Способ определения активности интерферона в сыворотке и плазме крови

2 А д) А 61 К 1 у 0 ОБРЕТЕЛЬСТВУ ОПИС ИЕ Я Мартыно довательс- ереливания кий А. С. М., МедиК) Ю СОЮЗ СОВЕТСКИХ ОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ СПУБЛИК ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ АВТОРСКОМУ СВИ( 53) 611-018.54 (088.8)56) 1. Ершов Ф. И. Новоха нтерферон и его индукторы. ина, 1980. 801082 ПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ, АКИ ИНТЕРФЕРОНА В СЫВОПЛАЗМЕ КРОВИ путем добаведуемого образца в тест-культующийся тем, что, с целью его и ускорения, способа в качестве ры используют штамм ЯарЬуЬцз56, обладающий чувствик интерферону человека, с послепределеннем активности интер- нарастанию оптической плотносальной смеси(54) (57) С ТИВНОСТ РОТКЕ И ления иссл ру, отличи упрощения тест-культу 1 ососсцв а 1 тел ьностью дующим о фероиа по ти бактери25 30 35 40 4550 Составитель Л. Бондарцев Редактор А. Мотыль Техред И. Верес Корректор О. Тигор Заказ 1604/4 Тираж 688 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий 113035, Москва, л - 35, Раушская наб д. 4/5 филиал ППП сПатент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4Изобретение относится к медицине и может быть использовано при определении иммунологической резистентности организма, а также при разработке способов получения препаратов интерферона.Известен способ определения активности интерферона в сыворотке и плазме крови путем добавления исследуемого образца в тест-культуру 1,Однако известный способ продолжительлен вовремени и сложен в осуществлении.Цель изобретения - упрощение и ускорение способа,Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения активности интерферона в сыворотке и плазме крови путем добавления исследуемого образца в тест- культуру,в качестве тест-культуры используют штамм Яарйу 1 ососсиз авцз56, обладающий чувствительностью к интерферону человека, с последующим определением активности интерферона по нарастанию оптической плотности бактериальной смеси.Способ осуществляют следующим образом,Для определения активности интерферона предложен простой способ с использованием культуры стафилококка, высокочувствительной к интерферону. Для разработки способа определения активности интерферона изучено 57 штаммов стафилококка, выделенных от больных, Высокую чувствительность к интерферону проявлял лишь один штамм, в дальнейшем используемый в предлагаемом методе. Тест-культура представляет собой белый стафилококк, обладающий гемолитической и слабовыраженной плазмокоагулирующей активностью (16 ч), слабой чувствительностью к антибиотикам широкого спектра действия, не лизи руется лизоцимом сыворотки крови слюны, яичного белка. Интерферон сыворотки оказывает прямое воздействие на тест-культуру стафилококка вышеуказанного штамма, вызывая гибель его.Для постановки реакции в стерильные пробирки наливают испытуемую сыворотку в объеме 0,09-0,11 мл (предпочтительнее (0,1 мл) и 0,1-0,21 мл физиологического раствора (предпочтительнее 0,2 мл). После чего в пробирку вносят по 0,19-0,21 мл, предпочтительнее 0,2 мл (500 млн. микробных клеток в 1 мл) микробной взвеси 18- 20 часовой культуры стафилококка штамм56 на 0,85% физиологического раствора (натрий хлор). При разведении культуры до нужной плотности используют сначала стандарт мутности (ГКИ им, Тарасевича Л, А.), а затем устанавливают оптическую плотность взвеси с помощью фотоэлектроколориметра ФЭКМ, Оптическая плотность используемой взвеси должна быть в диапазоне показаний 0,05-0,08 (предпочтительнее 0,07) при зеленом светофильтре 6, кювета3. В контрольную пробирку вносят 0,29-0,31 (предпочтительнее 0,3 мл) мясопептонного бульона (МПБ) и 0,19-0,21 мл (предпочтительнее 0,2 мл) микробной взвеси, Испытуемые и контрольную пробирки инкубируют при 36,9-37,1 С (предпочтительнее 37 С) в течение 14-16 мин (предпочтительнее 15 мин), после чего в них добавляют по 4,4-4,6 мл (предпочтительнее 4,5 мл) и проводят определение оптической плотности на ФЭКМ с зеленым светофильтром6, кювета3. Контролем в параллельном пучке света служит МПБ, налитый в кювету. Оставленную смесь замеряют через 17-19 ч (предпочтительнее 18 ч) инкубации при 36,9-37,1 С (предпочтительнее 37 С). Активность интерферона сыворотки выражают в процентах, вычисляя по формуле: опт, плоти. исп.об после инкУба-Допт. плоти. контр.п,о икиубации Лример. Сыворотка больного Г. При первичном измерении на ФЭКеМ показала оптическую плотность равную 0,03, а через 18 ч инкубации 0,14. В контрольной пробе (0,3 мл МПБ+ 500000 ед. микробной взвеси). Результаты измерений составляют 0,025, 0,19, Подставив полученные данные в формулу получим и - В по - 9 Ы,ЦЭ- - , ь пп 0,18 - 0,0 г 5 и = 100 -г 1 - х 100= 100 - 0,7 100 =Таким образом, активность интерферона равна 30%, т.е. микробная взвесь интерферончувствительного стафилококка сывороткой больного лизируется не полностью (30%) .Таким образом, предлагаемый способ позволяет произвести определение активности интерферона в течение 18 ч вместо 2 в .сут в обычных лабораторных условиях. В течение одного рабочего дня возможно определение активности интерферона в 20 - 25 образцах. Опыт возможно осуществлять каждый день недели.