Способ диагностики стирольной интоксикации

СоОЭ СОВЕТСКИХпсцелдиапмикРЕСПУБЛИК 1 Б 33/48 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯУ 13цинский институ Д.Ю. Мирович рия, 1974, У 11 ТИКИ СТИРОЛЬНОЙ ОСУДАРСТНЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(57) Для диагностики стирольной интоксикации на доклинических стадиях сыворотку крови вносят в культуру амниотических клеток, выдерживают 1,5-2 ч при 18-20 С, затем сыворотку удаляют, вносят питательную среду 199 и термостатируют при 37-37,5 С в течение 4-5 дней. По наличию патологического изменения клеток монослоя диагностируют стирольную интоксикацию. 2 табл.Изобретение относится к медицине,в частности к профессиональной патологии, конкретно к токсикологии химическими веществами.Целью изобретения является диагностика на доклинических стадиях засчет нанесения сыворотки крови накультуру клеток и культивирования втечение 4-5 дней.Способ осуществляется следующимобразом.Материалом для изучения токсического действия стирала служит сыворотка крови исследуемых лиц. Кровь забирают из локтевой вены в асептическихусловиях, помещают в стерильные пробирки беэ консерванта, Если обследуются работницы цеха по синтезу стирала, забор следует производить через7 ч после начала работы, Пробирки скровью центрифугируют со скоростью3000-3600 об/мин в течение 10-15 мин,Сыворотку отсасывают стерильнымипипетками и вносят в пробирку с культурой клеток. Каждую пробу исследуютна четырех пробирках. Используют однодневную культуру амниотическихклеток, В каждую пробирку с культуройклеток вносят 0,2-03 мл сывороткикрови, оставляют в контакте в течение 1,5-2 ч при 18-20 С,затем сыворотку удаляют и клетки доливают питательной средой 199 в количестве 11,5 мл, пробирки помещают в наклонномположении в термастат при 37-37,5"С. 35Ежедневно в течение 4-5 дней проводят учет цитотоксического действиясыворотки по степени деградации клеточного монослоя, С этой целью клет-.ки, выращенные на стенках пробирок фпросматривают под микроскопом с малым увеличением, сравнивая с контрольными. В качестве контроля берутсыворотку здоровых людей, не имеюшихконтакта с химическими веществами 45(доноры),Специфическую дегенерацию отмечаютпо четырех балльной системе; 1 баллдегенерация 1/4 клеток слоя полязрения; 2,балла - 1/2 клеток слоя; 503 балла - 3/4 клеток слоя; 4 оалладегенерация всех клеток, Дегенерация выражается в сморщивании клетокуменьшении ядра измененных контуровклеток, гибели их, замедлении роста. 55П р и м е р, Больная С., аппаратчица цеха по синтезу стирала, стажработы 2 года, страдает бесплодием,обследование на профосмотре спустя 7 ч от начала работы, Проводилось взятие крови из локтевой вены в асептических условиях в количестве 3 мл в стерильную пробирку без консерванта, Пробирка с кровью центрифугировалась са скоростью 3000 об/мин в течение 10 мин. Сыворотка отсасывалась стерильной пипеткой и в количестве 0,2 мл вносилась в культуру амниотических клеток (эта минимальное количество сыворотки, которое при наличии токсических веществ может вызвать изменение в клетках). Затем сыворотку удаляли и клетки заливали питательной средой 199 в количестве 1 мл. Пробирки помещали з наклонном положении в термастат при 37 С и культивировали в течение 4 дь.ей, В течение этого времени наблюдалась повреждение клеток или полная их гибель, Ежедневно проводился учет цитотоксического действия сыворотки крови, для чего клетки, выращенные на стенках пробирок., рассматривали под микроскопом и степень деградации клеточного манослоя оценивали в баллах,В качестве контроля использована кровь иэ локтевой вены донора В 23 года,не имеющего контакта са стиролом. Обследование проводилось па описанной методике, изменений в культуре клеток не отмечалось.Предлагаемый способ относительно прост, доступен характеризуется значительной быстрой в проведении исследования. При его использовании не требуется дорогостоящего и громоздкого оборудовайия. Кроме того, на этой модели можно выявить глубину и направленность патологического процесса - изменений ь ядре, в хромосомном аппарате. клетки. Способ позволяет выявить степень нарушения дезинтаксикационнай функции печени, так как стирал метабализируется в печени до нетаксичных соединений.ЯПредлагаемый способ имеет преимущественно па сравнению с известными методами токсикслогических исследований на животных, Он дает возможность быстрого получения ориентировочных результатов ио таксическсму воздействию некоторых химических вешеств на живую клетку. Кроме того, он позволяет дать предварительную оценку степени токсичности некоторых веществ в частности органических соединений97 ном и количестВенном отношении с 3-4-дневного возраста.Действующая доза токсического вещества сыворотки крови работниц стирольного производства обычно вызывает дегенерацию клеток через 24-36 ч, в последующем происходит нарастание дегенеративного процесса прямо пропорционально концентрации токсического вещества, 4 и 5-й дни наблюдения позволяют выявить пороговую и недействующую концентрации. Таким образом, укаэанные параметры являются наиболее информативными. Формула изобретения Способ диагностики стирольной интоксикации путем исследования крови, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью диагностики на доклинических стадиях, исследованию подвергают сыворотку крови, наносят ее на культуру клеток, культивируют в течение 4-5 дней и по наличию патологического изменения клеток монослоя диагностируют стирольную интоксикацию. Таблицаж Среднее количество баллов иа одного человекаМ+07 Став работы,годы ВремяконЧислалиц Иэмеиения в культуре ткани, баллы 1 2д 2 д Х0 1,3 1 О 22 8,91,47+0,тель Приме и и е. В реэулътате дисперснанного аки полученных реэулътатов, ус боты на иэменение.в кулътуре т,е. М с 0,01. алнэа, который был применен для обработановлено существенное влияние стана ра" кани, уровень эначимостн Ы равен 0000,8 3 1 ЗО 21 ненасыщенных углеводородов. Вещества этой группы плохо растворяются в воде, при стерилизации (кипячение рентгеновское излучение и др.) полимеризуются, и поэтому наиболее целесообразно проводить исследования сыворотки крови, в которой стирал растворяется в 84 раза лучше, чем в воде, а кровь обладает бактерицидными свойствами, и ее не надо подвер- О гать стерилизации. Способ может найти применение для решения целого ряда вопросов по изучению механизма действия химических веществ на живую клетку. В связи с этим перспективным 15 является его внедрение в практику изучения токсичности химических соединений плохо растворимых в воде и изменяющих свою структуру по стерилизации. ОКлинические испытания способа проведены на 45 больных,Результаты исследования приведены в табл.и 2.Что касается режима культивирова ния, то согласно биологической закономерности созревания культуры клеточного монослоя она является наиболее пригодной для опыта в качествен 19,2 4 15,4 2,2+0,141302197 Изменение в культуре ткани, баллы Возраст,годы До 20 7 5 О 0 12,5 4 10 Волее нокаэа 5 11 244 15 ЭЗ 10 222 5 111 4 В 9 14 У+ е. В результате днсаерсионногботкнц на изменения в куль т, е. ыс О 0 . Возраст работ работы (г 0,86). налива установлено влияние возраста ра ткани, уровень значимости А 00036 находится в лрямой зависимости от станамеч Составитель Л. ШилинаРедактор О. Юрковецкая Техред И,Попович Корректо Патай ПодписноеССР Заказ 121 Тираж 777ударственного комитетам изобретений и открытиисква, Ж;35, Раущская на 4/5 изводственно-полиграфическое предприятие, г. Ужго л, Проектная, 4 4 ВНИИПИ Го по дел 113035, МСреднееколнчвство балловиа одногочеловека 1