Способ получения соли сульфоаденозил-l-метионина

(51)4 С 1 ТЕНИ АТЕН ЕСУЛЬ я к химинности.ульфоаделизируютрацией ч оОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМРИ ГННТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБ 1(57) Изобретение относитфармацевтической промышлходные дрожжи обогащаютзил.-метионином, КлеткиЛизат очищают ультрафиль Изобретение относится к химико- фармацевтической промышленности и ка сается спосоЬа получения вещества об щей формулы: сульфоадеНозил-(.-метионин и (СН ) (БО Н ) ,где п=1 до 2, ш=3 до 12.Целью изобретения является повыше ние растворимости целевого продукта по сравнению с аналогом.П р и м е р 1. Получение 0,2 н. растворов дисульфокислот общей формулы (СН ), (БО Н)75 л дистиллированной воды, 20 л 95 ь-ного этанола и 5 л н-Ьутанола доЬавляют к 21,6 кг (100 моль) 1,4- дибромЬутана, Добавляют 26,46 кг (210 моль) безводного сульфита натрия и смесь нагревают с обратным холодильником в течение 3 дней. По "окончании реакции добавляют 20 л дистиллированной воды и смесь перего мемЬраны с пределом пор 10000 дальтон, пропускают через колонку со слаЬокислотной ионооЬменной смолой.Элюат пропускают через колонку с ам= берлитом со скоростью 0,2-1,0 объема жидкости в 1 ч на оЬъем смолы и про мывают через колонку с амберлитом. Затем промывают раствором дисульфоновой кислоты до исчезновения целевого продукта из элюата, Раствор подают в устройство обратного осмоса плоского типа, где использованы полиамидные обессоливающие мембраны. Полученный раствор высушивают распылениемопри 140-200 С, Растворимость целевого продукта повышается в 10 раз. няют до тех пор, пока полностью не удалят спирты, Смесь разбавляют водой до конечного объема 60 л и нагревают до тех пор, пока не происходит полного растворения.Полученную двунатриевую соль 1,4- бутандисульфокислоты оставляют крисо таллизоваться в течение ночи при 4 С. Продукт отфильтровывают и промывают 10 л воды.Маточные растворы концентрируют под вакуумом до объема 20 л и оставляют кристаллизоваться в течение ночи при 4 С. Продукт отфильтровывают и промывают 4 л воды. Крисгаллическую массу от двух Фильтрований повторно суспендируют в 50 л воды и рэсгворяюг в горячих условиях. Раствор оставляют крисгаллизовагься в гечение ночи при 4 С. Продукт отфиль 1 ровымют и пронываюг 5 л воды. Нэгриевун 1 соль Ьусэн 1530100дисульфокислоты высушивают под вакуумом.Последующую фракцию продукта получают путем концентрирования маточныхрастворов до 10 л и выдерживания ихдля кристаллизации в течение ночи при4 С с последующим отфильтровываниемпродукта и сушки его под вакуумом.Таким образом получаюТ 25,2 кгдвунатриевой соли,4-бутандисульфокислоты, моногидрата (90 моль, 904 ный молярный выход).Рассчитано, 4: С 17,1, Н 3,6,8 22,915СНОСМа НОНайдено, : С 17,1; Н 3,7,Б 22,9Готовят колонку, содержащую 200 лсмолы йпЬег 11 е 1 К 120, предварительнг 20активированной 6 н. раствором НС 1 дотех пор, пока из элюата не исчез ионЯа , и промывают ее дистиллированнойводой до тех пор, пока из элюата неисчез ион С 1 2525,2 кг двунатриевой соли,4-Ьутандисульфокислоты, моногидрата растворяют в 300 л воды и подают в головную часть колонны. СоЬирают элюат,содержащий 1,4-Ьутандисульфокислоту,и колонку промывают водой до тех пор,пока значение рН элюата не достигло4. Элюат разбавляют до конечного объема 900 л, чтобы получить 0,2 н. раствор 1,4-Ьутандисульфокислоты, которуюиспользуют для получения соответствующей соли сульфоаденозил.-метионина.Действуя аналогично,. но используя20,2 кг 1,3-диЬромпропана в качествеисходного материала, получают 900 л400,2 н. раствора 1,3-пропандисульфокислоты.Используя 23 кг 1,5-диЬромпентана,получают 900 л 0,2 н. раствора 1,5 пентандисульфокислоты.Используя 24,4 кг 1,5-дибромогексана, получают 900 л 0,2 н. раствора1,6-гександисульфокислоты.Используя 27,2 кг 1,8-дибромоктана, получают 900 л 0,2 н. раствора1,8-октандисульфокислоты.Используя 30 кг 1,10-дибромодекана, получают 900 л 0,2 н. раствора1,10-декандисульфокислоты.П р и м е р 2, Получение сол 1 сульфоаденоэил-Е-метионин 1,5 (1,4-бутан 55дисульфоната),220 л этилацетата и 220 л водыдобавляют при окружающей температуре к 1800 кг дрожжей, обогащенных сульфоаденозил.-метионином (6,88 г/кг) поспособу Шленка.После энергичного перемешивания втечение 30 мин добавляют 1000 л,0,35 н. раствора серной кислоты иперемешивание продолжают еще в течение 1,5 ц.Смесь фильтруют через вращающийсяфильтр, который промывают водой, чтобы получить 2800 л раствора, содержащего 4,40 г/л сульфоаденоэил.-метионина, что равно 9954 от количества,присутствующего в исходном материале.Раствор сульфоаденозил-Е-метионинаполученный та.ким образом (рН 2,5),подают в установку ультрафильтрации,где используют труЬчатые мемЬраны сзадержкой 10000,Проникающий поток, прошедший цереэмемЬраны, соЬирают в подходящем сосуде, в то время как концентрат непрерывно рециркулируют до конечного оЬъема 200 л, В этом месте добавляютдистиллированную воду и продолжаютрециркулирование до тех пор, покаполностью не экстрагируют сульфоаде"нозил,-метионин.Получают 3500 л лизата, значениерН которого доводят до рН 5 путемдобавления 2 н. раствора ИаОН.Готовят колонку содержащую 400 лсмолы йпЪег 11 те С(; 50 в Н форме,которую тщательно промывают дистиллированной водой.Лиэат пропускают через колонкусмолы со скоростью 800 л/ч, которуюподдерживают постоянной в течениевсей процедуры,Затем последовательно пропускают400 л дистиллированной воды, 3200 л0,1 моль/л уксусной кислоты и 400 лдистиллированной воды.Сульфоаденозил,-метионин элюируют800 л 0,2 н. раствора 1,4-Ьутандисульфокислоты. 800 л полученного таким образом элюата содержит приблизительно 10 кг сульфоаденоэил,-метионина.Готовят колонку, содержащую 400 лсмолы йпЬег 1 гге ХА 4, которую предварительно активируют 800 л 0,1 н, раствора ИаОН и 800 л 0,1 н. раствораНБО 4 а затем тщательно промываютдистиллированной водой.Ранее полученный раствор сульфоаденозил-Е-метионина пропускают через колонку со скоростью 200 л/ч,54,9 45 50 515301 причем скорость поддерживают постоянной в течение всего процесса. Затем через нее пропускают 400 л 0,02 н. раствора 1,4-бутандисульфокислоты. СоЬирают элюат, содержащий сульфоаденозил.-метионин (примерно 1000 л, содержащих 10 кг сульфоаденозил.- метионина). Раствор, полученный таким образом, подают в устройство обратного осмоса плоского типа, где использованы полиамидные оЬессоливающие мембраны. Ц этом устройстве раствор сульфоаденозил-Ь-метионина концентрируют до 80 л, содержащих 99 кг суль фоаденозил-Ь-метионина. ДоЬавляют 5 л 2 н. раствора Ьутандисульфокислоты. Раствор, полученный таким оЬразом, подают в распылительную осушительную установку, в которую подают 20овоздух при 160 С. Сухой продукт непрерывно выводят их установки.Получают 18 кг порошкообразного продукта, имеющего при анализе следующий состав, 4; 25Сульфоаденозил.- метионин1,4-Бутандисульфокислота 4490,2 соответствующий соли сульфоаденозил.-метионин. 1,5 (1,4-бутандисульфонат).Продукт имеет вид кристаллического белого порошка, который растворим в воде до 30 вес.4 с образованием Ьесс35 цветного раствора и не растворим в обычных органических растворителях.С помощью тонкослойной хроматографии найдено, что продукт не содержит 40 каких-либо примесей.Рассчитано, 4: Н 11,6; С 34,7, Н 5,1.СН 160 Ь15 С 4 НоО 6йНайдено, 4: И 11,5; С 34,8; Н 5,1.Ультрафиолетовый спектр продукта показывает максимум поглощения (в буфере при рН 4) при 258,5 нм с Е, = =193.П р и м е р 3. Получение соли сульфоаденозил.-метионин 1,5 (1,3- пропандисульфоната).Следуют методике примера 2, но используют 1,3-пропандисульфокислоту вместо 1,4-бутандисульфокислоты.Получают 17,45 кг порошка, который при анализе показывает следующий состав, 4: Сульфоаденозил. -метионин 56,51,3-Пропандисульфокислота 43,3Н,о 0,2соответствующий соли сульфоаденозил 1.-метионин 1,5 (1,3-пропандисульфонат).Продукт имеет вид кристаллическогобелого порошка, который растворим.в воде до 30 вес.1 с образованиембесцветного раствора и не растворимв оЬычных органических растворителях.Тонкослойная хроматография показывает, что продукт не содержит никакихпримесей.Рассчитано, Ф: И 119 С 33,2;Н 4,8,С, Н МОЬ1,5 СНВОЬаНайдено, 1: И 11,9; С 33,1,Н 4,8.Ультрафиолетовый спектр продуктапоказывает максимум поглощения (в Ьуфере при рН 4) при 258,5 нм с Е,==199П р и м е р 4, Получение соли сульфоаденозил.-метионин 1,5 (1,5-пентандисульфоната),Следуют методике примера 2 но используют 1,5-пентандисульфокислотувместо 1,4-бутандисульфокислоты, Получают 185 кг порошка, который прианализе показывает следующий состав,Сульфоаденозил 1.-метионин 53,31,5-Пентадисульфокислота 46,5Н 0 0,2соответствующий соли сульфоаденозил 1.-метионин ф 15 (1,5-пентандисульфоната).Продукт имеет форму кристаллического белого порошка, который растворим в воде до 30 вес.4 с образованиемЬесцветного раствора и не растворимв обычных органических растворителях.Тонкослойная хроматография показывает, что продукт не содержит никакихприМесей,Рассчитано, 1: М 11,3, С 36,2,Н 5,4.С 5 Н 1 ОЬ 15 НФьЬаНайдено, ь: И 11,4, С 36,2,Н 5,3,Ультрафиолетовый спектр продукта(в буфере рН 4) показывает максимумпоглощения при 258,5 нм с Е;-80.20 ЗО 55 П р и м е р 5. Получение соли сульфоаденозил-метионин 15 (16-гександисульфоната).Следуют методике примера 2, ноиспользуют 1,6-гександисульфокислотувместо 1,4-бутандисульфокислоты, Получают 19 кг порошка, который прианализе дает следующий состав,Сульфоаденозил.- 1 Ометионин 51,81,6-Гександисульфокислота 480,2соответствующий соли сульфоаденозилЕ-метионин 15 (1,6-гександисульфоната).Продукт имеет вид кристаллическогобелого порошка, который растворим вводе до 30 вес,Ф с образованиемЬесцветного раствора и не растворимв обычных органических растворителях.Тонкослойная хроматография показывает, что продукт не содержит никакихпримесей.25Рассчитано, Ж: М 10,9; С 37,6;Н 5,6.С Н ИБОЬ 1 5 С 6 Нц 06 ЬНайдено, 4: В 10,8, С 375,Н 5,6.Ультрафиолетовый спектр продукта(в буфере рН 4) показывает максимумпоглощения при 258,5 нм с Е 1,=182.П р и м е р 6. Получение солисульфоаденозил.-метионин 1,5 (1,8 октандисульфоната).Следуют методике примера 2, но1,8-октандисульфокислоту используютвместо 1,4-бутандисульфокислоты. Получают 20 кг порошка, который при 40анализе дает следующий состав, 4:Сульфоаденозил-Ьметионин 49,31,8-0 ктандисульфокислота 505 45Н О 0,2Продукт имеет вид кристаллическогобелого порошка, который растворимв воде до 30 вес.4 с оЬраэованиембесцветного раствора и не растворимв обычных органических растворителях.Тонкослойная хроматография показывает, что продукт свободен от какихлибо примесей.Рассчитано, 4: К 10,4, С 40;0;Н 6,0.С 5 НтО Ь 15 яНщО ЬгНайдено, : И 10,4 С 39,9,Н 5,9 Ультрафиолетовый спектр продукта (в буфере рН 4) показывает максимум поглощения при 258,5 нм с Е 1,173.П р и м е р 7, Получение соли сульфоаденозил.-метионин 15 (1,10- декандисульфоната)Следуют методике примера 2, но 1,10-декандисульфокислоту используют вместо 14-бутандисульфокислоты. Получают 21 кг порошка, который при анализе дает следующий состав,Сульфоаденозил, -метионин 46,81,10-ДекандисульФокислота 53Н 0 0,2 соответствующий соли сульфоаденозил.-метионин1,5 (1,10-деканд гульфоната).Продукт имеет вид кристаллического белого порошка, который растворим в воде до 20 вес./ с образованием бесцветного раствора и не раст,ворим в обычных органических растворителях.Тонкослойная хроматография показывает, что продукт своЬоден от каких- либо примесей.Рассчитано, /: И 9,8; С 42,3; Н 6,5Найдено, /: И 9,9; С 42,4; Н 6,5Ультрафиолетовый спектр продукта (в буфере рН 4) показывает максимум при 258,5 нм с Е 11 =164.Положительный эффект заключается в повышении растворимости по сравнению с аналогами, поскольку полученные соединения в 10 раэ более растворимы.Формула и эоЬретенияСпособ получения соли сульфоаденозил.-метионина общей формулып(С,Н,) (ЬОН),где и - 12;т 312,заключающийся в том, что доЬавляюткультуры дрожжей Бассйагоптусея Сегечгяга 1 Тогц 1 орягс игг 1 гя, Сапйгдацг,г 1 гя к целевому продукту лизируют,клетки раствора воды и этилацетатапри соотношении 1:1, затем 0,35 н.серной кислоты, очищают лиэат ультрафильтрацией через мембраны с пределомпор 10000 дальтон, пропускают лиэатчерез колонку со слаЬокислотной ионообменной смолой в Н-форме при рН 3,57 при скорости пропускания 1-3 объемаЗаказ 7767/59 Тираж 501 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул.Гагарина, 111 жидкосги в 1 ч на один объем смолы,элюат пропускают через колонку с амберлитом со скоростью 0,2-1 объемажидкости в части на объем смолы ипромывают 20 млн раствором дисульфоновой кислоты до исчезновения целевого продукта из элюара, заем концентрируют ультрафилырацией на мемГранах полиамидного типа 100-200 г/л,высушивают распылением при 140-200"С,при этом температура воздуха на выходе составляет 40-100 С,