Способ определения влажности в сухих и лиофилизированных биологических продуктах

(19) ( 1) 1(с ( 01 Я 33/48 САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ЛЬСТВУ тен арик ина инстиСССР и Всельскии биоло ьство ССС 1962. тво СССР 1972..1 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИ АВТОРСКОМУ СВИД,тута химической физикисоюзный научно-исследови технологический инстигической промышленности(56) 1. АвторскоВ 161521, кл. С2, АвторскоеУ 340966, кл. С3. В,А. Климометоды анализа онийе Иеу Химия(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЛАЖНОСТИ В СУХИХ И ЛИОФИЛИЗИРОВАННЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРОДУКТАХ путем введения активной добавки в пробу с последующей регистрацией физико-химического параметра, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, -с целью повышения точности и сохранения нативности препарата, в качестве добавки используют спиновую метку и регистрируют спектр электронного парамагнитного резонанса, и по изменению формы спектра по сравнению сконтролем определяют остаточнуювлажность в пробе.1 О 20 ф фрОднако данный способ имеет невысокую точность определения остаточной влажности и, кроме того, связан с облучением образца светом, что может привести к повреждению интакт- ф кости некоторых светочувствительных биологических препаратов. известен способ определения остаточной влажности в сухих и лиофили зированных биологических продуктах 3 Сущность известного способа сос,тоит в том, что остаточная влажность образца определяется с помощью специального реактива титрованием, 50Однако известный способ не достаточно точен, требует длительного времени, трудоемок и не применим в массовом промышленном производстве. Кроме того, после анализа образец становится не пригодным для дальнейшего использования. Изобретение относится к исследованию и анализу биологических веществ,а именно определению остаточнойвлажности в сухих и лиофилизированных биологических продуктах, и может быть использовано в медицинеи сельском хозяйстве.Известен способ определения остаточной влажности в сухих и лиофилизированных биологических продуктах 1 .Сущность этого способа заключается в том, что предлагается электронное устройство для определения интенсивности испарения влаги при сушке 15биологических материалов,Недостатком этого способа является то что он не позволяет измерять остаточную влажность сухихи лиофилизированных биологическихпродуктов при длительном их храненИи и непосредственно перед использованием.Известен способ определения остаточной влажности в сухих и лиофилиэированных биологических продуктах 121,Сущность известного способа заключается в том, что для определения остаточной влажности биологических продуктов к ним добавляютлюминесцентные красители и послеоблучения пробы светом измеряютинтенсивность фосфоресценции красителя в ос о оскопе. Цель изобретения - повышение точности, сохранение нативности препарата,Указанная цель достигается тем,что согласно способу определениявлажности в сухих и лиофилизированных биологических продуктах путемвведения активной добавки в пробус последующей регистрацией физикохимического параметра, в качестведобавки используют спиновую меткуи регистрируют спектр электронногопарамагнитного резонанса, и по изменению формы спектра по сравнению сконтролем определяют остаточнуювлажность в пробе.Способ осуществляется следующимобразом,В пробу вводят иминоксильный радикал и регистрируют спектр электронного парамагнитного резонанса (ЭПР).На фиг. 1 приведен спектр спиновых меток на высушенных образцахвакцины против ньюкаслской болезникур при 30 оС, обобщенный вид, атакже приведены параметры спектраЭПР, используемые при построениикалибровочного графика зависимостипараметра Ь 1/А 1 от относительнойвлажности образца, который приведенна фиг. 2.Для определения остаточной влажности испытываемого образца необходимо снять спектр этого образцана ЭПР-спектрометре, измерить поэтому спектру отношение параметровЬ/Аи на калибровочном графике(фиг. 2) измерить значение относительной влажности данного образца,Контрольные измерения, проведенные для экспериментальной проверки результатов, полученных при измерении остаточной влажности согласно предлагаемому способу, показали следующее. Точность измерения повышается вследствие того, что измерения по известному способу требуют приготовления многокомпонентного реактива фишера, составные части которого тщательно очищаются, взвешиваются и не должны контактировать с водой, в то время как предлагаемый способ заключается в одном измерении параметра спектра ЭПР спиновой метки на спектрометре. Процесс измерения остаточной влажности по извест" ному способу приводится в специальных боксах титрованиемопределеннойнавески препарата, что вносит дополнительные ошибки при взвешивании ититровании и снижает точность получаемых результатов. Для приготовления реактива Фишера, используемого в известном способе, требуются1 сут. Реактив фишера неустойчивпри хранении (7 сут) и требует постоянного обновления. Непосредственно для проведения определения остаточной влажности препарата титрованием навески готовым реактивомФишера необходимо около 30 мин,Для регистрации спектра ЭПР одного образца согласно предлагаемомуспособу требуется 1 мин, Измеренияпараметра й 1/А, можно проводить сочень большой точностью с помощьюприбора (сп .ктрометра), что, однаконе увеличивает время регистрации.Введение спиновых меток в испытываемые образцы согласно предлагаемому способу не повреждает нативностьпрепаратов, которые в дальнейшеммогут использоваться по назначению,поскольку спиновые метки обладаютнизкой токсичностью,П р и м е р. Готовят экспериментальные серии эмбриональной вакцины против ньюкаслской болезни кур в чистом виде. К каждому образцу серии добавляют раствор спиновой метки (можно использовать спиновые метки любой химической природы) из расчета, чтобы конечная концентрация спиновой метки в растворе составляла 1 О моль/л . В данном примере была использована .спиновая метка следующей структуры: ФО5Смесь вакцины и спиновой меткивыдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч и затем подвергают;лиофильному высушиванию обычным способом на промышленной установке.По ходу высушивания извлекают изустановки контрольные образцы и определяют в них остаточную влажностьпо методу 13 с помощью специального реактива реактив фишера). Параллельно в этих же образцах измеряют параметр Ь,/Аспектра ЗПР спиновойметки (Фиг. 1). По результатам этихизмерений строят калибровочный граФикзависимости параметра Ь/А спектра 20ЭПР спиновой метки от остаточнойвлажности для данного препарата вакцины (фиг. 2). Этот калибровочныйграфик для данной спиновой меткии данного вида лиофилизированного 25препарата может служить в дальнейшемдля определения остаточной влажности в лк 1 бом количестве образцов, содержание водыв которых неизвестно.Предлагаемый способ позволяетосуществлять контроль остаточнойвлажности препаратов во времяпроведения процесса высушивания,поскольку время проведения анализаочень мало. Предлагаемый способ позволяет определить остаточную влаж ность в сухих и лио 4 илизированныхбиологических продуктах самой различной природы с очень высокой точ.ностью, с небольшими затратами времени и реактивов, не повреждая ин тактности испытываемого продукта.1150538Составитель С. Котелевцев Редактор С. Лисина Техред Л,Микеш Корректор Е. Сирохман Заказ 2134/33 Тираж 897 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4