Способ получения лактогенногогормона

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 1833256 Союз СоввтсимкСфцмеектмческмзВкнубеа(51) М. Кл а с присоединением заявки-А 61 К 37/32 йеумратаеимЯ кентат СССР ае аазам юабратааай я фтармтзЯ(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛАКТОГЕННОГО ГОРМОНА Изобретение относится к хнмнко-фар мацевтнческой промышленности и касается получения лекарственных средств, которые могут быть применены в медицинскрй прак тике для стимуляции лактации. у рожениц страдающих гнпогалактией.Известен способ получения лактогенного гормона путем растворения ацетонированного порошка из гипофизов крупного .рогатого скота в подкисленной воде, осаждения сырца гормона хлористым натрием, растворения осадка в воде, диализом полученного раствора против фосфатного буфера с последующим диализом против ацетатного буфера и центрифугированием 1),Однако известный способ длителен (12 - 14 сут), трудоемок (более 30 операций) и обеспечивает недостаточно высокий выход :лактогенного гормона (1500 - 3000 ед/кг) с активностью в 10 раз ниже, чем исходный гормон.Цель изобретения - повышение активности, увеличение выхода целевого продукта и упрощение процесса.Указанная цель достигается тем, что лактогенный гормон получают путем растворения ацетоннрованного порошка нз гипофи 2зов крупного рогатого скота в подкисленной воде,осаждения сырца гормона хлористым натрием, растворения осадка в воде, диализом полученного раствора против фосфатного буфера с последующим диализом против ацетатного буфера и центрифугированием, при этом осадок после высаливания растворяют в воде при рН 8,0 - 8,2, диализуют против фосфатного буфера с рН 7,1 - 7,3, надосадочную жидкость фильтруют через кизельгур и затем диализуют, против аце татноо буфера с рН 5,1 - 5,3.Способ осуществляют следующим образам.Осадок (высол) сырца лактогенного гор- мона (ЛТГ) растворяют в воде при рН 8,0 - 8,2, а нерастворимую часть отделяют 1 ф центри фуги рованием, Раствор помещаютв целлофановые мешки и диализуют против 0,4 - 0,7 молярного фосфатного буфера с рН 7,1 - 7,3 до полного отделения балластных веществ (10 - 40 ч). Выпавший осадок, отделяют центрифугированием, а надосадочную жидкость фильтруют через слой кизельгура (0,5 - 2 см).Прозрачный раствор помещают в целдофановые мешки и диализуют против833256 30 формула изобретения 50 30,05 - 0,2 молярного ацетатного буфера срН 5,1 - 5,3 в течение 8 - 24 ч, Выпавшийосадок отделяют центрифугированием, растворяют в воде, доводят значение рН до 8и лиофилизуют. Выход лактогенного гормона 5000 - 20000 ЕД из 1 к передних долейгипофизав крупного рогатого скота, Актив йость гормона 15 - 20 ЕД/мг,При электрофорезе в полиакриламидномгеле обнаруживаются 3 основные полосы,характерные для ЛТГ.Пример . Берут 50 г кислого ацетоннрованного порошка, полученного из 4 кгпередних долей гипофизов крупного рогатого скота, растворяют в 2 л 0,1 н растворауксусной кислоты и к раствору при перемешиванни добавляют 130 мл насыщенногораствора хлористого натрия. Осадку даютсформироваться в течение 2 ч при 5 С, затемцентрифугируют. Надосадочную жидкостьиспользуют для получения кортикотролнна,а осадок растворяют в воде при рН 8,0.Полученный раствор заливают в целлофановые мешки и диализуют в течение 24 чпротив 10 л О,О 5 М фосфатного буфера, содержащего 0,5 моля хлористого натрия,рН буфера 7,3. Образовавшийся в процессе диалиэа осадок отделяют центрифугированием, надосадочную жидкость фильтруют через слой кизельгура толщиной 2 см.до получения нуозрачного раствораПолученный раствор помещают в целлофановыемешки и диализуют против 0,1 М натрийацстатного буфера с рН 5,3 в течение 8 чпри 5 С, Выпавший в врецесее диализа осадок ЛТГ . отделяют цеитрифугнровавием,растворяют в воде рН 8,0 и лиофилизуют.Вес порошка 3,2 г при активности 20,5 ЕД/мгЦимер 2. Действуя аналогично примеру.1, осадок растворяет в воде при рН 8,2а полученный раствор помешают в целлофановые мешки и диализуют против фосфатного буфера.с рН 7,1. Образовавшийся осадок отделяют, а надосадочную жидкостьфильтруют через слой кизельгура толщиной0,5 см. Процесс фильтрации повторяют до получения прозрачного раствора,. Получевый таким образом раствор помещают в целлофановые мешин и дяализуютпротив ацетатиого буфера с рй 5,1 в течение24 ч при 2 С. Образоваваийся осадок ЛТГ, отделяют центрифугированием, промываютацетоном и сушат в вакуум-сушильном шкафу лри,температуре не выше 45 С. Вес порошка 5,5 г при активности 6,0 ЕД/мг.Пример 3. 100 г кислого ацетонированного порошка, полученного из 5 кг переднихдолей гипофизов крупного рогатого скота,растворяют в 5 л дистиллированной водыи 2 и раствором соляной кислоты. рН врастворе доводят до 2,8 - 3,0. К растворулри перемешивании добавляют 325 мл насц 1 ценного раствора хлористого натриян отстаивают при температуре 2 - 8 в течетпне 3 - 4 ч. 4Иылавший осадок отделяют центрифугированием и вновь растворяют в 2,5 л воды, доводя значение рН до 2,0 - 2,5. Нерастворимую часть отделяют центрифугированием, а к надосадочной жидкости добавляют 160 мл насыщенного раствора хлористого натрия. Через 1 - 2 ч осадок собирают центрифугированием, суспендируют в воде и значение рН доводят до 7,5 - 8,5. Объем полученного раствора 1 л. Его заливаютдвойные целлофановые мешки и диализу ют против 8 л фосфатного буфера с рН6,4 - 6,8 в течение 36 ч. Выпавший после диализа осадок отделяют центрифугирова.нием и отбрасывают, а надосадочную жид.кость помещают в двойные целлофановые мешки и диализуют против 8 л ацетатного буфера с рН 5,4 - 5,8 в течение 36 ч,Выпавший после диалиэа осадок отделяют центрифуги рова пнем, суспенднруют в 500 мл воды, значение рН доводят до 3,0 добавлением соляной кислоты: Туда же до бавляют 33 мл насыщенного раствора хлористого натрия. Выпавший осадок лактогенного гормона вновь растворяют в дистиллированной воде лри рН 7,5 - 8,5, а полученный раствор помещают в целлофановые мешки и диализуют против фосфатного буфера в течение 24 ч. Осадок отделяют центрифугнрованием, а надосадочную жидкость 6 омещают в целлофановые мешки и диализувг против ацетатного буфера в течение 24 ч, Образовавшийся осадок лактогенного гормона отделяют центрифугированием, промывают ацетоном и сушат до полного удаления ацетона.Вес сухого порошка лактогенного гормона 9,2 г, а его биологическая активность 0,8 ЕД/мг, быход изкг передних долей гипофизов крупного рогатого скота составляет472 ЕД.Предлагаемый способ по сравнению сизвестным позволяет повысить удельную активность ЛТГ с 0,5 - :1,0 ЕД/мг до 15 - 20 ЕД/мг и качество за счет исключения , примесей балластных белкоВ, что резко повышает. эффективность препарата при его медицинском применении, увеличить выход с 1500 - 3000 ЕД/кг до 15000 - 20000 ЕД/кг, а также упростить техыологнческий процесс 45 за счет сокращения числа операций с 30до 15, что в 3 - 4 раза сокращает продолжительность процесса,Способ получения лактогенного гормона путем растворения ацетонированного порошка нз гипофизов крупного рогатого скота в подкисленной воде, осаждения сырца гормона хлористым натрием, растворения осадка в воде, диализом полученного раствора против фосфатного буфера с последующим диалиэом против ацетатного буфера и цент833256 Составитель С. МалютинаТехред А. Бойкас Корректор С. ЩомакТираж 687ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений н открмтнй113035, Москва, Ж - Зб, Рауаская наб д. 4/оФилиал ППП Патент, г, Умгород, ул. Проектная, Ф Редактор Е. КинивЗаказ 3845/4 рифугированием, отличающийся тем, что, с целью повышения активности, увеличения вьжода целевого продукта и упрощения процесса, осадок после высаливания растворяют в воде прирН 8;0 - 8;2 днализуют про тнв ацетатного буфера с рН 7, - 7,3, над. осадочную жидкость фильтруют через кизил в гур и затем диализуют против ацетатногобуфера с рН 5,1 - 5,3,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Справочник по производству органо 3 препаратов. Под ред. Турова В, А, и др.М Медицина, 970, с. 59.