Способ обработки спермы

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯИ АВТОееСИОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоеетсеаСоциалистически кРеспублик(6),Пополнительное к авт. свид-ву Заявлено 06. 05, 65 121) 1006672/30 - 15рисоединением заявкиПриоритет -5 А 6107 судерствениый комете СССР ка делам кзебратеик я открытке) СПОСОБ ОБРАБОТКИ СПЕРМЫ бретение относится к искусственному о кили не терпели значительных изменении и сохр обходимую активность.Применение бактериостатических пре как и термическая обработка разбавитет преждают развитие микрофлоры, котора но действует на половые клетки самца. нием же достигается необходимыи для вотных атов В современных условиях воспроизводство ста.да крупного рогатого скота осуществляется в резулыате работы широкой сети станций искусственного осеменения сельскохозяйственных животных,на которых сосредоточено поголовье высокоценных племенных производителей,Маточное поголовье (коровы и телки), осеменяемое спермой быков станции, находится на фермах колхозов и совхозов, расположенных от станции в радиусе до 100 - 150 км. При такой системе организации воспроизводства крупного рогатого скота сперма, полученная от производителя, продолжительное время должна находиться вне организма, прежде чем будет введена в половые пути15самки.Сперма при ее хранении в натуральном виде в результате одностороннего катаболитического обмена теряет свою способность к оплодотворению20 в течение очень короткого срока. Для сохранения оплодотворяющей способности спермы более про.должительное время требуется соответствующая обработка с тем, чтобы половые клетки не приеи предуя губитель азбавлполовых давления и снижеавочных половых клеток уровень осмотическогоние концентрации секретов добжелез.Известный способ обработки спермы произво дителей на станциях искусственного осеменения водится к следую а искусствводителя уотпр ляет ее в лаборатори эякулят по активност ения вто. кже оце- якулята комнатнои температуре до времени получ рого эякулята (10 - 15 мин), который та нивает по этому показателю, Если оба э (или три) соответствуют требованиям п ности, определяют концентрацию, измер объем и разбавляют синтетической средс .но - жел точно - цитр атным ра збав ител ем) тив.общий и (глюкоз11). енению сельскохозяиственны Уиную вагину получает спер.в спермоприемнике достав.Лабо рант оценив ает перв ыйи оставляет его стоять при668677 4олжительное время /3 - 4 дня). К концу 3-4 сутранения на пунктах искусственного осеменениятивпость спермиев находится на уровне или нес.лько ниже допустимых норм, что вызывает не.бходимость частого получения от быков и завозапермы в хозяйства,Подготовка искусственных вагин, получениепермы от быков, ее оценка, разбавление, маркиовка и расфасовка требуют значительных затратвремени, энергии, материалов и химикатов. СущестВенные затраты связаны также с использованиемтранспорта по доставке спермы в хозяйства,Цель изобретения - разработать дешевый и до-.тупный способ, повышающий сроки сохраненияактивности половых клеток производителей внерганизма путем ограничения активизирующегоействия на клетки секретов добавочных половыхелез,Зто достигается тем, что удаление секретов изпермы производят не позднее 3 - 5 мин после еелучения, а центрифугированне проводят при3 - 6 тыс, об/мин в течение 8 - 15 мин до полногодаления секретов добавочных половых желез,Известно, что у домашних животных при естественном спаривании активизирующее действиееекретов добавочных половых желез на половыеклетки является важным приспособительным факором, играющим положительную роль. При исусственном же осеменении, где между получеием спермы и ее введением в половые пути саок проходит значительное время, продолжительое актнвирующее действие этих секретов являтся вредным.Плазму спермы составляют секреты придаткаеменника, пузырьковидных, предстательной, куеровых, уретральных желез. С момента соедине.я половых клеток с плазмой спермы происхот сильное возбуждение дыхательного,гликолити.еского процессов в половых клетках под влияним рН,большого количества электролитов,фруктоы,аскорбиновой кислоты и широкого спектра ферентов и других активных веществ плазмы.Присловии хранения спермы при низких плюсовыхемпературах (О - плюс 4 С) возбуждающее дейстие плазмы,как установлено, продолжается вплотьо гибели половых клеток.В результате односторон.его катаболитического обмена, энергетическихатрат клеток на движение их запасы истощаютсяклетки теряют активность.Сперму для опытов получают от полновозрацтых производителей симментальской породы, Ус.овия кормления, содержания как и режим полоого использования быков в период опытов должы быль удовлетворительными и сходными длясех подопытных животных. Для исследованийтбирают один эякулят из двух дуплетных садок,разу после получения эякулята его оцениваюто активности спермиев, концентрации (на фотолектрокалориметре), измеряют объем. Затем Разбавленный эякулят (после проверки актив- дности) расфасовывают в флаконы, число и объем хкоторых выбирается в соответствии с заявками акхозяйств, Расфасованную сперму помещают в хо- колодильник до времени ее отправки на пункты ис окусственного осеменения колхозов и совхозов, сПри отправке сперму иэ холодильника переносятв термосы (температура в холодильнике и термосе от О до 4 С) и развозят на пункты для искус Рственного осеменения коров и телок. На пунктах 1 озавезенная сперма сохраняется при той же температуре, что и в термосе, в котором она была доставлена.Таким образом, при принятой технологии обра- с ботки эякулятов половые клетки производителей 1 находятся в разбавителе совместно с секретамио добавочных половых желез в течение 12 - 60 ч. д(времени использования спермы на пунктах), Этим ж объясняется то, что в разбавленном эякуляте половые клетки самца, сохраняемые при температу о ре 0 С, способны переживать более продолжитель- по ное время, чем в натуральном, неразбавленном эякуляте, УВ процессе разбавления и хранения половые клетки самца не освобождаются от активирующе го действия секретов добавочных половых желез, Разбавлением достигается лишь снижение удельного содержания секретов добавочных желез и, следовательно, роль их как активаторов жизненныхК процессов в клетках снижается незначительно. ЗО нЭякуляты отдельных быков отличаются не толь- м ко количеством секретов добавочных половыхн желез, но и качественным их составом, Следова.е тельно, при применении одинаковых степеней разбавления эякулятов отдельных быков достигает с ся различный эффект.пЭякулят с момента его получения до окончанияни процесса лабораторной обработки находится сов. ди местно с секретами добавочных половых желез бы. ка в течение 25 - 30 мин при комнатной температуре, 40 при которой жизнедеятельность половых клеток остается достаточно высокой, Совместо с секретами добавочных половых желез при комнатной У температуре находятся половые клетки и после разбавления (расфасовка, маркировка) в течение 45 в 15 - 20 мин. В течение 40 - 50 мин половые клет- д ки самца подвержены сильному активирующемун действию секретов добавочных половых желез.з При этом наступает израсходование энергетических ресурсов, а в результате жизнедеятельности О половых клеток происходит измснение рН среды до пределов, не совместимых с нормальными фун. кциями половых клеток, и другие метаболитичес. кие процессы, что определяет резкое снижение активности половых клеток, 55Пониженная температура (от 0 до 4 С) несколь о ко замедляет процессы обмена в спермиях, разбавленных искусственными средами, Половые клетки сохраняют свою живучесть при этом крайне непро- ээякулят каждого производителя разделяют надве равные по объему пробыопытную и контрольную, При этом считают, что в каждой из нихсходное количество половых клеток. Эти операциипроводят в течение 2 - 3 мин, Опытную пробу помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют на электрической центрифуте типа ЦУМ - 1со скоростью 4 тыс. об/мин в течение 10 мин, Вовремя центрифугирования опытной, контрольнуюпробу (вместе с секретами) разбавляют глюкозно желточно - цитратным разбавителем в отношении1:8 - 1:15.Центрифугированием достигается разделениеплазмы и половых клеток, которые под влияниемцентробежных сил оседали на дно пробирки, об. 15разуя рыхлый сгусток. Отсепарированную жидкость тщательно сливают и измеряют ее объем.Затем взамен снятой плазмы добавляют такое жеколичество глюкозно - желточно - цитратного разбавителя. После этого опытную пробу разбавляют тем же разбавителем в требуемом отношении.Этим достигается сходное разбавление спермы всравниваемых пробах. Все работы от момента получения эякулята н до времени окончания работпо разбавлению опытной пробы проводят в течечение 15 - 17 мин при комнатной температуре,В дальнейшем обе пробы помещают в холодиль.ник, где онн хранятся в течение всего последующеого периода опытов при температуре от 0 до + 4 С,4 Активность в сравниваемых пробах исследуют З 0через каждые 24 ч хранения в холодильнике. Исследования проводят в термостате при температуре от 38 до 40 С. При каждом исследовании обеих проб к исследуемой капле спермы добавляютодну каплю 3% - ного раствора лимоннокислого 35натрия, трехзамещенного, пятиводного.Полученные средние данные исследований 38эякулятов от 20 племенных быков показывают,что половые клетки, сохраняемые в разбавителебез секретов добавочных половых желез, имеют 40более высокую активность по сравнению с контролем, в котором семенная плазма не была удалена. Отделение спермиев от секретов добавочныхполовых желез сказывается не столько на увеличении общей продолжительности жизни спермиев, 45сколько на длительности поддержания на болеевысоком уровне их активности,При обработке эякулятов по разработанномуметоду сперма, сохраняемая при низких плюсовых температурах, имеет активность 0,6 балла на 50восьмые сутки, тогда как контрольная разбавленная вместе с секретами активность 0,6 балла сохранялалишь четверо суток,Применение разработанного способа создаетследующие преимушества: 551. Позволяет ограничить активирукнцее влияние секретов добавочных половых желез на спермии в процессе хранения н увеличить сроки сохра.нения активности половых клеток в 2 раза. 2. При раэбавлении позволяет устранить специфику эякулятов отдельных быков, отличающихсяразным количеством и качественным составомсекретов добавочных половых желез.3, Снизить режим использования быков в 2 раза.4. Сократить затраты труда, времени, материалов и химикатов, связанных с получением и обработкой эякулятов,5. В два раза снизить расходы, связанные странспортировкой спермы в хозяйства.Предлагаемый способ может быть использовандля продления сроков переживаемости половыхклеток производителей других видов сельскохозяйственных животных (жеребец, баран, хряк,кролик и др.),Для достижения такого эффекта в условияхпроизводства необходимо сразу после полученияэякулят оценивают по активности, концентрации(на фотоэлектрокалориметре), измеряют объем.Эти операции должны быть выполнены в течение2 - 3 мин. Сперму помешают в центрифужнуюпробирку комнатной температуры (22 - 25 С) ицентрифутируют на электрической центрифугесо скоростью 4 тыс. об/мин в течение 10 мин.После центрифугирования надосадочную жидкостьудаляют, а к осадку добавляют такое же количество разбавителя и зат:м разбавляют зтнм же раэбавителем в необходимом отношении, Сперму фасуют во флаконы и сохраняют в холодильнике,затем в термосах доставляют в хозяйства и сновапомещают в холодильник, где она 1 аходится в течение 6 - 8 сут и используется для осеменения коров и телок. Перед каждым осеменением определяют активность спермиев. По экспериментальнымданным оплодотворяемость коров и телок приэтом не уменьшается по сравненшо с контролем.формула изобретенияСпособ обработки спермы, преимущественно быков, включающий удаление из спермы секретов добавочных половых желез путем центрифугирования, последующее разбавление ее синтетическои средой и выдерживания при температуре от 0 до + 4 С, отличающийся тем, что, с целью длитель. ного сохранения биологической активности спер. миев, удаление секретов из спермы проводят не позднее 3 - 5 мин после ее получения, а центрифугирование проводят при 3 - б тыс об/мин в течение 8 - 15 мин до полного удаления секретов добавочных половых желез.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1, Мушенко Д, А. Некоторые усовершенствования в искусственном осеменении свиней. Автореф. дис. на соиск. степени канд., биол. наук, М., 1962.