Штамм вируса гриппа а(h3n2) для приготовления диагностических препаратов

(51)5 С 12 й 7/О ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССРГОСПАТЕНТ СССР) ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ЕТЕЛЬСТ К АВТОРСКОМУ огии(54) ШТАММ ВИРУСА ГРИППАДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГСКИХ ПРЕПАРАТОВ(57) Использование: штамм вируса грип(НЗ й 2) - А (Караганда) 398/90, примемый для приготовления диагностичепрепаратов. Сущность изобретения: ш(Ш) вируса гриппа А/Караганда/39представляет собой дрейф-вариант и Изобретение относится к вирусологии и может быть использовано для получения диагностикума вируса гриппа.В настоящее время особое внимание обращает на себя все усиливающаяся гетерогенность вирусной популяции сероподтипа А (НЗ й 2) на фоне длительной циркуляции его в популяциии человека (Гендон Ю.ЗКлимов А.И., Дреннер Л; и др. . Сравнительный анализ геномов эпидемических штаммов вирусов гриппа // Молекулярная генетика, микробиология .и вирусология, 1984, М 12,с, 24-29; Лузянина Т.Я., Гринбаум Е.Б., Юхнова Л.Г. и др, Лабораторная характеристика вирусов гриппа А (НЗ й 2) возбудителей эпидемии 1983 г. в типного штамма А/Сычуань/2/87 (НЗ М 2. Вирус хорошо репродуцируется в системе куриного эмбриона при 37 С в течение 48 ч до инфекционного титра 5 9 ЭИДБо/0,2 мл. Ш хорошо агглютинирует эритроциты кур, слабее - морской свинки, совершенно не взаимодействует с эритроцитами мь 1 шей, овцы, свиньи, лошади и крупного рогатого скота, практически не элюирует с куриных эритроцитов, слабопатогенен для белых мышей, обладает низкой гемагглютинируеющей активностью и высокой иммуногенностью, Ш А/Караганда/398/90 - ингибиторезистентный, В состав гемагг-. лютинина входят НЗ.10 и НЗ.16 детерми- нанты. Положительный эффект: Ш Ф/Караганда/398/90 может быть использован для производства диагностических препаратов, предназначенных для идентификации вновь выделенных вирусов гриппа и обнаружения антител, 5 табл. Ленинграде // Аста ч301,Нарастание гетерогенности вирусов А (НЗ К 2) может предшествовать появлению нового антигенного варианта данного подтипа возбудителя ( цуаппа ТУа., ОоцЬеч О.В., чапоча И.А, ет а. С)агастегз 1 с о 5 ап 19 епс апб Ьоо 9 са ргорег 1 ез оЮ пЛцепла А чгцзез зоатеб бЛегеп 1 ербеп)с оЮ 1)е заве сусе // Апп МсгоЫооцу, 1975, 126 Ь; р 461 - 470). В связи с этим прогностическое значение может иметь установленные направленности процесса изменчивости антигенной структуры возбудителя, а также оперативно выявление новых антигенных вариантов (ЯыК В., йозтоапзКу Е., е 1 а. Характеристика эпиде 1789561мических штаммов вируса гриппа А 1983 года с помощью поликлональных и моноклональных антител и выявление двух одновременно циркулирующих антигенных вариантов / Аста чего., 1986, М 3, с. 220- 226). Изоляты эпидемий 1990 г. относились к сероподтипу А (НЗ К 2), в основном были близки международным референс-штаммам А/Сычуань/2/87 и А/Гуандрнг/39/89,Предлагаемый штамм А/Караганда/398/90 является дрейф-вариантом проютипного штамма А/Сычуань/2/87, Штаммвыделен из н/гл смыва больного человека при пассировании на куриных эмбрионах в феврале 1990 г. во время эпидемической 15 вспышки гриппа в Караганде (Казахская ССР) и хранится в коллекции Института вйрусологии им. Д.И.Ивановского АМН СССР (депозитор И. 2264).Целью изобретения является получение 20 штамма вируса гриппа А/Караганда/398/90 (НЗ И 2), обладающего специфи-ческой иммуногенностью, позволяющейиспользовать его для приготовления диагностических препаратов при идентифика-.25 ции вновь выделенных вирусов гриппа,Антигенную структуру штамма изучали согласно рекомендациям ВОЗ в РТГА(реакция тормокения гемагглютинирующей активности) с использованием набора 30 лоликланальных крысиных сывороток к эталонным штаммам А(НЗ К 2) и в РПНА(реакция подавления нейраминидазнойактивности с кроличьими иммунными сыворотками к рекомбинантным вирусам Р 19 35 (Невой), Р 9 (НецК 2) и Р 17(Нец К 2). Дополнительно проводился тонкий иммунологический анализ штамма а РТГА с моноклональными антителами к вирусу А/Филиппины/2/82, Кроме того, в иммуно логическом анализе были использованы моноспецифические антитела к отдельным антигенным детерминантам гемагглютинина.Результаты изучения антигенной струк туры даны в табл. 1-5.Выделенный штамм А/Караганда/398/90 характеризуется широтой анти- генного спектра при взаимодействии с сыворотками к эталлонным вариантам 50 А/Филиппины/2(82, А/Кен/1/84, А/Миссисипи/1/85, А/СССР/2/85, А/Ленинград/360/86, А/Виктория/7/87, до 1/4-1/16 гомологичного титра, а с А/Сычу.ань/2/87 до 1/2 гомологичного титра; 55Использование в иммунологическом анализе монорецепторных сывороток к отдельным детерминантам гемагглютинина, полученных методом специфической адсорбции, дало возможность получить объективную оценку новизны предлагаемого варианта вируса. Опыты показали, что штамм А/Караганда/398/90 имел своеобразноесочетание антигенных детерминант, характеризующееся наличием одной "старой" детерминанты НЗ,10, встречающейся всоставе вирусов бангкокской разновидности и новой - НЗ.16 - "сычуаньской" детерминанты,Применение моноклональных антител квирусу гриппа А/Филиппины/2/82 позволило выявить своеобразие нового штамма.Эпитопы его опознавались 6-7 из 13 использованных моноклональных антител,Адапционные свойства. Выделенный отчеловека вирус А/Караганда/398/90 релродуцируется в системе куриного эмбрионапри оптимальной температуре (37 С) до инфекционного титра 59 ЭИД 50/0,2 мл,Штамм обладает низкой геммагглютинирующей (1: 32-1; 128) и высокой иммуногенной активностью (титр антител в РТГА 1;1280),Свойство агглютинации. Вирус обладает узким спектром гемагглютинирующей активности. Он хорошо агглютинируетэритроциты кур (в титре 1: 32-1: 128), слабее - морской свинки(3: 32-1: 64), в низкихтитрах эритроциты. белых крыс (1: 4 - 1: 8),совершенно не взаимодействует с эритроцитами мышей, овцы, свиньи, лошади крупного рогатого скота.Терморезистентность (ТБ 6-признак).Предлагаемый штамм обладает термостабильным гемагглютинином, активность которого сохранялась после прогревания при56 С в течение 4 ч и утрачивалась при 62 Св течение 1 ч,Ингибиторочувствительность, ВирусА/Караганда/398/90 ингибиторезистентный.Адсорбционно-элюирующая активность, Новый штамм обладает вь 1 сокой сорбирующей способностью по отношению кэритроцитам кур (до 100 о) и практическине элюирует с эритроцитов.Патогенные свойства. Вирус А/Караганда/398/90 праявляет слабопатогенныесвойства для белых мышей;Штамм, выделенный от человека (А/Караганда/398/90), предназначен для производства гриппозного антигена, которыйможет быть использован при серологической диагностике гриппа, С этой цельюштамм размножают путем заражения 9-10 дневных куриных эмбрионов в аллантоис-.ную полость.П р и м е р. Лабораторные животные -белые полость,1789561 антигеном вируса гриппа человека А(Н М 1)реакция отрицательна,Таким образом, предлагаемый штамм вируса гриппа А/Караганда/398/90 А (НЗ М 2),5 изолированный от человека, и приготовленные на его основе диагностические препараты могут найти применение ввирусологической практике для- идентификации вновь выделенных штаммов и изуче 10 ния популяционного иммунитета населенияс целью осуществления надзора за распространением вируса гриппа в природе и процессом изменчивости возбудителейгриппозной инфекции.15 Схема иммунизации. Иммунные сыворотки получают в результате 4-кратной внутрибрюшинной иммунизации белых крыс вируссодержащей аллантоисной жидкостью с недельным интервалом, Животных обескровливают через 10 дней после последней иммунизации, Иммунную сыворотку освобождают от неспецифических ингибиторов обработкой отечественным препаратом нейраминидазы из нехолерного вибриона.Титр иммунной сыворотки заявляемого препарата в РТГА с гомологичным антигеном составляет 1; 1280, с гетерологичным Формула изобретения Штамм вируса гриппа А (НЗ Г 4 2) ГКВ2264, для приготовления диагностическихпрепаратов. Таблица 1 г Исследование антигенной структуры гемагглютинина вируса гриппа А/Караганда/398/90 в РТГАТит в РТГА с ви сами Подтип гемагглютининагомологичным А/Караганда/398/90 П р и м е ч а н и е: Здесь и в последующих таблицах титры даны в обратнах величинах,А/свинья /Айова/15/3 А/Пуэрто-Рико/8/34 А/СССР /090/77 А/Сингапур/57 А/Гонконг/1/68 А/По рт-Чалмерс/1/7 А/Виктория/3/75 А/Техас/1/77 А/Филлипины/2/82 А/Кен/1/84 А/Миссисипи/1/85 А/СССР/2/85 А/Ленинград/360/86 А/Виктория/7/87 А/Сычуань/2/87 В/Синга п /222/79Н 1 Н 1 Н 1 Н 2 НЗ НЗ НЗ НЗ НЗ НЗ НЗ НЗ НЗ НЗ НЗ 1280 1280 2560 2560 1280 2560 2560 2560 1280 640 1280 1280 1280 1280 1280 640 20 20 20 20 20 20 20 2040 320 20 40 80 20 640 201789561Таблица 2 Анализ в РТГА иммунной сыворотки к вирусу гриппа А/Караганда/398/90блгриппа А/Караганда/398/ Лсследование антигенной структуры нейраминидазы вируРПНА1789561 Таблица 4Определение антигенного состава гемагглютинина вируса гриппа А/Караганда/398/90 Таблица 5 Изучение антигенных взаимосвязей штамма вируса гриппа А/Караганда/398/90 с моноклональными антителамиСоставитель М.СаятовТехред М.Моргентал орректор З.Салк акт каз 329 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гага