Способ определения парацетамола

(1 д) И 1) СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 0.1 й 21 6 ОБРЕТЕНИЯЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ОПИСАНИЕ ИЗ Н АВТОРСКОМУ СВИДЕГ(71) Курский государственный медицин ский институт(56) 1. Государственная фармако,пея СССР, изд. Х, М., 1968, с.516517.2. Е 1)сос 1 с С.Т.Н., Годд,А.С. Ье 1 есй 1 че Со 1 ог)ее йг)с Ое се гв 1 па"й 1 оп о 1 Рагасейаво 1 Ьу щеапз о 1ап 1 пбовЬевоМ Веасй 1 оп. - Апа 1 уз 1,1975, 100, р, 16-18 (прототип)(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПАРАЦЕТАМОЛА с использованием обработки химическим реагентом, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения чувствительности и селективности способа, обрабатынают анализируемую пробу 20-25 Ъ-ным раствором гидроксида калия и хлорофор.мом, взятыми р объемном соотношении1:(3-4), с последующим нагреванием, добавлением гидроксида аммонияи измерением интенсивности флуоресценции полученного раствора,5 10 15 20 25 30 40 45 50 55 60 65 Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способамопределения парацетамола (и -ацетиламинофенола), и может быть применено для качественного и ксеичественного определения этого соединения в биохимических, токсикохимических и фармацевтических исследованиях.Известен нитрометрический способколичественного определения парацетамола, основанные на его гидролизе до аминофенола с последующим титрованием нитритом натрия Ц,Недостатками способа являютсянизкая чувствительность (40 мкг/мл)и селективность, так как подобнуюреакцию дают все первичные ариламины. Продолжительность анализа1,5 ч,Наиболее близким к предлагаемо му по технической сущности и .достигаемому результату является колориметрический метод определения пара"цетамола, заключающийся внагревании водного раствора анализируемойпробы в присутствии кислоты, добавлении щелочного фенольного раствора при рН 10,5 и измерении черезнекоторое время оптической плотности при 637 нм (2 .Однако известный метод такжемалоселективен и недостаточно чувствителен (30 мкг/л), что не позволяет его испольэовать для определе.ния парацетамола в биологическомматериале, особенно при токсикологических исследованиях.Целью изобретения является повышение чувствительности, и селектив.ности определения парацетамола.Поставленная цель достигаетсяспособом, заключающимся в том, чтоанализируемую пробу обрабатывают20-25-ным раствором гидроксидакалия и хлороформом, взятыми в объемном соотношении 1:(3-4) с последующим нагреванием, добавлениемгидроксида аммония и изменениеминтенсивности флуоресценции полученного раствора,Метод основан на образованииФлуоресцирующего соединения, спектрвозбуждения флуоресценции котороголежит в пределах 300-380 нм с максимумом 355 нм, а спектр излученияфлуоресценции - в пределах 380560 нм с максимумом 498 нм.Прямолинейная зависимость междуинтенсивностью флуоресценции и,концентрацией парацетамола 0,145 мкг/мл (табл, 1) . Оптимальнаяконцентрация хлороформа, щелочи,времени нагревания, температурыпредставлены в табл. 2-6, Чувствительность предлагаемого способа0,1 мкг/мл, а известного 30 мкг/мп. установлено, что подобной реакции не дают адалин, аймалин, аллопуринол, амидопирин, амиэил, ампициллин, анабазин, анестезии, апрессин, аскорбиновая кислота ацетилсалициловая кислота, атропин, барбитал, бенэомон, бензилпенициллин, бенэоат натрия, бенкаин, бетазин, биссе- курин, бромизовал, бруфен, бутадидн, галаэолин, галоперидол, гипотиазид, глауцин, гомфотин, грамицидин, деэопимон, дикумарин, дипиридонол, дипразин, дитимин, дропери. дол, иэамин, иэоптин, канамицин, карбидин, кватерон, клофеллин, котарнин, левомецитин, леворин, медирил, мепробамат, меркозолил, мета; зид, метилпреднизолоя, метициллин, милурит, мисклерон, налорфин, нафтизин, несФилцин, никотинамид, новокаин, норсульфазол, папаверин гидрохлорид, пармидин, пенициллин, пиридоксин, пиромекаин, преднизалон, протионамид, резорцин, рибофлавин, рифампицин, салазодиметоксин, салаэопиридаэин, салюэид, седуксен, стрептомицин, суксилер, сульфадимезин, сульфацил, танин, тетрациклин, тиамин бромид, тримекаин, трифтазин, фенилин, фентанил, фенолфталеин, френолон, фтиваэид, хинин, хлорокон, хлорицин, циквалон, цистеин, цитиэин, элениум, эритромицин, этазол, этаминал натрия, этионамид и эуфиллин " соединения, относящиеся к различным органическим соединениям, различной структуры и действиями что говорит о достаточно высокой избирательности способа. 1П р и м е р 1. Качественное определение парацетамола.К 1-2 кг препарата мелкоизмельченных таблеток прибавляют 2 мп дистиллированной води, 0,5 мл 20-ного гидроксида калия, 1,5 мл хлороформа и нагреваю на кипящей .водяной бане при 90 О С 20 мин. Затем доводят до 10 мл 25-ным раствором гидроксида аммония. В ультрафиолетовом свете со светофильтром УФС-З, наблюдают зеленую флуоресценцию.П р и м е р, 2, Количественное определение парацетамола в таблет;ках по 0,2 г.Точную навеску (0,1 г)мелкоизмельченных таблеток помещают в мерную колбу на 100 мл. Добавляют 70-80 мл этилового спирта 9 бф-ного, тщательно встряхивают и доводят до метки между этиловым спиртом,10 мл полученного раствора переносят в колбу на 100 мл и доводят до метки 96 -ным этиловым спиртом. К 1 мл данного раствора прибавляют 0,5 мл 20-ного гидроксида калия, 1,5 мп хлороформа и нагревают на водяной бане прн 90 С 20 мин, после чего доводят объемд,5 30 3 до 10 мл 25-ным раствором гидроксида аммония и измеряют интенсивность флуоресценции по отношению к стандартному раствору с содержанием парацетамола 10 мкг/мл.Результаты количественного опреде. ления парацетамола в таблетках по 0,2 г:прЕдставлены в табл. 7.. П р и м е р 3. Количественное определение парацетамола в лекарст-. венном препарате "Скутамил Сф,содержа О щем в одной таблетке 0,1 г параце". тамола.Точную навеску 0,1 г) мелкоизмельченных таблетокпомещают в мерную колбу на 100 мп. Добавляют 70-. 15 80 мп этилового спирта 9 б-,ного, тщательно встряхивают и доводят до метки 9 бф-ным этиловым спиртом. 10 мл полученного раствора переносят в колбу е 100 мл и доводят до метки 20 96 -ным этиловым спиртом, К 1 мп даноного раствора прибавляют 0,5 мл 20-ного гидроксида калия, 1,5 мл хлороформа у нагревают на водяной бане при 90 С 20 мин, после чего до водят объем до 10 мп 25-ным гидроксидом аммония и измеряют интенсивность флуоресценции по отношению к стандартному раствору с содержанием парацетамола 10 мкг/мл. Результаты количественного определения парацетамола в таблетках. "Скутамил Сф представлены в табл. 8,"П р и м е р 4. Количественное . определение парацетамола в биологических жидкостях (моче и крови).К 1 мл сыворотки крови или мочи прибавляют 5 мп этилацетата, встря.хивают 3 мин. Центрифугируют при 3000 об/мин 3 мин и слой .этилацетата переносят -в выпарительную чашку.40 Экстрагирование повторяют еще раз. Остаток выпаривают до объема 0,1 мл. ,0,05-0,1 мп данного раствора перено сят. на пластинку "Силуфол". Концентрация парацетамола,мкг/мп .Пластинку с нанесенной каплей высушивают н помещают в камеру с системой растворителей хлороформ:диоксан:ацетон 80:10:10 и хроматограФируют восходящим методом. Послевысушивания на воздухе в течение5 мин в ультрафиолетовом светес длиной волны 254 нм устанавливают локализацию пятна парацетамола.Пятно с 0 . = 0,27, отмеченное постандарту парацетамола, количественно переносят в пробирку, прибавляют1 мл дистиллированной воды, 0,5 мл20-ного раствора гидроксида калия,1,5 мп хлороформа и нагревают наводяной бане при 90 С 20 мин. Послеэтого раствор охлаждают до комнатной температуры и доводят объем до10 мп 25-ным раствором гидроксидааммония. Измеряют интенсивностьФлуоресценции по отношению к стандартному раствору с содержанием0,5; 1,0; 5,0; 10 мкг/мл парацетамола. П р и м е р 5. Количественное определение парацетамола в воздухе рабочей эоны производственных помещений.Фильтры из перхлорвнниловых воФлокон после продувки исследуемого воздуха при определении парацетамола в воздухе рабочей эоны производственных помещений переносят в химические стаканы. Туда же прибавляют 5 мл этилового спирта. К 1 ,мл, данного. раствора прибавляют 0,5 мл 20-ного раствора гидроксида калил, 1,5 мп хлороформа и нагревают на водяной бане при 90 фС 20 мин. Затем охлаждают до комнатной температуры и доводят объем до 10 мл 25-ным раствором гидроксида аммония. Иэ мерения проводят против стандартиых растворов, содержащих 1,0; 5,0 10,0 25,0 мгк/мп.парацетамола,Относительная интенсивность флуоресценции. 76 45 96 10 1,0 84 Т а б л и ц а 225 Таблица 4 КЬличествохлороформа, мл Относительная интечсивность флуоресценции, Количество гидроксида 30 калия, мл Относительная интенсивность фпуоресценции 58 0,5 0,25 60 60 1,0 35 0,5 72 1,5 60 Оф 75 2,0 80 1,0401,25 60 47 2,5 3,0 60 45 1 ф 5 60 Относительная интенсивность флуоресценции концентрациягидроксидакалия, В.Таблица 5 55 40 10 48 6 2 5 6 Концентрация парацетамола, мкг/мл Зависимость интенсивности флуоресценции от количества хлороформа концентрация парацетамола 10 мкг/мл,20 время нагревания 20 мин) дана в табл. 2. Зависимость интенсивйости флуоресценции от концентрации гидроксида 45 калия концентрация парацетамола 10 мкг/мл. хлороформа 1,5 мп, время нагревания 20 мин) представлена в табл. 3.Таблица 3 50 Относительная интенсивность флуоресценцииЗависимость интенсивности флуоресценции от количества 20-ного .гидроксида калия (концентрация парацетамола 10 мкг/мп, хлороформа 1,5 мп, время нагревания 20 мин) приведена в табл. 4 Зависимость интенсивности фпуоре сценции от времени нагревания на водяной бане при концентрации парацетамола 10 .мкг/мп, хлороформа 1,5 мп и 20-ного гидроксида калия 0,5 мп показана в табл. 5/ 0,1000 0,208 0,209 20 70 66 0,1 25 43 О, 1000 0,208 0,208 0,10000,1000 сивностн Флуореры нагревания на нцентрации пахлороФорма роксида калия евания 20 мин) 0,210 водя рац 1,5 0,5 дан РезУльтаты ления парацет препарате 1 Ск в одной табле показаны в та твенного опре лекарственномсодержащем парацетаьюла,количесамола втамил Ске 0,1л. 8.Т Т а ица аблица 8 Относительная интенсивность флуоресценции айдено паетамола ваблетке,Температура фС Метрологическая характеристика,108 лиц О, 1000 0,1000 гихасти. 0,108 Найдено парцетамола втаблетке, г Метролческаярактерка Навеска 0,10 209 1000 06 0,100 209 0,1000 0,1000 21 0,2 ИИПИ Заказ 10985/24 Тираж 828 Подписное Филиал ППП "Патент", г. ужгород, ул. Проектная, 4 ависимость интен ции от температу ной бане при ко тамола 10 мкг/мл мл, 20-ного гид мл й времени нагрв табл. 6. и Иэ приведенных данных предлагаеМый способ в 30 350 ствительнее известного,избирательность этого сп эволяет использовать его мацевтических, биохимиче исследованиях для разраб Х = 0,209 55 тимальных доэ и ритма их ния, а также устанавлива 6 = 0,0012 ность рабочей зоны произ помещений при разработке 6 = 0,0004: допустивший концентрациивидно что раз чуввысокая соба попри биоФар" ких и других тки оп- назначеь запыленодственных предельноарацетамола.