Штамм вируса ласса для получения иммунобиологических препаратов

(5 РЕ а ОЧ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(56) Сапбогга К.АОавопее Е,В., Саю С,Е,Аптрепс геатОпзЫрз Ьеьчееп атеппатебапд райоуепс зтга 1 пз ОГ,опи ч 1 гцз.вес.Чгооду, 1989, ч, 27, р, 145-150.Вгаутоп РЯ., МааззаЬ Н.Г. СЬагас 1 ег 1 гатопо 1 а попчгцем чаг 1 апт о 1утрйосуОССЬог 1 овеп 1 п 9 Юз ч 1 гоз. АгсЬ. чгооцу, 1982, ч.(54) ШТАММ ВИРУСА ЛАССА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ Изобретение относится к вирусологии и может быть использовано, например; для создания средств специфической диагно- стики и профилактики такого высокопатогенного заболевания, как лихородка Ласса,Вирус Ласса, являющийся этиологическим агентом одноименной геморрагической лихорадки, относится к семейству Агепач 1 г 1 бае, Это заболевание распространено в Африке (до 300.000 случаев в год), однако не исключена воэможность заноса. его на территорию СССР. Средства специфической профилактики в настоящее время не разработаны, и данное заболевание не контролируется, Учитывая высокую контагиозность и летальность прй лихорадке Ласса, разработка диагностических препаратов и средств специФической профилактики (вакцин) является весьма актуальной, Попытки создать вакцину на основе убитого конценЖЫ 6 ВВМЯППИИ 8 ЙВВЙ Е Н ИЯ ивлиотккА 2(57 Использование: вирусология. Сущность изобретения; вирус Ласса, штамм ОзаЬ, клонирован трехкратным перекалыванием из бляшек агарового покрытия и затем последовательно пассирован в присутствии 1анти-Ласса сыворотки морской свинки, Проведено 25 пассажей с контролем их патогенности для мышей линии СВА, чувствительных к данному вирусу. Штамм депонирован в Государственной коллекции вирусов под номером 872, непатогенен для лабораторных животных, используется для создания средств специфической диагностики, профилактики данного заболевания, изучения его патогенеза, 1 ил,трированного и очищенного вируса не увенчались успехом, так как йрепарат оказался иммуногенен. С другой стороны, изолированы штаммы так называемых Ласса-подобных вирусов - Мопейя (Мозамбик), Мобала, Иппи, имеющих значительное антигенное родство с вирусом Ласса, однако непатогенных для человека, Иммунизация лабораторных животных вирусом Мопей предотвращала развитие летальной инфек "ции. В связи с этим вызывает интерес получение аттенуированного вэризнтгг вируса Ласса для изучения патогенеза данной инфекции и разработки средств специфической диагностики и профилактики.К настоящему времени получено значительное количествоаттенуированйьгх (непатогенных) штаммов вирусов. Некоторые из них являются вакцинными: например, известны штамм 170 вируса желтой лихорадки, 1789560штамм Сабина полиовируса и др. Все этие,акцинные вирусы Способны к репродукциии в организме привитых стимулируют выработку иммунного ответа, предотвращая развитие заболевания при проникновении ворганизм хозяина патогенного вируса. Природа аттенуирования изучена недостаточно. В частности, известно, чтоаттенуированные штаммы 17 Р желтой лихорадки, ТСштамм вируса Венесуэльскогоэнцефалита лошадей и 4 р, имеют несколькоаминокислотнйх замен в структурных и неструктурных белках. Однако эти замены, повидимому, являются критическими дляпроявления вирусами патогенности.Для вирусов рода Агепачгбае ранеебыл описан аттенуированный штамм ХС 13вируса Хунин, полученный путем пассирования патогенного вируса на культуре клеток МА. Вирус Хунин, являющийсяэтиологическим агентом аргентинской геморрагической лихорадки, относится к аренавирусам Нового Света (ЛатинскаяАмерика), имеющим значительные антигенные отличия от вирусов Старого Света -лимфоцитарного хориоменингита, Ласса идр, Путем пассирования на клетках929 притемпературе 25 С получен вариант вирусалимфоцитарного хориоменингита (прототипный вирус семейства АгепачгЫае),непатогенный для чувствительных к вирусу ЛХМ. лабораторных животных (мыши линии РМ 4-6). Аттенуация была достигнута на 17 пассаже вируса. Однако аттенуированныйвариант вируса Ласса не описан, что сдерживает получение средств специфическойпрофилактики и индикации данного особоопасного заболевания,Цель изобретения - получение штаммавируса Ласса, непатогенного для лабораторных животных используемого для получения специфических антисывороток иантигенных препаратов.Цель достигается путем многократногопассирования предварительно клонированного перекалыванием иэ бляшки агаровогопокрытия вируса Ласса (штамм ЗозаЬ) вприсутствии 1анти-Ласса иммунной сыворотки.Предложенный новый штамм в патентной и научно-технической литературе неописан. Аттенуированный штамм вирусаЛасса депонирован в Государственной коллекции вирусов (ГКВ) Института вирусологии им. Д.И, Ивановского АМН СССР, г.Москва. Номер депонента ГКВ -872,Характеристика штамма. Название вируса, штамма: Вирус Ласса, 25-й пассаж. Место в универсальной системе: семейство Агепачгйаерод Агепачгоз, аренавирусЛасса.Штамм получен в 1988 году путем клонирования патогенного вируса Ласса,5 штамм озаЬ, трижды с перекалыванием избляшки агарового покрытия в бляшку, а затем пассирования на клетках перевиваемойлинии Чего в присутствии 1анти-Лассаиммунной сыворотки морской свинки. Про 10 ведено 26 пассажей с контролем титров реп роду кции на кул ьтуре клеток ипатогенности для лабораторных животных,чувствительных к исходному вирусу Ласса,штамм озаЬ, мышей линии СВА, В резуль 15 тате пассиравания вирус утерял способность вызывать летательную инфекцию улабораторных животных,Выделен; СССР, Белорусский НИИ эпидемиологии и микробиологии МЗ БССР, То 20 роп А.В., Красько А.Г., Владыко А.СЩемер А.А.Физико-химические свойства: размервирионов колеблется от 100 до 300 нм, РНКодноцепочечнаяАнтигенные свойства: в тестах иммуноферментного и иммунофлюоресцентногоанализов полученный вариант вируса Лассасвязывался с иммунными поликлональнымисыворотками к вирусу Ласса, штамм Зозай,Генетические признаки; геном сегмен-30 тированный, имеется большойи малый(Я) сегменты РНК. Сравнение электрофореграмм вирионной РНК пассированного вируса, 25-й пассаж, и вируса Ласса, штамм,оза 1., не выявляет различий в подвижно 35 сти Я исегментов - см. фиг.На электрофореграмме приводится вирионная РНК вируса Ласса, непатогенногодля лабораторных животных (25-й пассаж) всравнении с в РНК исходного вируса Ласса,40 штамм озаЬ, и других аренавирусов:дорожка 1 - в РНК вируса Ласса, штаммСьера-Леоне,дорожка 2 - в РНК вируса Ласса, непатогенного для лабораторных животных, 2545 пассаж,дорожка 3 - в РНК исходного вирусаЛасса, штамм 3 озаЬ,дорожка 4 - в РНК вируса Мачупо.Прочие свойства: штамм адаптирован к50 культурам клеток Чего и 929,;вызываетбляшкообразование на 6-7 сутки после заражения на монослое клеток Чего С размером бляшек 2-4 мм.Свойства полученного штамма иллюст 55 рируютея следующими примерами.П р и и е р 1. Группе (И 1) из 6 мышейлинии СВА, 100чувствительных к вирусуЛасса при внутримоэговом введении, вводили аттенуированный вирус Ласса, 25-йпассаж, в мозг 1000 БОБ/мышь. Другой1789560 актор Составитель А;ТоропТехред М,Моргентал Корректор И.Муска Тираж Подписное И Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС 113035, Москва, Ж. Раушская наб., 4/5аказ 3ВНИ Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 группе (й 2) из 6 мышей данный вирус вводили внутрибрюшинно, 1000 БОЕ/мышь. Третьей группе (ИЗ), 6 мышей, вводили высоколетальный исходный вирус Ласса, штамм Зозай, 1000 БОЕ/мышь. Через семь 5 дней животным всех групп, а также контрольной группы (6 мышей) ввели в мозг летательную дозу 1000 БОЕ/мышь исходного вируса Ласса, На 7 - 8 сутки после заражения все животные в контрольной группе по гибли с характерной клинической картиной. В группах й 1-3 все животные выжили и были выведены из опыта через 21 день после заражения (3 инкубационных периода). Таким образом, полученный штамм вируса 15 Ласса, 25-й пассаж, не вызывает гибель мышей чувствительной линии СВА при введении внутрибрюшинно и интрацеребрально, предотвращает летальную инфекцию при введении летальной дозы вируса Ласса, штамм 20 Зова п.П р и м е р 2. Две группы беспородных морских свинок из 6 и 10 животных иммунизировали подкожно 10000 БОЕ/животное25 ф о р мул а из о бр ете н и я Штамм вируса Ласса ГКВ 872 для получения иммунобиологических препаратов. аттенуированным вариантом вируса Ласса, 25-й пассаж, затем через 28 дней ввели внутрибрюшинно 100000 БОЕ/животное. Все животные выжили и использовались для получения специфических анти-Ласса сывороток. В двух контрольных группах из 20 и 8 животных при аналогичной схеме введения вируса Ласса, штамм Зовап, погибли 11 (55 ) и 6 75 ) животных соответственно. Следовательно, полученный штамм вируса Ласса, 25-пассаж; не вызывает гибели беспородных морских свинок, высокочувствительных к "дикому" вирусу Ласса,Таким образом, получен непатогенный штамм вируса Ласса который, как видно из вышеприведенных примеров, возможно использовать для получения вирусспецифических антисывороток и антигенных препаратов на чувствительных к вирусу Ласса лабораторных животных (мыши, морские свинкии др,)в исследованиях патогенеза аренавирусов; для генетических иследований аренэвирусов.