Амино-3-(5-дезокси-5-аденозил)тиопропилфосфонистая кислота для ингибирования процесса биометилирования

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ЯО 1120671 51)4 С 07 Р 9/48 С 07 Н 1 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТ УН 11 , Р-СН-СН -НО 0 ОН для ингибирорования. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ВТОРСКОМУ СВИДЕТ(71) Институт молекулярной биологииАН СССР(56) Сожагс 1 1.К., Сгоо 1 сз Р.А. Тгапз-щеЬу 1 аоп, Нзс 1 п, Вогсйагог, 1979,с. 215-223,Робер-Жеро М.Ледерерэ. Итоги иперспективы развития биоорганическойхимии и молекулярнойбиологии.(54) АМИНО-(5 -ДЕЗОКСИ-АДЕНОЗИЛ)ТИОПРОПИЛФОСФОНИСТАЯ КИСЛОТА ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ ПРОЦЕССА БИОМЕТИЛИРОВАНИЯезокси-аденозил) .ая кислота формулы ния процесса биомет., Р - СН - СН 2 - СН 2 - Б -2 О ОН которая может быть исполь ована длингибирования процесса биометилирования. Известно использование в ингибитора метилаз 5 -адено цистеина бАН), который воз как естественный продукт Фе тивной реакции. качестве зилгомоникает 25 ента Однако высокая а ов клетки, быстро АН, препятствует и еднего 1 п о.Известно также и естве ингибитора м -Б-изобутилтиоаде инилгомоцистеина. ь Ферменмирующиханию пос ктивнотрансфспользо спсльзование тилаз 5-дезокси озина и туберци 3ры обладаютдействуют неУказанные ингиби бым эффектом, ли таточно избирате но нежелательно. л что о со е зобрет ти инг Цельфективнофераз.Постаописывае ниябитор овьпрение метилтр ль достигаетсяением формулы ленная соеэффе орое ивности деистви 45еевышает известные ингибитор и тилирования.Соединение Формул взамиодействием окс тиопропилового альде новатистой кислотой последующим алкилиро ченного продукта 5 - аденозином в присутс ческого натрия в жидПример 1, 1 окси-аденозил)тио тая кислота (1). ы 1 получают има л -ацетилгида с фосфории с ки у ием сивии металли ке.,(5( - де ом аммиа Амино- ропилфос они Изобретение относится к химии фосфорорганических соединений, а именно к новоч амино-(5 -дезокси 5 -аденозил)-тиопропилфосфонистой кислоте формулы 1 5той, концентрируют в вакууме и выделяют хроматографией на Дауксе50 Ы 8 (100-200 меш, Н-фо 1(ма,180 мл) с промывкой водой и элюциесоединения 1 0,63 г (52 Е), т,пл.169 С, В=0,59 (ТСХ, система А),В=:0,14 (ТСХ, система Б) 05 дкОу 83(аг 1 ап США),3260 нм (Яресогс 1П(-718, ГДР), А,А=0,80,и рКЗ 7,57 (автом.титратор "Вад 1.ошегег" Дания). Соединение Формулы1 - белое, хорошо растворимое в воде и спирте вещество, устойчивоепри хранении.П р и м е р 2; Испытание 1-амино-(5 -дезокси-аденозил)тио(пропилфосфонистой кислоты (БАН-Р )в реакции метилирования тРНК.Частично очищенную тРНКтрансферазу получают из печсы. Определение активностита проводят, используя 14 сметилени крыферменСн-БАИ К 10 мл кипящего метанольного раствора 3,96 г (60 ммоль) НзРО медленно прибавляют 4,4 г (30 ммаль) оксима 73-ацетилтиопропионового альдегида в 15 мл метанола. Смесь кипятят 2 ч, упаривают в вакууме и растворяют в воде, р.-меркапто-Ю- аминопропилфосфонистую кислоту выделяк(т хроматографией на Дауэксе 50 И"8 (100 в 2 меш, Н+-форма, 120 мл) . Выход 1,67 г (367), т.пл. 198 С, Вг =0,41 (ТСХ, Силуфол БЪ 25(, система А), К 0,31 (система Б),0.47 г (3 ммоль) у-меркапто-(х-аминопропилфосфонистой кислоты растворяют в 30 мл жидкого аммиака и прибавляют небольшими порциями при перемешивании сначала натрий до сохранения голубой окраски в течение 20 мин,( а затем 0,85 г (3 ммоль) 5 -хлордезоксиаденозина. Спустя 7 ч аммиак упаригают, остаток подсушивают в вакууме, растворяют в 15 мл воды, подкисляют до рН 6-7 соляной кисло(52.уя С 1/вМ, "АщегсЬагп") в качествемеченого субстрата и суммарную тРНКиз Е.Со 1 как акцептор метильныхгрупп. Для определения активностиФермента в 0,1 мл смеси, содержащей 5(в мкмоль) 2 трис. НСР, рН 8,2,0,4 дитиотреитола, 1,5 гексаметилендиамина, 40 мкг тРНК и 10" 14-рз,БАМ, вносят фермент (6 мг белка) и инкубируют пробу в течение 30 мин при 37 С,10затем реакцию останавливают добавлением 2 мл охлажденного 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты и выдерживают пробу в течение 15 мин в ледяной бане. Образующуюся суспензиюфильтруют через миллипоровые фильтры(СЫНПОР-З, Хемапол"), которые затемвысушивают и определяют их радиоактивность в толуольном сцинтилляторена радиометре 1 пегесйп 1 е Б 1,-30. 20Испытания известных соединенийпроводят аналогично,В таблице представлено действиенаиболее эффективных ингибиторовФерментативного метилирования - данные по испытаниям.Таблица 1 ФРезультаты исследований авторовзаявки. 50 К =константа ингибирования, т.е.константа диссоциации комплекса Фермент-ингибитор (величина, обратная сродству Фермента к ингибитору) 55 Зависимость скорости метилирования тРНК от концентрации ингибитора представлена в табл. 2,0 2,85 0,25 2,75 0,75 1,73 1,50 1,53 1 75 1 33 2,00 1,20 0 5,400,25 5,00332067 Составитель В.МякушевРедактор Л.Письман Техред С.Мигунова Корректор М.Демчик Заказ 6645/4 Тираж 353 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Подписное филиал ППП Патент , г, Ужгород, ул. Проектная 4 Из представленного видно, что функциональные свойства данного соединения сводятся к эффективному конкурентному ингибированию тРНК-метилазы и являются более выраженнымипо сравнению с аналогичными свойствами известных ингибиторов фермента.