Способ получения три -птолуолсульфоната -аденозил метионина

(23) Приорите (32) 02.08.72 ГащдвретвеннМ кватнт ссср е делам нзюбретаннй а юткрытнйДата опубликования описания 08,02.79 ИностранецАльберта Фиеччи, (Италия)(72) Автор изобретения Иностранная фирма"Биоресерч Лимитед Партнершип оф Д-р Ливио Камоззи энд К"(71) Заявитель(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРИ-П-ТОЛУОЛСУЛЬФОНАТА 5-АДЕНО ВИЛ-М ЕТИОН ИНА 3Изобретение относится к способу получения новой яерментатнвной соли-три-и-толуолсульфоната 5 -аденозил-Ь -метионина.Цель изобретения - получение нового полезного соединении, расширяющего: ассортимент средств воздействия на живой организм. В МНН- Н 2 ф 2 ф+ОБ б-бй ЬОаюшийся в том, что дрожжей, обогащен держащей кислотн. уксустельно проной кислотоолсульфоки тионин т- или метилацет /20-1/5 от вес обы вызвать лиз раствор адсорби о се моль тралиили солян заклвч пензию зил- ь - ют эти рации ток, чтченный водную сусную 3 -адено), обрабатыва том в концентвлажных клеклеток, подуют в колонке, Цель достигается путем синтеза, основанного на известной реакции получения кислотных солей органических соединений И. йОписывается способ получения три-и. -толуолсульяоната 6 -аденозил Ь -метионина Формулы слабо катионообмениу й формы, колонку посл ьтвают водой, 0,025 й, водным раствором слоты концентрацией в или водным раствором кислоты, раствор ней.3 6469 зуют, упаривают до объема 2/20-4/20 от начального объема и целевой продукт осаждают путем добавления водорастворимого органического растворителя, предпочтительно выбранного из группыэ вклю : чающей метанол, этаиол, пропанол, изопро-. паиол, ацетон, метипэтилкетон, ипи в слу- , чае применения водного раствора серной ипи соляной кислоты полученные сульфаты . ипи хпориды АМ перед осаждением водо 1 О раСтворимым органическим растворителем растворяют в воде и водный раствор обрабатывают и-толуолсульфокиспотой при моларном соотношении кислота; ЬАМ от 3 до 10. 15 Пример 1.К 90 кгдрожжей,обогащенных БАМ (5,5 г/кг), приливают 9 л этилацетата при комнатной температуре. После энергичного перемешивания массы в течение 1 ч ее разбавляют 40 и воды, фильтруют и промывают.Получают 140 л раствора, содержащего3,55 г/л 3 АМ (выход 99,5%).14 л полученного раствора адсорбируют на 1 л амберпита ЗРСв Нф-форме, а затем последовательно эпюируютводой, 0,025 н. уксусной кислотой и1 М раствором п-толуолсульфокислоты.Фракции, богатые чистым ЬАМ, сос- ЗО;тавляют 18,1 и 3 содержат 85% проду 1-та. Раствор обрабатывают 1,7 л амберлита 3 ЯАв ОН-форме. Послефильтрации и промывки смолы водой получают раствор, включающий 2,2% п-толуолсульфокислоты и 0,85% б АМ.Раствор упаривают при комнатной темнературе в вакууме. до объема 600 мли приливают к нему ацетон, Выпадает белая порошкообразная микрокристаллическая гидроскопичная соль (90 г) без запаха, которая не очень хорошо растворя" ется в -метаноле и этаноле и не растворяется в ацетоне, метилаэтилкетоне, хлороформе, высших спиртах и бензоле, 15При анализе соли получают следующиерезультаты,Найденов %а С 46 у 9 у Н 5 уЗ р М 92 рб 13,8.С, НМ 04 64 (Мол, вес 915,1).50Вычислено, %: С 47,20; Н 5,15;М 9,18; Я 14,00,Найдено, %: и-толуолсульфокислота55,8; ВАМ 42,5,Вычислено, %: п-толуолсупьфокиспота56,4; АМ 43,6.Потери в весе в результате сушкив течение 12 ч при комнатной темпера 15 . 4туре в вакууме на Р О составляет 1,52,0%. Влажность (по Фйшеру) 1,52,0%,Новое соединение обнаруживает вУФ-спектре максимум поглощении при25,6 нм, Е 15600 (в 6 и. серной кислоте); при 260 нм,16300 (при рН 7).Все эти данные согласуются с соеди-.нением формулы (1).Количество три-п-толуопсульфонатаАМ, получаемого в данном процессе,соответствует выходу 95% (96 г),П р и м е р 2, Описанным в примере 1 способом обрабатывают 9 кг дрожжей и после лизиса клеток получают 13,8 праствора, включающего 3,60 г/иАМ,что соответствует 99% от количества,содержащегося в обработанном материале, Этот раствор адсорбируют на 1 ламберпита д КСв Н -форме имаоируют водой, О,О 25 н. уксуснойкислотой и 4 н. соляной кислотой. фрак-ции, богатые чистым В АМ, составляют0,8 и и содержат 87% продукта, поступившего в колонку. Затем их упариваютв. досуха в вакууме при,40 С, после чегоприливают воду до получения раствора,содержащего 5% Я АМ поддерживая,температуру раствора около О С, и прибавляют смолу Дауэкс 50 в ОН -форме,пока; образец раствора обнаружит отсутствие хпорндов,Смолу отфипьтровывают, добавляют110 г п-топуопсульфокиспоты и упаривают, доведя объем до 600 мп, Затем приливают метанол до полного осаждения,фильтруют и сушат. Получают 75 г три-п-топуопсульфоната 5 АМ (выход 75%)с теми же свойствами, что у соединения,. полученного в примере 1.П р и м е р 3, 13,8 и раствора3 АМ, полученного после лизиса дрожжевых клеток (по описанному в примере 2способу; 3,60 г/л 5 АМ) р адсорбк)уютна 1,1 л амберпита ЗВСв Н -формеи элюируют последовательно водой,0,025 М уксусной кислотой и, наконец,1 н. серной кислотой, Фракции, богатые;АМ (1,8 п, 86% вещества, поступившего в колонку), обрабатывают суспенбзией гидрата окиси бария при 0 С, дополного устранения супыратов.После фильтрапии и промывки сульфата бария добавляют 108 г и-толуолсульфокислоты и поступают далее, как опйсано в примере 2. Получают 75 г три-п-толуопсульфоната БАМ с теми жесвойствами, что у вещества, полученного в примере 1Выход 79%,6469П р и м е р 4, 13,8 л раствора,содержащего 43,3 г ВАМ адсорбируют в колонке со смолой и элюируют (аналогично описанному в примере 2) водным раствором соляной кислоты. фракции, богаО тые БАМ, упаривают досуха при 40 С в вакууме. Затем приливают воду, получая 10%-ный раствор хлорида, после чего осаждают добавлением ацетона. Анализ образовавшейся соли (38 г, выход 69%)30 флориды 16,86%; 5 АМ 78,88%; вода 4,2%.10 г полученной соли растворяют в 200 мл воды и хлориды удаляют при ОС,при помощи смолы Дауэкс 80 в . 1 ОН -форме, Затем в раствор вносят 19,7 г и голуолсульфокислоты, смесь упаривают в вакууме при 40 С до объе.ма 80 мл, после чего приливают ацетон для осаждения 14 г три-п-толуолсульфо- о ната бЛМ (выход 78%) с теми же свойствами, что у вещества, полученного в примере 1. фаз н 216 Н- СН И- ЕН- ЮН 2- -4 Н Н 2-СК-ОООНИН РН-О1, +Он он6 н;б,изе-,О рализуют, упаривают до объема 2-20 -4/20 от начального объема и целевойпродукт осаждают путем добавления водорастворимого органического растворителя или в случае применения водногораствора серной или соляной кислоты полученные сульфаты или хлориды ЬАМперед осаждением водорастворимым органическим растворителем растворяют вводе и водный раствор обрабатываюти- голуолсульфокислотой при молярномсоотношении кислота: ЮА М от 3до 10,П р и м е р 8, 13,8 л раствора, содержащего 3,60 г/л ЬАМ (полученного, как описано в примере 3), адсорбирую. в колонке амберлитом ЗРСв Н -форме.Фракции, богатые 5 АМ, обрабатывают Зй карбонатом бария, пока молярная конце трация сульфата не станет равной молярной концентрации 5 АМ, Затем раствор о т л и ч а ю щ и й с я тем, что водную суспензию дрожжей, обогащенную 5 -адено зил- Ь -метионином ( б АМ), обрабатыва- ют этил- или метилацетатом в концентрации 1/20-1/8 от веса влажных клеток,50 полученный раствор адсорбируют в колонке содержащей слабо катионообмен ному смолу кислотной формы, колонку последовательно промывают водой, 0,028 н.55 уксусной кислотой, водным раствороми-толуолсульфокислоты концентрациейвплоть до 1 моль или водным раствором серной или соляной кислоты, раствор нейт 18 6 отфильтровывают и фильтрат упаривают до обьема 800 мл. При добавлении ацетона выпадает 60 г соли, выход 88%,Ее анализ: сульфаты 28,2%; ВАМ88,9%; вода 8%,10 г полученной солирастворяют в120 мл воды и обрабатывают амберлитомЭРАв ОН=форме, пока не будут.устранены сульфаты, Смолу отфильтровывают, добавляют 14,7 г и голуолсульфокислоты, смесь упарива 1 от до объема60 мл и приливают ацетон, Выпадает10,8 г и- голуолсульфоната 5 АМ (выход78%) с теми же характеристиками, чтоу вещества, полученного в примере 1,П р и м е р 6. 1 г йодида .9 АМрастворяют в 10 мл воды и обрабатывают смолой Дауэкс в ОН -форме при0 С, пока не будет выведен ион йодида.После отфильтровывания смолы добавляют 1,8 г и-толуолсульфокислоты исмесь упаривают до объема 6 мл, послечего приливают ацетон. Выпадает 1 гтри-и-фголуолсульфоната БАМ (выход78%) с теми же свойствами, что у вещества, полученного в примере 1. формула изобретения 1. Способ получения три-и-толуолсульфоната 5 -аденозил--метионина фор- мулы7 6469152.Способ поп,1, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что водорастворимыйорганический растворитель выбирают из группы, включающей метанол, этаноп; пропанол, изопроцанол, ацетон, метилэтилкетон. 8Источники информации, принятые вовнимание при экспертизе . 1. Патент США 3380995,кл. 260-211, 1988.Составитель Л. НикулинаРедактор 3. Бородкина ТехредЮ. Ниймет Корректор А, ВласенкоЗаказ 174/51 Тираж 512ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., а, 4 И филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4