Способ очистки кислотных гидролизатов белоксодержащих веществ

ОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТ ИЧЕСНИХ ОПУБЛИ К ие. а 3(59 0 01 Б 33 48 р 13Волощуков,чаровну государсвательскийт идетельство о 01 и 33/4 с ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(22) 07.04.82 (46) 07.04.84. Бюл. 9 (72) Н.В.Иванов, В.Г,. В.Н.Милютин и А.В.Гон (71 ) Ростовский-на-До венный научно-исследо противочумный институ (53) 576.8(088.8) (56 .1. Авторское св СССР 9 1013850, кл.3 1982.(54) (57) СПОСБЕЛОКСОДЕРЖАЩИТОВ по авт.свч а ю щ и й сповышения степродукта к гиддобавляют алиобщей формулып=2-12, до поРН реакционно Б ОЧИСТКИ КИСЛОТНЫХ Х ВЕЩЕСТВ ГИДРОЛИЗА 1013850., о т л ия тем, что, с целью ени очистки целевого ролизату прн рН 8-11 атическнй диамин Бн-(сН)в-ив, где тоянного значения смеси.60 65 Изобретение относится к микробиологии, в частности к приготовлениюпитательных сред. Может быть использовано для получения безуглеводныхазотистых основ широкого назначения.По основному авт.св. 9 1013850известен способ получения кислотныхбелковых гидролизатов, заключающийся в том, что гидролизат обрабатывают активированным древесным углемс последующим нагреванием и фильтрованием 11 .Однако этот метод не пригодендля удаления свободных углеводородовс неизменной карбонильной. группой.Цель изобретения - повышение степени очистки целевого продукта.Поставленная цель достигаетсясогласно способу получения кислотныхбелковых гидролиэатов в котором кгидролизату добавляют алифатическийдиамин при рН 8-11 общей формулыМ.-(СН) -ИН, где И =2-12, до постоянного значения рН реакционнойсмеси.Способ осуществляют следующимобразом.В колбу, оборудованную механической мешалкой, термометром сопротивления, стеклянным электродом типаЭСЛ-07 и каломельным электродомсравнения, помещают сернокислотныйгидролиэат белково-витаминного концентрата, очищенного от карамельныхпродуктов, Добавляют гидроксид бариядо рН 8-11.При постоянном перемешивании гидролизата вводят 15 сухого кислогоактивированного древесного угля марки ОУ-Б. Возвращают значение рНдо 8-11, дополнительно добавляя гидроксид бария. Добавляют такое количество водного насыщенного раствораочищенного алифатического диамина, при котором рН смеси не меняется,Смесь нагревают до 100 С при непрерывном перемешивании. После 60 СОначинается достаточно быстрая реакция между карбоксильной группойуглеводов и аминогруппами диамина (образуется темно-красный осадок комплекса углевод-диамин), которая регистрируется по изменению рН, которое все время возвращают к исходному значению, через 60-90 мин вре мя зависит от рН гидролизата) процесс связывания углеводов диамином заканчивается. Содержимое колбы охлаждают проточной водой, подкисляют концентрированной серной кислотой до рН 4,0, чтобы перевести Ва (ОН) в нерастворимый.Уголь с адсорбированным аэомети-. .новым производным . углеводов и сульфат бария отфильтровывают через два слоя .промытой фильтровальной бумаги.Суспензий угля вэмучивают дистиллированной водой с рН 4,0-4,2(рН воды доводится концентрированной Н 84) и повторно отфильтровываютчерез тот же бумажный фильтр.П р и м е р 1. В 0,5 л четырехгорловую колбу, оборудованную механической мешалкой, термометром сопротивления, стеклянным электродомтипа ЭСЛ-07 и каломельным электродом сравнения, помещают 350-370 млсернокислотного гидролизата белково витаминного концентрата, очищенногоот карамельных продуктов. Добавляютгидроксид бария до рН, например 7,95.При постоянном перемешивании гидролизата вводят 15 (вес/объем) сухого 15 кислого активированного древесногоугля марки ОУ-Б. Исправляют значениерН, дополнительно добавляя гидроксидбария до 7,95. Добавляют водный насыщенный раствор очищенного гексаметилендиамина от рН смеси 7,95 до 8,05(т,е. среднее рН 8,0) и содержимоеколбы нагревают до +100 С при перемешивании. После +60 С начинаетсядостаточно быстрая реакция междукарбонильной группой углеводов иаминогруппами диамина (комплекс темно-красного цвета), которая регистрируется по изменению рН от 8,05до 7,95.Все время рН возращают к 8,05,мерно добавляя раствор диамина, через 60-90 мин (время зависит от рНгидролизата процесс связывания углеводов диамином заканчивается. Содержимое колбы охлаждают проточной 35 водой, подкисляют концентрированнойсерной кислотой до рН 4,0, чтобы перевести Ва(ОН) ., в нерастворимыйВа 504 . Уголь с адсорбированными азометиновыми производными углеводов 40 и сульфат бария отфильтровывают через два слоя промытой фильтровальнойбумаги. Суспензию угля вэмучиваютв 150ч дистиллированной воды срН 4,0-4,2.(НО 4 и повторно отфиль тровывают через тот же бумажныйфильтр.П р и м е р 2. Все операции посвязыванию углеводов гексаметилендиамином и адсорбции на 15 угляОУ-Б проводят аналогично примеру 1,но исходное значение рН гидролизата устанавливают гидроксидом барияравным 8,95 и удерживают при кипячении его диамином в интервале рН9,05-8,95. Результат очистки от углеводов такой же; как по примеру 1, но скорость реакции возрастает П р и м е р 3. Все операции по связыванию углеводов гексаметилендиамином и адсорбции на 15 угля ОУ-Б проводят аналогично примеру 1, но исходное значение рН гидролиэата устанавливают гидроксидом бария равным 9,95 и удерживают при кипячении рН в интервале 10,05-9,95, до1084679 бавляя диамин. Результат очистки отуглеводов такой же, как по примеру 1,но скорость реакции возрастает больше,чем при рН 7,95-8,05 (пример 1)и рН 8,95-9,05 (пример 2) . ОУ-Б производят аналогично примеру 1,но исходное значение рН гидролнзатаустанавливают гидроксидом бария равным.10,95 и удерживают его при кипячении, добавляя диамин;Результаточистки от углеводов такой же, какпо примеру 1, но скорость реакциинесколько ниже, чем при рН 9,9510,05.гидролизате перед очисткой П р и м е р 4 Все операции .по связыванию углеводов гексаметилендиамином и адсорбции на 15 угля Содержание веществ в в Ъ на сухие вещества в мг/мл в 370 мл 19,18 3,1095 г1,2857 г2,7935 г2,422 г 8,4043,475 7,93 7,55 17,23 14,94 6,54643,807 16,2086 г Эола 0,8251 г 5,09 2,23 Цветность в 0,5 см кювете фильтрВ 9 ФЭК 56 М-У 4, 1=0,00. аспарагиновая кислота, треонин, серии, глутаминовая кислота, пролин,глицин, аналин, цистин (следы), ваКачественная аминограмма: открыто.30 лин, метионин, изолейцин, лейцин, триптофан, лизин, гистидин, аргинин, тирозин, .фенилаланин.Содержание веществ в гидролизате после удаления углеводов в % на сух. в-ва в 275 мл506 г8,15 7,8 0,7562 г МПри проведении процесса связывания углеводов диамином происходит упарйвание раствора. Цветность в 0,5 см кювете фильтр 99 ФЭКМ-У 4,1 = 0,00. нин, аспарагиновая кислота, треонин серии, глутаминовая кислота, пролин глицин, алании, цистин (следы), валин, метионин, изолейцин, лейцин, тирозин, фенилаланин. Качественная аминограмма: открыто-триптофан, лизин, гистидин, аргилеводыАминный азотОбщий азотБиуретовые продуктыСухие вещества 51 мг 2,83 0,34 Зола УглеводыАминный азотОбщий азотБиуретовые продуктыСухие вещества УглеводыАминный азотОбщий азотБиуретовые продуктыСухие веществаЗола Содержание вещества в промывнойв мг/мл0,140,8971,61,2411,6 воде после угляв Ъ на сухие вещества1,27,7313,7910,69 1,1511 г2,134 г0,7898 г9,6891 г в 150 мл21 мг134,55 мг240 мг186 мг1,74 мг1084679 аспарагиновая кислота, треонин, серин, глутаминовая кислота, пролии,глицин,аланин,валин,метионин,изолейцин,лейцин,тирозин,фенилаланин. Суммарное количество веществ после очистки и ихк исходному вк исходному В расчете на 100 мл76,1 мг 2,3 1,2856 г2,374 г 99,99 84,98 40, 3 0,9758 г 11, 4291 70,51 97,83 0,8072 г ролизатов БВК до и после удаленияуглеводов показало, что все они сохраняются, т.е. способ очистки не затрагивает таковые. Особо надо под-.черкнуть, что азотистые питательныеосновы фирм, таких как "Дифко" (США),или "Оксойд" Англия) уступают пофизико-химическим и органолептическим свойствам гидролизатам БВК,очищенным как от карамельных продуктов, так и от углеводов. Способочистки гидролизатов от углеводовнайдет широкое применение в приготовлении азотистых питательных основдля микробиологических целей,парантерального питания больных с травмамй, для создания. пищевых смесейбольным диабетом и т.д. Составитель Е.Житникова Редактор Е.Лушникова Техред А,Ач Корректор Г.Решетник иЗаказ 1988/38 Тираж 823 . ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Рфилиал ППП фПатентф, г.ужгород, ул.Проектная, 4 Цветность в 0,5 см кювете светофйльтр В 9 ФЭК 56 М-У 4.1= 0,00.Качественная аминограммаф открыто. триптофан,лизин, гистидин, аргинин,УглеводыАминный азотОбщий азотБиуретовые продуктыСухие веществаЗола Следовательно, 97,7 углеводов удалено при очистке при полной сохранности всех аминокислот. Избыткагексаметилендиамина не может быть, так как иМеется остаточное .количество углеводов 26,84 мгНаличие остаточных количеств диаминов в основах исключается тем, 30 что процесс не доводится до 100 удаления углеводов. Отсутствие токсическогоэффекта гидролизатов, очищенных от углеводов, быпо установлено в экспериментах на белых мышах. Это подтверждается и посевами кишечной палочки на экспериментальных средах из этих продуктов. Изучение аминокислотного состава гид 16,84 мг302, 5 мг558,6 мг229,6 мг2,69 г 189,9 мг