит небольшая рацемцзацпя. Однако и эфиры Х-оксисукццнцмцда с дцццклогексилкарбодиимидом не могут получаться полностью без рацемизации (см, табл, 2, пример 1, Б). Кроме самого 1-оксцбензтрцазола могут применяться следующие производные: 6-хлор-оксп-изопропплбензч)риазол цлп 5- -хлор-оксц- метил- нитробензтрцазол, а также упомянутые в примерах соедцненпя,В качестве карбодицмидов могут применяться обычные в химии пептидов соединения. В качестве защитных групп для тех функциональных групп аминокислот и пептидов, которые лол)кны быть защищены, используют все обычные в химии пептидов защитные группы. Полимерные смолы, например оксиметплполцстцрол, также могут применяться как защитные группы. Для получения примененных согласно изобретению и еще не описанных в литературе за. мещенных в ядро 1-оксибензтриазолов соответствующие о-хлорнитробензолы нагревают известным образом в спирте с 3 эквивалентами гидразингидрата или с 1 эквивалентом гид. разингидрата и 2 эквивалентами триэтиламина. Образующуюся соль гидразина или триэтцламина замещенного в ядро 1-оксцбензтриазола растворяют в воде и подкпсляют, причем замещецные в ядро 1-оксибецзтриазолы осаждаются.Соответствующими, обычными в химии пептидов растворителями являются, например, диметилформамид, диметилацетамид, тетрагидрофуран, диоксан, пиридин, сульфоокись лиметпла или хлористый метилен, Температура реакции обычно от - 20 до +40 С, преимущественно около 0 С.Из защищенных карбоксилом трудно растворимых в воде пептидов добавленный 1-оксибензтрцазол может полностью извлекаться прц встряхивании с раствором бикарбоната натрия плц калия или содовым раствором. Подкцслец этих промывных растворов бикарбоната натрия можно снова осаждать испол ьзоваш 1 ый 1-окспбензтрцазол. Это невозможно, например, при добавке М-оксисукццнпмпда, растворяющегося также в кислотах. Из труднорастворпмых пептидов можно посредством пзопропанола, спирта, метанола, тетрагцдрофурана плц горячей воды извлечь 1-окспбецзтрпазол,Выход во всех исследованных примерах с добавкой 1-окспбензтриазолов был выше, чем с добавкой цлп без добавки К-оксцсукцинимпла.Как видно пз данных табл. 1, рацемцзацця при использовании дициклогексилкарбодиимцла в тетрагцдрофуране в качестве растворителя становится ниже 1%, если добавляют 2 эквивалента 1-окспбензтрпазола. Если в качестве растворителя применяют диметилформамцд, то прц добавке 2 эквивалентов незамещенпого 1-оксцбепзтрцазола появляется небольшая рецемизация, в то время как при добавке 1 - 1,2 эквивалентов рацемцзацпя остается ниже 1%. Прп добавке Х-оксисукциццмцда получается как раз наоборот, Если пептид активируется при помощи дицпклогексплкарболпимида и 1-оксибепзтрцазола, то и здесь самая минимальная рацемизацпя достигается с 1 эквивалентом 1-окспбеизтрпазола, В тетрагпдрофураце опа лаже остается ниже 1%. Г 1 ри добавке М-оксисукццнцмида и здесь получается наоборот (см. табл. 2).Предлагаемый способ имеет большое значение для получения серинпептидов, так как применяемый в большинстве случаев метод с азидом дает меньшие выходы. Из Х-карбобензоксисерпназида образуется также через изопиапат в качестве побочного продукта 4-кар 439967Добавка Раствор Р.Р 1 ге.-Ъ а КОЛНЧЕ- стве,эк- вива- ленты 11 азпа 1 ис 40 ОМГ ТНГ ОМГ РНГ РМГ ОМГ ОМГ ТНГ ОМГ РМГ ТН 1) 14,3 8,1 27,0 10,01,01,01,01,01,01,01,71,0 0 0 2 2 1 1,2 2 2 1 1,2 2 2 2 ПентахлорфсиолХ-Оксисукцинимид)1-Оксибензтриазол1.0 кси-б-нитробензтри- азол 50 ОМГ ОМГ1,01,0 12 5-Хлор-оксп-бензтрназол12 6.Хлороксибензтрп- азол ОМГ ОМГ 1.7 1,О1,01,01-Окси-трнфторметилбензтрназол6.0 кси.б-бензтриазол. сульфонамид1,01,0 бооепзоксиамицоксазолцдццоц. Прп одмприменении дициклогексцлкарбодиимида образуется в качестве побочного продукта х 1 ацилмочевица.Если получают глутаминил- илп аспарагинилпептиды посредством дициклогексилкарбодиимпда, то в результате дегидратациигруппы амида кислоты образуются в значительном количестве соответствующие цитрилы. При 1 Х 1-ациласпарагине возможно такжеобразованге имида. Так, аспарагинилпептидымогут получаться только с выходами 39 - 45%.При добавке 1-оксибензтриазола в случаеиспользования дициклогексилкарбодипмидаможно, однако, с хорошими выходами, быстро и в чистом виде получать глутаминил- иаспарагинилпептид.Аргиниипептиды с протонцрованной гуанидогруппой также можно получать предлагаемым способом в чистой форме г с лучгиим выходом. Возмокно даже получение активированного сложного эфира пз протонированного М-ациларгинина и 1-оксибецзтриазола, который превращается дальше без выделения.Как структурные. элементы полученныхпредлагаемым способом пептидов принимаготся в расчет все аминокислоты в их Х илиР-форме, которые можно встретить в существуюгцих в природе пептидах. Возможно такжеприменение Р-аминокислот, например Р-аланипа пли других аминокислот, которые могутполучаться только синтетическим или полуспптетическпм путем, например а-метилалацина, а-метил,4-дпоксп-и-фецплаланпна илир-хлораланина,Продукты предлагаемого способа после отщепленпя защитных групп можно применятькак терапевтические средства или использовать как промежуточные продукты для изготовления других ценных в терапии пептидов,например оксптоцпна, вазопрессина, глгокагона, АКТГ (адрепокортикотропного гормона),секретпна, тпреокальцитонина плп инсулина.В описании ампцокпслоты сокрагцаются подействующим международным правилам. Кроме того, применяются следующие сокращения;Аз 1 х - аспарагип611 Х - гл ута м и ц2 - карбобецзокспВОС - трет-бутилоксикарбон 1 и1 х)РЬ - о-цитрофенилсульфецилОС 11, - сложный метиловый эфирОВп 1 - трет-бутиловый эфирРМГ - дпметплформамидРСС - дпцпклогексилкарбодпим идТНГ - тетр агпдрофуран01 х(В - л-питробензиловый эфирОВТ - -окси,2,3-бензтриазиловы й эфир.Все названные ниже амп 1 юкпслоты примецягот в 1.-форме.П р и м е р . Опыт по рацемизации с применением газовой хроматографииВместо 7-1 еп-Р(ге-Оприменялся ВОС-.ен-Рзе-ОН, образующийся полностью защищенный пептепд ВОС.еп- Р Р 11 е-Ъа-ОВц мог гидролизоваться без предыдущего отщепления защитной группы.А. Испытание на рацемпзацию прп использовании дпцпклогексилкарбодиимида с различными добавками.378 5 мг ВОС-.ец-Рге(1 моль) и209,7 мг Н-Ча-ОВп НС 1 (1 ммоль) растворяют в 2 мл абсолютного РМГ плп тетрагидрофурана. Добавля 1 от 0,12 мл 1 Х 1-этилморро 1 о лица (1 ммо,гь) и охлаждают в ледяной бане.После этого вводят добавки и в заключениеохлажде 1 нный до 0 С раствор 207 мг РСС(1 ммо.гь) в 1 мл абсолютного дпметилформамида илц тетрагидрофурана. Выдерживают15 исходные смес: 5 ч при 0 и около 15 и прпкомнатной температуре, разбавляют приблизительно 30 мл уксусного эфира, фильтруотвыпавший осадок, экстрагируют фпльтратвстряхиванием с насыщенным раствором бп 20 карбоната натрия, 2 н. лимонной кислотой,насыщенным раствором бпкарбоната иатр яи воды, сушат при помощи сульфата натрия,сгущают и производят хроматографшо остатка в уксусном эфире на 3 г основной окиси25 алюминия (активная ступень 1). Злюат (около 40 лгл) сгущается и остаток растворяетсяприблизительно в 5 мл 8 - 9 н. раствора соляной кислоты в метаноле и нагревается в тугоилавкой трубке 24 ч до 70 С. Раствор соляной30 кислоты в метаноле сгущается и обрабатывается известным способом,В табл. 1 приведены результаты.ТаблицаИсследования рацемизации при использовании35дициклогекснлкарбодиимида и различных добавок ОМГ 60 ОМГ ОМГ 1 РМГ 2 РМГ 2 65 ОМГ11.2211,221 РМГ РМГ РМГ РМГ РМГ РМЕ Т 1- Г В. Получение ВОС-Хец-Рге-1.38 г фенцлаланица растворяют в 345 л 1 л диоксана ц 115 лл 2 и. натрового щелока. До бавляют 38 г ВОС.ецОЯц ц перемешивают около 20 ч прц комнатной температуре, Осадок (избыток феццлаланцна) отсасывают и фильтр ат сгущают. Остаток распределяют между 200 лл уксусного эфира и 220 мл 2 н. 40 лимонной кислоты. Фазу уксусного эфира еще раз экстрагцруют, встряхивая с 2 и, лимонной кислотой и водой, сушат сульфатом натрия ц сгущают, Остаток растирают с петролейным эфиром. Выход 39,3 г, точка текучести 108 - 45 111 С, церекрцсталлцзацця цз смеси уксусного эфира ц цетролейного эфира; выход 33,3 г, точка текучести 112 в 1 С, ат)= - 8,5 (с=2, метанол).Г. Получение Н-Ча 1-ОВц 1 НС 1. 50 М-Карбобензоксц.- валин-трет-бутц;овый эфир подвергают каталитическому гидрцрованию в метаноле посредством Рд-катализатора при помощи самотптратора при рН 5 (добавка 1 н. раствора 1-1 С в метаноле). 55Н-Ъа 1-ОВц НС 1 может перекрцсталлцзовываться из уксусного эфира. Точка текучести 148 С, и 1)=+19,22 С (с=2, метанол).П р и м е р 2. Синтез Х-Ча 1-Ча 1-ОСНз прц использовании дцциклогексилкарбодцимпда с 60 разлпчньвп добавками.А. Одноопсрациопный метод (общая инструкция) 2,5 г Х-Ча 1-ОН (10 млоль), 1,7 г П-Ча 1-0 Ме, НС 1 (10 лло.гь), 1,28 лл Х-этилморфолппа (10 млоль) ц 10 - 20 ллоль заме Б. Испытание на рацемизацию при активированиц пептидов дициклогексилкарбодиимцдом и 1-окси,2,3-бензтриазолом или Х-оксисукццнимидом.378,5 мг ВОС.ец-РЬе-ОН (1 ммоль) и добавку растворяют в 2 м г абсолютного РМ" цлц тетрагидрофурана. Охлаждают до 0, добавляют охлажденный до 0 раствор 207 лг РСС (1 ллоль) в 1 лл абсолютного РМ.или тетрагидрофурана и выдерживают 2 ч при 0, 10 Затем добавля 1 от 209,7 лг Н-Ча 1-ОВц 1 НС 1 (1 млоль) и 0,12 лиг этилморфолина (1 сммоль), выдерживают еще 3 ч при 0 и оставляют около 15 ч прп комнатной температуре. Затем производят обработку, как в примере 1, А. 15Результаты приведены в табл. 2.Таблица 2 Исследования рацемизации при активировании пептидов дициклогексилкарбодиимидом и 1-оксибеизтриазоломили ч-оксисукцинимидом20Получение 7.-т)а 1-7 а 1.0 Ме Добавка Точка плавления, оС Выход,о-Окси-б.бензтриазолсульфокислый дизтиламин 90,51.0 кси-б-бонзтриазолсульфокислый метиламид 96,11-Окон-б-бензтриазолсуль.фокислый амид 90,51-0 кси-б.трифтор метилбензтриазол 90,51-Окси-б-метоксибензтриазол 97 - 100 99 - 102 100 в 1 94 - 97 А 2 А 2 А 2Л 2бо,9 Б 1 79,0 А 2 1-0 ксн-б-метоксибвнзтрн.азол 80,0 Б 183,5 Л 2 1-0 кси,6-диметилбензтриазолБ 1А 2 1.Окси.4.метилоензтри. 98 - 101103 в 1 107 в 1 98 - 100 98,8 93,3 98 - 100 102 в 1 103 в 1 102 в 1 104 в 1 104 в 1 93 - 95 93 - 98 97 - 100 азол 82,4 Б68,6А 2 1 Окси-метилбензтриазол 79,6 Б 1 71,5 А 2 1-0 кси.б-нитробензтриазол 90,6 А 2 6-Хлор-оксибензтриазол 96,0 А 2 5-Хлор.1-оксибензтриазол 90,6 А 2 5,7-Днхлороксибензтриазол 93,3А 2 6-Бром.1-оксибензтриазол 90,5 А 2 4-Хлор-окси-метил.нитробензтриазол 80,0А6.Хлор-.оксн-мстилбенз. 93 - 97100 в 0296 - 99 щенного 1-оксцбензтриазола фораулы 1 охлаждают до 0 С в 20 мл абсолютного тетрагидрофурана при перемешиванци. Добавляют охлажденный до 0 С,раствор 2,2 г РСС в абсолютном тет 1 рагидрофуране и оставляют при перемеш 11 вании 1 ч при 0 С и 1 ч при комнатной температуре. Осадок отсасывают, фильтрат сгущают г остаток растворяют в этцлацетате, Раствор похрамывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, 2 н. соляной кислотой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и водой, сушат сульфатом натрия сгущают и остаток растврают с петролейным эфиром. Результаты, полученные со сложным эфиром дипептида при использованцп различных 1-оксибензтриазолон в качестве добавки, приведены в табл, 3.Б. Предварптельное активированце карбоксильной компоненты (общая инструкция)2,5 г Х-Ча 1.0 Н (10 илоль) 1 л 10 - 20 ллоль замещенного 1-оксибензтриазола формулы 1 вводят в 10 мл абсолютного тетрагцдрофурана и разбавляют при 0 С холодным раствором 2,2 г РСС в абсолютном тетрагидрофуране. Выдерживают 1 ч прц 0 С и 1 ч при комнатной температуре, добавляют 1,7 г Н-Ъа 1- -ОМе НС 1 (10 ммоль) и 1,28 л,г н-этцлморфолина (10 ллоль) и оставляют при переме. шивании 1 ч при комнатной температуре. Обработка, как в примере 2, А. Результаты, полученные со сложным эфиром дипептцда прц цспользованцц различных 1-оксцбензтрцазолов в качестве добавки, прпведены в табл. 3,Таблица 3)т 12 Бт р 11 ааои 91,01.0 кеи.6.метил.з-оеиитри.ато.чкарооиитрил 66.01-Оксибе 11 атр 11 азол 82,493,490,7 1 р и м е р 3. Синтез асиарагииил- и глутаминилпептидов.Л, Х-АзХеп-ОСНа,К раствору 2,7 г Х-ЛзХ(10 лг,11 о.гь), 1,7 г Н.ец-ОСНа НС (10 м,1 голь) и 2,7 г 1-оксибецзтриазола в 20 лгл РМГ добавля 1 от при 0 1,28 л 1 л М-этилморфолина (10 11,11 оль) и в заключение холодный раствор 2,1 г РСС в небольшом количестве РМГ. Перемешивают 1 ч при 0 и 1 ч ири комнатной температуре, отсасывают осадок и разбавляют фильтрат водой. Осадок отсасыва 1 от, растирают с раствором бикарбоиата натрия, снова отсасывают, промывают водой и сушат иа пятиокиси фосфора. Выход 3,35 г (85% ), точка текучести 176, ггг) - 26,3 (с=2, метанол).Б. 2-6 Х-Ла-ОВц.К раствору 2)8 г ХХ-1 (10 ллголь), 1,8 г Н-Аа-ОВи НС 1 (10 ммоль) и 1,35 г 1-окси,2,3-бецзтриазола (10 )11 л 1 оль) в РМГ добавляют при 0 1,28 л 1 л Х-этилморфолина (10 л 1,ноль) и в заключение колодный раствор 2,1 г РСС в небольшом количестве РМГ. Поступают затем, как в примере 3. А, Выход 3,0 г (73,7% ), точка текучести 158 в 1, ит) - 36,0 (с=2, в метаноле),При добавке 2 эквивале лов 1-окси,2,3- -бензтриазола выход 2,9 г (71,2%), точка текучести 158 - 161.П р и м е р 4, У,-Ьегу-ОМВ.К раствору 2,4 г Х-Бег-ОН (10 л 1,11 оль), 2,7 г 1-оксибензтриазола (20 1 гмоль) и 2,9 г Ну-ОМВ НВг в 30 мл РМР добавляют при 0 1,3 мл М-эт 11 лморфолина и в заключение холодный раствор 2,2 г РСС в РМР. Перемешивают 1 ч при 0 и 1 ч при комнатной температуре и обрабатывают, как в примере 2, А.Выход 4,2 г (97,5%), точка плавления 121 - 123, а - 8,2 (с=2, ледяная уксусная кислота) . П р и м е р 5. Кортикотропин-(1-23)-трикозапептид-амид8,25 г ВОС-Бег-Туг-Бег-МеТц (ОВц 1) -НЬ-Рте-Лгд-ТкрТу-ОН (5,5 л)11 оль), изготовленного по СЬегп. Вег. 96 (1963), стр, 1080, и 2,5 г (5 л 1.1 голь) Нуз(ВОС) -Рго-уа 1-6 Ту-.уз(ВОС)- .уз(ВОС)- Лгр- Лго- Рго- уа- -.уз- (ВОС) -Ъа 1-Туг-ХНг-тритозилата, который был получен пз изготовленного ио С 1 е 1 п. Вег 97 (1964), стр, 1197 ацетата смешиванием с вычисленным количеством толуолсульфокислоты в воде, выпариванием растворителя в вакууме и вторичным осаждением остатка из смеси пиридииа и эфира, растворяют в 150 лл РМГ. После добавки 2,7 г 1-оксгибецтриазола (20 лгл 1 оль) добавляют при комнатной температуре 1/а раствора 6,5 г (30 .11 моль) 5 10 5 20 25 30 35 40 ,45 50 55 60 65 РСС в 20 11 л РМГ. Через 1 и добавляют вторую треть, через 2 ч последнюю треть раствора РСС. Через 2 ч осаждают сырой продуктреакции при помощи эфира. Выход 19,9 г. Защитные группы отщепляют известным способом одночасовой обработкой 90%-ной трифторуксусной кислотой, содержащей немноготиогликолевой кислоты, сырой трикозапептидосажда 1 от эфиром и промывают эфиром. Выход 19,1 г, Для очистки производят хроматографию известным способом на карбоксиметил целл юл озе.П р и м е р 6. Х-.еп-Аа-.ецц(ОВц)6 у-Рго-РгоХ-.уз (ВОС) -Аго-ОН,11,5 г (18,161 голь) Х-.ец-Аа-.ецц(ОВц)-ОН и 2,43 г (18 лглоль) 1-оксибецзтриазоласмешивают в 80 слга РМГ при - 10 при перемешивании с 3,7 г (18 лгл 1 оль) РСС в 25 смзРМГ. Перемешивают еще 2 ч при комнатнойтемпературе, отфильтровывают от мочевиныи добавляют раствор 13,3 г (15 лгмоль) Ну-Рго- Рго М- .уз- (ВОС)- Лгд- ОН, 1,5 гСНаСООН, НО и 1,92 см (15 млго,гь) К-этилморфолииа в 80 сл РМГ. Перемешивают 2 чпри комнатной температуре, отгоняют растворитель в вакууме и растирают остаток с уксусным эфиром. Выход сырого продукта 17,1 г,Соединение трижды кипятят с уксусным эфиром, высушенное вещество трижды основательно растирают с водой. Выход 15,5 г(73,5%); загрязнения имеются лишь в ничтожных количествах аь = - 80,0 (с=2, вмста ноле) .Вычислено: 6 и 2; Рго 2; 6 у 1; Ла 1;,еи 2; 1 уз 1; Агд 1.Найдено: 61 ц 2,05; Рго 1,84; 61 у 0,98;Л 1 а 1,02; 1.ец 2; .уз 1,03; Лгд 0,92.МН,: расчетное 1 эквивалент, полученное1,09 эквивалента.П р и м е р 7. Получение новых замешенных в ядро 1-оксибензтриазолов, которые применяются как добавки.Об 1 цие инструкцииа) 0,1,1 голь ароматического о-хлориитросоединения кипятят с флегмой в 50 11 л этанола с 15 г 100%-ного гидразингидрата (0,3.1 голь) 5 ч. Охлаждают и отсасывают осадок.Если осадка иет, сгущается маточный раствор. Осадок или остаток растворяют в воде,ири случае извлекают эфиром и водную фазуподкисляют концентрированной соляной кислотой, а осадок отсасыва 1 от. Результаты приведены в табл, 4.б) 0,1 11 оль ароматического о-хлорцитросоединения нагревают в 50,цл спирта с 15 г100%-цого п 1 дразиип 1 драта (0,3,цо.гь) 10 чв автоклаве до 110 С. Обработка, как указанов иуиктс а. Результаты приведены в табл. 4,с) 0,1 .цо,1 ь ароматического о-хлорнитросоединсиия к 1 шятят с флегмой в 50 л 1 л этанолас 27,2 лг,г трпэтиламииа (0,2 лго,гь) и 5 г100% -ного п 1 дразиигидрата (0,1 )11 оль) 5 ч.Затс.1 сгущают и остаток обрабатывают, какуказано в пункте а. Результаты приведеныв табл. 4.25 Сз 1 яСХзО (211,7)173 - 174 С 51,05; Н 4,76; Х 19,87.С 50,8; Н 4,7; Х 20,2. 6-Хлор-окси-изопропилбснзтриазол (этанол - вода) В - Ся м 1О 1 Предмет изобретенияСпособ получения пептидов конденсацией 1 Ч-защищенных аминокислоты или пептида со сложным эфиром или ампдом аминокислоты 50 или пептида в присутствии карбодиимида сорганическими добавками с последующим выделением известными приемами свободного или частично или полностью защищенного пептида, оглачаюа(ийся тем, что, с целью сни жения рацемизации, в качестве органической добавки используют 1-оксибензтрпазолы об щей формулы где К - водород, галоген, низший алкил, трпфторметпл, нптро-, пиано-, метокси-, этокспгруппы, группа амида сульфокислоты или карбоксамида, п=1 - 4, в количестве - 2 эквивалентов.Приоритет по признакам:05,04.69 прп К - водород.24.07.69 прп К - галоген, низший алкил трифторметил, нптро-, циано, метоксп-, этоксигруппы, группа амида сульфокислоты пли к арбокса мида, и = 1 - 4.