Способ определения фотопериодической чувствительности форм проса

ГОСУ ВЕДО ИЗОБРЕТЕН П К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(54) СПОСОБ ОПРЕДБ 1 ЕНИЯ ФОТОПЕРДИЧЕСКОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ФОРПРОСА(57) Изобретение относится к сельсков частности к селекции проса. Цельповышение точности определения фот длины дня опредепя табл. му хозяйству вызывизобретения - ют к опериодиСОЮЗ СОВЕТСКИХ истических РеспуБл СТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЮВО СССР (ГОСПАТЕНТ СС(5 Ц 5 А 01 7 ОО ческой чувствительности форм проса, ускорение аюсоба и снакение его трудоемкости. Проводят 15-суточное выращивание растений при 20 фС и 16-часовой длине дня до получения проростков. Затем выдерживают их сутки при 38- 39 фС. Часть проростков выдериоеают сутки при 8-часовой длине дня. В качестве биологичеавго вжазателя анализируют содержание индопипуксусной кислоты (ИУК), Формьс у которых уменьшение неает изменений в содержании ИУКак фотопериодичеао нейтральные.Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции проса.Целью изобретения является повышение точности определения, ускорение способа и снижение его трудоемкости. 5Пример осуществления способа, Семена Фотопериодически нейтрального сортаК(полученного из Украинского научноисследовательскогоо института растениеводства, селекции и генетики им,Б,Я,Юрьева), фотопериодически слабочувствительного сорта Кинельское 27/62 и фотопериодически более чувствительныхсортов Харьковское кормовое, Омское 9,Скороспелое 66, Мироновское 51 проращивают в течение 15 сут в песчаной культурепри 20 С и 16-часовой длине дня в контролируемых условиях камеры искусственногоклимата.Выращенные проростки на протяжении 20одних суток выдерживают при 38 - 39 ОС и16-чэсовой длине.дня, что способствует ихадаптации к повышенной температуре. Далее опытные проростки в течение одних суток выдерживают при той же повышеннойтемпературе в условиях 8-часового дня. Вкачестве контроля служат проростки, которые выращивают при 20 С и 24-часовом освещении,Минеральное питание проростков осуществляют путем их полива раствором Арнона-Уогленда, начиная с 7-суточного икончал 15-суточным возрастом.Ферментную вытяжку с ИУК-оксидазной активностью получают по методике 35Гамбурга из 1 г навески свежей ткани надземной части проростков, которую растирают в охлажденной ступке с 10 мл 0,02 Мфосфатного буфера, рН 6,1, После 30-минутной экспозиции в холодильнике гомогенат 40центрифугируют при 8000 об/мин в течение10 мин, Для отделения ферментной вытяжкиот ингибиторов эндогенного происхождения используют гель-фильтрацию на колонке с сефэдексом 6 = 25 (Яаебеп), 45Первые 2,5 мл элюата отбрасывают, следующие б мл собирают для определенияИУК-оксидазной активности,Для этого готовят реакционную смесь (1 мл раствора 2,4-дихлорфенолэ, 1 мл раствора МпС 2, 5 мл раствора ИУК, 4 мл 0,02 М фосфатного буфера, рН 6,1, и 2 мл ферментной вытяжки) и прокачивают ее на лабораторной качалке в темноте при 26 С, Далее 55отсюда через 10, 20, 30, 40 и 60 мин отбирают по 1 мл реакционной среды и переносят в пробирку с 2 мл реактива Сальковского. Окраска здесь развивается в течение 1 ч, Перед началом колориметоировэния пробирки центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин,Колориметрирование проводят на фотоколориметре при зеленом светофильтре (максимум пропускания при 490 ммк). По полученным отсчетам строят кривую динамики разрушения ИУК, Для расчета активности ферментативной активности используют вась прямолинейный участок полученной кривой, т, е. тот отрезок времени, в течение которого разрушение происходит с постоянной скоростью. Расче активности проводят в мкг ИУК/мин на 1 г сырой массы,Проведенные исследования показали (см. табл, 1), что в условиях 16-часового дня ни температура 20 С контрольного варианта, ни более низкие температуры 16 и 10 не способствовали четкому проявлению фото- периодической чувствительности и исследуемых сортов. При всех испытаниях в опыте температурах не удалось обнаружить никаких закономерных различий между сортами проса с неодинаково выраженной фотопериодической реакций. В то же время при повышенной темперагуре 38-39 С у фото- периодически нейтрального сорта Ксодержание эндогенной ИУК не изменялось, а у слабочувствительного сорта Кинельское 27/62 уменьшение количества гормона роста было минимальным. У фото- периодически высокочувствительных сортов убыль ИУК в этом случае была значительно более ощутимой, что может свидетельствовать о заметном у них ингибировании ростовых процессов.Следует отметить, что пониженная температура 10 С оказывает неблагоприятное воздействие на осуществление физиологических процессов у исследуемых сортов проса, о чем можно судить по заметному пожелтению проростков, обусловленному разрушением зеленых пигментов, Между тем проростки жаростойкого проса при воздействии на них повышенной температуры 38 - 39 С выглядят нормальными, Иэ этого следует, что именно температура 38-:39 С в наибольшей степени способствует проявлению меры фотопериодической чувствитель-. ности, свойственной исследуемым сортам проса,Проведенными исследованиями установлено (см, табл. 2), что при температуре 20 ОС контрольного варианта опыта наиболее надежные результаты по оценке фото- периодической чувствительности исследуемых сортов получены в случае 8-часового освещения проростков, Именно 8-часовой фотопериод обусловливает наименее заметную убыль эндогенной ИУК у фо 1 опе1601793 Таблица 1 Степень разрушения ИУК-ферментной вытяжкой с ИУК-оксидаэной активностью в надземной части проростков проса при воздействии на них 16-часового дня и разных температур(мкг/мин на 1 г сырой массы) риодически нейтрального сорта К. У других сортов уменьшение содержания стимулятора роста гормонального характера более существенно.Таким образом, для выявления в гибридных популяциях фотопериодически нейтральных или слабочувствительных форм проса следует отбирать проростки, у которых содержание эндогенной ИУК под влиянием смены условий с 20 С при 16-часовой экспозиции на свету до 38-39 С и 8-часового фотопериода подвергалось минимальным изменением подобно тем, которые наблюдаются у стандартных фотопериодически нейтральных или слабочувствительных сортов.Зкспериментальная проверка показала (см, табл, 3), что комплексное воздействие на проростке 8-часовым фотопериодом в сочетании с температурой 38-39 С надежно обеспечивает оценку фотопериодической чувствительности исследуемых войтов и селекционных форм проса,Из данных табл, 3 видно, что у фотопе риодически нейтрального сорта К.3218 содержание эндогенной ИУК под влиянием сокращения длины дня при повышенной температуре 38-39 С не изменилось, у слабочувствительного сорта Кинельское 27/62 оно изменилось незначительно. Судя по степени разрушения эндогенной ИУК в условиях проверенного опыта просо Мироновское 51 может быть отнесено к фотопериодически среднечувствительным сортам, а ос тальные сорта проявляли высокуюфотопериодическую чувствительность,(56) Максимов Н,А,Краткий курс физиологии20 растений. - М,: Сельхозгиэ, 1958, с. 480.Таблица 2 аблица 3 тепень разрушения ИУК-ферментной вытяжкой с ИУК-оксидазной активностью в надземой части проростков проса в условиях 8-часовой длины дня при 38 - 39 С (мкг ИУК/мин на1 г сырой массы) н Степень разрушения ИУК-ферментной вытяжкой с ИУК-оксидазной активностью е надземной части проростков проса при 20 С и разной длине дня (мкг ИУК/мин на 1 г сырой массы)1601793 Формула изобретения Составитель И, РешетниковаРедактор М. Кузнецова Техред М. Моргентал Корректор Н. Король Тираж Подписное НПО "Поиск" Роспатента113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Заказ 3577 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОТОПЕРИОДИЧЕСКОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ФОРМ ПРОСА, включающий выращивание растений при разных световых режимах и анализ биологического показателя, по которому определяют фотопериодическую чувствительность, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, его ускорения и снижения трудоемкости,выращивание растений проводят при 20 С и 16-часовой длине дня в течение 15 сут до получения проростков, затем выдерживают их сутки при 38 - 39 С и часть проростков - еще сутки при 8-часовой длине дня, в качестве биологического показателя анализируют содержание индолилуксусной кислоты и формы, у которых уменьшение длины дня не вызывает достоверных изме нений в ее содержании, определяют какфотопериодически нейтральные.