Способ получения спирамицина

фо 122846 Класс ЗОЬ, б еЬс .:;1".нЛ ИОАНИЕ ИЗОБРЕТЕН АТЕНТУ Заявительзаводов Рона-Пуленк (Франция)татели 1 иностранцы Нинэ и Варье щество химически йствптельные изоб СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СПИРАМИЦИНА 20 июня 1958 г. за602440 31 в Комитет ио телагм изобрстений и открытий при Совете Министров СССР Опубликовано в 51 оллетене изобретений ЛЪ 19 за 196 г.Наявлс Известно, что антибиотик спир 1, 11, 111, имеющих очень близкие св ции Я 1 гер 1 огпусез агпЬо 1 ас 1 епз. Предлагается способ, позволя анты спирамицина (11 и 111) путеь сичного варианта (спирамицина 1) бавляют ацетилируюшие или пропамицин ойства,остоит из получ аетс рех компонентов путем фермента 1 е варичее токреду доющии пол 1 подавлеЭто дост ионачирю токсичнь ания бо алы рим ер 1,олби вносят 260 .пл следующей В эрленмеиеровскую двухлитровуюсреды:Кукурузный настой (50%ГлюкозаХлористый натрийСернокислый магнийВодопроводная вода сухого экстр Устанавливае:Угл т рН 6,8 добавкой едкого натра и затем добавля 1 о 5 ислыи калье масло оев Н 1 120, После охлажагпЬо 1 ас 1 епз (%К.а трясучке в течениколбы на 300 мл в лизуют 45 мин. приамма Ягер 1 опчусез ру перемешивают нв эрленмейеровские ния ее засс 420 в галак час. дят Эту среду стервают культурой штике). Затем культ Одновременно следующей средь: чать менее ния образо игается теь щие радин кта) 40 г 20 5 1 000 м,г122846 Кук рузный настой (50"ц-ного сухогоГлокозаХлориснгтринПервичпьй фосфорпокислый калийСернокислый магнийВодопроводная вода 35 г 50 20 2экстракта) рН устанавлен аот па 6,8 добвкой едкого атра, после чего дооавляют;Углекислый кальций 5 г Затем вводят пропионамид в количествах, указанных в нижеприведенной таблице, дающей результаты проведенных опытов,Зрленмсйеровские колбы стерилизуют 20 м,ш, при 120, охла)кдаот и засевают 4 лл культуры из двухлитровых колб, после чего встряхиваот на трясучке при 25, Лнализы проводят па 6-й, 7-й и 8-й дни с цельо определения максиман-.пой активности и относительных выходов трех спирамицинов. Относительная доля сперамициновКукурузный настой (50"/О-ного сухого экстракта) 40 гКрахмал 20Хгористый натрий 5Сернокислый магний 1Первичный фосфорнокислый калий 2Водопроводная вода до обьсма 1000 г,грН устанавливают на 6,8 добавкой едкого патра, после чего вводится:Углекислый натрий 5 гЗту среду стерплизуют в течение 45 мин. при 120, После охлаждениязасевают ее культурой штамма 5. апЬоас 1 епз и встряхивают на трясучкев течение 48 час. при 25".Одновременно в эрленмсйеровские колбы на 300 ял вводят 40 ялследуощей среды:1 укурузный настой (50%-ого сухого экстракта) 45 гГлюкоза 5 )Углекислый кальций 25Водопроводная вода до общего объема 1000 глУстанавливают рН 7,0 добавкой едкого патра. Пр имер 2. В двухлитровую эрлснмсйсровскую колбу вводят 250,г,г следующейсреды:,д,) 1228 6 После этого среду стерилизуют в течение 30 мин. прн 120. После охлакдения какдую эрленмееровскуо колбу засева 1 от 4 51,) ранее оп:1- санной запраВочноЙ культуры. Затем сх 1 есь ВстряхиВа 1 от на трясучке при 25. Через 48 час, развитие грибка оказывается весьма удовлетворительным. После этого добавляют в каждую колбу 20 1 л стерильного ночногоо раствора, содержащего 12 г/л чистого спирамицина 1 в виде осн.- вания и 6 а/л пропионата натрия. Культуру встряхивают в течение 24 час., затем смешивают содержимое всех эрленмейеровских колб.Хроматографи 1 еск 51 Й анализ оульоппоп культу)ры по 1 азывает, То она содержит 23 г/,г непреврашенного спирамицина 1 и 1 4 г)л смеси, состоящей пз 20, спирамицина 11 и 80" спирампцина 111. При м ер 3. В э 1 ъе 11 мепсровск) Ко,1 оы 1 305 л. Зг)од 51 Т по "1 л. с.отю 11 ге 11среды:гористы аммонийГлюкозаУглекислый кальцийВодопроводная вода до общего объемаПример 4. Готовят культуру 5. агпЬоас 1 епз в условиях, описанных в примере 3. Раствор спирамицина основания 1 содержит еще 6 г/л проппоната натрия. В этом случае хроматографнческнй анализ обнаруживает пр- вращение 2,04 г/,г спирамицина 1 в смесь из 11",о сппрампцпна 11 и 891 спирамицина 111; 0)96 г/, исходного спирампцина остается без изменения. Пр имер 5. б 0 з.1 с,едмюце В эрленмейеровск 5 е колбы на 300 5 ял вводится посреды:Азотнокислый аммонийГлюкозаУглекислый кальцийВодопроводная вода до общего объема 13 г 50 25 1000 . Колбы стерилизуют 30 Х 1 ип. при 120, охлаждают и засевают по 5 1 культуры, получение которой описано в примере 2. После трехдневной ипку оации при 2 Ь при ВстряхиВанип на трясучке в каждмю колб прп,ивают 5 л 1 л водного раствора с содержанием 100 г/л чистого сгпрампцина 1 в виде основания, 38 г/л пропионовой кислоты и 10 гл шестиводного хлористого кобальта. рН этого раствора предварительно доводят до 6,5 С 1 ерилизуют, засевают и выращивают культуру грибка в условия;,описанных в примере 5. По истечении 48 час. дооавляют по 20,1.г водногостерильного раствора с содержанием 9 г/л чистого сппрампцпна 1 в вплеоснования и 21 г/л пропионамида.После трехднеВной инкуоации пугел хро:5 атографипеского ан 11,1 изаобнарлкиваот превращение 1,86 г/.г спиразИцина 1 в смесь из 55",5 сппрамиципа П и 45", спирамицина П 1. 1,14 г/л сппрампцина 1 остается безизменения,М 122846 путсм добавки едкой щелои.1 Ос;с тзсхднсвиой ннеуоаци аа,:Зируют методом хроматографии на бумаге. Превращено 8,70 г/,г снирамнцина 1; выход 9% спирамицина 11 и 91% спирамицина 111. Пример 6. В эрленмейеровскую колбу на 300 л.г наливаютсреды;Х,гОристый аммонийГлюкозаУглекислый кальцийВодопроводная вода до общего обьема 50 м,г следующей 10 г 50 25 1000,ил Пр ед мет изобретен и я Способ получения спирамицина, осуществляемый путем ферменгации Ягер 1 огпусез атЬО 1 асепз, отличающийся тем, что, в целях получения менее токсичных вариантов спирамицина (11 и 111), в среду добавляют ацетилирующие или пропионалирующие радикалы. Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРРедактор А. К .Лейкина Гр, 1 З 9 Поди. к печ. 20.гг. Тираж 700 Цгиа 50 коп.Ииформацио го издательский отдел.Объем 0,34 п. л. Зак, 1975 Типография Комитета по делам изобретений и открыто ири Совете Министров СССР Моск.,а, Петровка, 14.Колбу стерилизуют, засевают н инкубируют в описанных выше условиях.По истечении 72 час. культуру центрифугируют и жидкость декантируют. Осадок взвешивают вновь в 50 гил чистого буферного раствора, находящегося в эрленмейеровской колбе на 300 .ггл, Буфер содержит 9,85 г/л ледяной уксусной кислоты и 4,9 г/л уксуснокислого натрия и име. ет рН 4. Кроме того, в буфере содержится еще 6,45 г/л хлоргидрата спнрамицина 1 и 1 г/л шестиводного хлористого кобальта. Суспензию этого мицелия инкубируют 80 час. при 25 при встряхивании на трясучке и хроматографируют на бумаге. В результате 2,40 г/л спирамицина 1 превращаются в смесь остальных спирамицинов (11 и 1 П) в относительных размерах 90: 10,