Способ приготовления носителя для диск-электрофореза гуминовых кислот почв

иверситет им; И.В.Ломоносов СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ НОСИТЕЛЯДЛЯ ДИСК-ЭЛЕКТРОфОРЕЗА ГУИИНОВЫХКИСЛОТ ПОЧВ особапособ"я ана" Недостатки изв низкая разрешающа также то, что при рирующего геля пр пользование фоток флавина, что дела трудоемким и плох Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к изучению состава гуминовых кислот почв.Известен способ приготовления носителя для электрофореза гуминовых кислот почв, в которых носителем является хроматографическая бумага или агаровый гель 1 1.К недостаткам известного сп относятся низкая разрешающая с . ность и длительность проведени лиза.Известентеля для дитрубки концделяющим по способ приготовления носиск-электрофоретической. ентрирующим гелем и раз" лиакриламидным гелем 123.естного способая способность, Фготовление концентедусматривает ис"атализатора рибо .ет приготовление .о воспроизводимым. Цель изобретения - повышение разрешающей способности фракционирования гуминовых кислот.Поставленная цель достигаетсятем, что .в качестве концентрирующего геля используют декстрановыйгель с интервалом фракционированияпо молекулярной массе 099-150000 вколичестве 0,35-0,Ь 5 мл, а в качестве разделяющего геля " полиакрилвмидные гели с диаметром пор 121, 161,28 А в соотношении 1: 1:1, в количествах, равных для каждого геля 1,Й 1,65 мл.На чертеже представлена схема,поясняющая способ.На схеме представлены диск"электрофореграммы гуминовой кислоты:1-по известному способу, 2 - по предлагаемому способу.П р и и е р 1. В электрофоретичес"кую трубку длиной 20 см и диаметром0,6 см помещали разделяющий полвакриламидный гель с диаметром пор 30 А в3 9188количестве 4,65 мл до высоты 18 см,затем наслаивали сверху концентрирующий полиакриламидный гель с диаметромпор 50 А в количестве 0,4 мл на высоту 1,0 см; на гель помещали препарат гуминовой кислоты. Трубки поме. щали в электрофоретицескую камеру.Модель - 69 (Реанал. Венгрия) ипроводили диск-электрофорез при стабилизации по току 2 мА на трубку втечение 30 мин и 5 мА на трубку в течение 1 ч. В результате было получено4 Фракции гуминовых кислот (схема 1),П р и м е р 2, В электрофоретицес"кую трубку длиной 20 см и диаметром0,6 см помещали полиакррламидныйгель с диаметром пор 12 я в количестве 1,45 мл до высоты 5,4 см, сверхунаслаивали полиариламидный гель сдиаметром пор 16 А в количестве20145 мл на ту же высоту и аналогич"оно гель с диаметром пор 28 А,Соотношение лолиакриламидных гелей 1: 1: 1 является необходимым идостаточным условием для полученияпри диск-электрофорезе наилучшей. разрешающей способности, котораяоценивается по цислу получаемых электрофоретических Фракций, Изменение,соотношения гелей допустимо в преЗОделах не более 5 Ф, т.е. величиныэкспериментальной ошибки, включаю"щей ошибку набора растворов пипеткой,ошибку внесения растворов исходныхвеществ в электрофоретические трубки при полимеризации гелей и др.Изменение соотношения гелей более54 приведет диск"электрофорез вполиакриламидном геле к ухудшениюего разрешающей способности: размыванию зоны электрофоретических фрак 4ций, а также слиянию близко лежащихпо электрофоретической подвижностиФракций в одну сплошную форетицескуюзону, уменьшению общего числа получаемых фракций,45Затем проводили наполнение декст.рановым гелем с интервалом фракционирования по молекулярной массе4000- 150000 Яерйайех 6-100 в коли"честае 0,35 мл на высоту 0,95 см, 5 фсверху помещали препарат гуминовойкислоты, условия проведения дискэлектрофореза аналогичны приведеннымв примере 1. В результате получено 8фракций гуминовых кислот,55П р и м е р 3. В электрофоретическую трубку помещали полиакриламидный гель с диаметром пор 12 Д в коли 48 4цестве 1,65 мл до высоты 6,2 см,сверху наслаивали полиакриламидныйгель с диаметром пор 16 А в количестве 1,65 мл на высоу 6,2 см и гельс диаметром пор 28 А на ту же высотуи в тех же количествах. Затем проводили наполнение трубки декстрановым гелем с интервалом фракционирования по молекулярной массе 4000-150000на высоту 1,05 см в количестве 0,45 мл,сверху помещали препарат гуминовойкислоты. Условия проведения дискэлектрофореза аналогичны приведеннымв примере 1.В результате получено 9 фракцийгуминовых кислот.Как видно при приготовлении носителя для фореза согласно известномуспособу было выделено 4 фракции гуминовой кислоты (а, в, е, ж) по ихэлектрофоретической подвижности вгеле. При этом фракиця не диффузна ине концентрируется в виде узкой полосы, что свидетельствует о, низкомкачестве разделения, Предлагаемыйспособ позволяет выделить 8-9 Фракций (а, б, в, г, д, е, ж, 3, и) приэтом вместо диффузной, размытой зоны е выделяется ряд четких Фракций(г-е), а полоса вещества (ж) (по известному) разделяется на 2-3 Фракции(ж,з,и).П р и м е р 4. В электрофоретическую трубку длиной 20 см помещали полиакриламидный гель с диаметром пор12 А до высоты 6 см, в количестве.1,35 мл сверху наслаивали полиакриламидный гель с диаметром пор 161, наввысоту 6 см и с диаметром пор 28 Ана ту же высоту в количестве 1,55 мл.Затем проводили наполнение декстрановым гелем с интервалом Фракционирова"ния по молекулярной массе 4000- 150000Берйадех - 6- 100 в количестве 0,4 млна высоту 1 см, сверху помещали препарат гуминовой кислоты, условияпроведения диск-электрофореза аналогичны приведенным в примере 1. Врезультате получено 9 фракций гуминовых кислот (схема 2),Таким образом, предлагаемый способ позволяет увеличить разрешающуюспособность при разделении гуминовыхкислот почв методом диск-электрофореза более, чем в 2 раза.Формула изобретенияСпособ приготовления носителя длядиск-электрофореза гуминовых кислотЯ-Ф - б ИХ8Р ИИВ аида Составитель Л,РубиноваТехред В. Кастелевич Корректор Н,йвыдкаяИ В Редактор Н.Пушненкова Заказ 2129/27 Тираж .883 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Рауаская наб., д. М 5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,5 918848 6почв, включающий заполнение электро" 12, 16 и 28 А в соотношении 1: 1: 1, в форетической трубки концентрирующимколичествах, равных для каждого гегелем и разделяющим полиакриламид-ля 1,45- 1,65 мл.ным гелем, о т л и ч а ю щ и й с я Источники информации, тем, что, с целью повышения разрещаю-принятые во внимание при экспертизе щей способности фракционирования. гу. Кононова А.Н, Органическое веминовых кислот, в качестве концент" щество почв. Н., "Наука", 1963, рирувщего геля используют декстрано- с. 120.вый гель с интервалом фракционирования по молекудярной массе 4000- 1 о 2, Степанов В,В. и Пахомова А.Н.150000 в количестве 0,35-0,4 мг, а . Электрофорез гумусовых веществ в по- в качестве разделяющего геля - поли- лиакриламидном геле. - "Почвоведе" акриламидные гели с диаметром пор ние", И 12, 1969, с. 67 (прототип).