Штамм дрожжей hansenula роlyмоrрна -биотрансформатор метанола в формальдегид

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК А 163470 119) 2 й 1/16, С 12 Р 7/24 51) г;- 1 П ;П 11 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ВТОРСКОМУ СВИ ЛЬСТВ 2 йг 10ление ИнинаГ,П,Кшем хититута инска по 1 В 1 ое га 1 т 1. Во 1 е, А 9 г 1 яющие повышенную те в среде с метаноым концентрациям довательно 6, 10. 12 икробиолокасается метанол в штаммы, прояв стентность при р к повышен альдегида (посполучение штамма, шение выхода форро 1 у 1 т) огрЬа тамма типа торый храимии и фи- АН СССР,микростаствием Уф.П используют дозу Уф-луую 10 выживания клеают мутанты из штамма, осте в среде с глюкозой му спирту, Один из по- впоследствии подверганному мутагенезу и отбиПри мутагенезе ей, обеспечивающ ок. Вначале отбир резистентные при0,1 мМ аллилово ученных мутантов ют УФ-индуцирова ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(56) Соцбегс В, 1,Ва1980, ч, 22, р, 1155Тап 1 ОЗаа .1СЬе 1 п, 1985, ч. 49,(54) ШТАММ ДРОЖЖЕЙ НАМЯЕМ Р 01 УМОВРНА - БИОТРАНСФОРМА МЕТАНОЛА В ФОРМАЛЬДЕГИД Изобретение относится к мгической промышленностиштамма, трансформирующегоформальдегид.Цель изобретения -обеспечивающего павымальдегида.Новый штамм Напзепц 1 аАЗ - 24 получен из дикого шНапзепца ро 1 угпогр 1)а 01,1, конится в музее Института биозиологии микроорганизмовг ущино, путем направленндийного мутагенеза под возлучей.(57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается штамма, трансформирующего метанол в формал ьдегид. Цель изобретения - получение штамма, обеспечивающего повышение выхода формальдегида. Новый штамм представляет собой штамм дрожжей Напзепц 1 а роутогрЬа АЗ - 24, полученный из дикого штамма Напзепца ро 1 угпогр 1)а 01 1 путем направленного многостадийного мутагенеза под действием УФ-лучей. Штамм Напзепц 1 а ро 1 угпогр 1)а АЗ - 24 депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под М У. Штамм в среде с метанолом накапливает 0,6 М формальдегида. 1 ил,рают лрези ослом нформ лемМ).Полученный штамм дрожжей Напзепц 1 а ро 1 утогр 1)а АЗ - 24 депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под 1 ч. У - 705,Штамм Напзепца ро 1 утогрЬа ВКПМ В Ухэрактеризуется следующими культурально-морфологическими и физиологическими признаками.Культурально-морфологические признаки, Вегетативные клетки при выращивании на сусло-агаре плотностью 8 Б при 37 С в течение 2-3 сут имеют круглую или овальную форму размером (1,5 - 4,6) Х (1.9 - 5,3) мкм, Клетки одиночные, редко встречаются небольшие скопления из 2-3 клеток. Размножение почкованием, В основном расположение почек апикальное. Мицелий илипсевдомицелий культура не образует, капсула отсутствует, Включения при просмотре в световом микроскопе выражены слабо. Реакция с диазонием синим отрицательная, Вегетативные споры не образует. Культура не способна к спариванию, При длительном культивировании на сусло-агаре (более 2-х недель) около 0,5-1клеток содержат споры,На сусло-агаре после 2 - 4 сут культивирования при 27, 30 и 37 С колонии и штрих светлокремовые, выпуклые, блестящие, с ровными краями, сметанообразной консистенции, легко снимается петлей.В жидкой среде при выращивании на солодовом сусле плотностью 8 Б при 37 С в статических условиях на 2 - 3 сут образуется кольцо и островки очень тонкой пленки, а затем осадок клеток слегка кремового цвета. При выращивании культуры в указанных условиях на качалке рост отмечается в виде помутнения среды.Физиолого-биохимические признаки, Аэроб, Температурный диапазон роста 10- 42 С, оптимальная температура 37 С. Оптимум рН для роста 5,5, Культура растет в присутствии 1 М сорбита. В среде с 10%- ным МаС рост слабый,Чувствителен к циклогексимиду, антимицину П, нистатину, резистентен к ампицилину, тетрациклину.Отношение к источникам углерода: хорошо утилизирует глюкозу, мальтозу, трегалоэу, рибоэу, эритрол, рибитол, маннит, глицерин, этанол, метанол, плохо утилизирует ксилоэу, сахарозу, рамнозу, лимонную кислоту, янтарную кислоту, не утилизирует галактозу, лактоэу, раффиноэу,-арабинозу, крахмал,В качестве источников азота хорошо усваиват соли аммония и нитраты,Рост штамма в синтетических средах абсолютно зависит от наличия биотина, тиамин частично стимулирует рост.При росте в .среде с глюкозой штамм характеризуется отсутствием алкогольоксидаэной и формальдегидредуктаэной активностей.5 10 15 вания штамма Напзепца ро 1 угпогрЬа ВКПМ . М У - 705. П р и м е р 1, Штамм выращивают до 20 25 30 35 40 45 После выращивания в среде с метанолом клетки обладают активностью алкогольоксидазы, формал ьдегидредуктазная активность отсутствует.П рототроф.Клетки штамма не содержат плазмид,ГЦ пар составляет 487 ь.Штамм нетоксичен в опытах на белых мышах,Штамм хранится на скошенном суслоагаре при 4 С, пересевы следует производить через 3-4 мес,Сущность изобретения поясняется следующим конкретным примером использосередины экспоненциальной фазы в среде следующего состава (иэ расчета на 1 л среды): метанол 4 мл, (ИН 4304 3 г, КН 2 Р 04 1 г, М 9504 7 Н 20 0,5 г, СаС 2 0,1 г, дрожжевой экстракт 0,5 г. Культивирование ведут на качалке (200 об/мин) при 28 С в течение 24 ч, Затем клетки осаждают центрифугированием и переносят в свежую ростовую среду, содержащую клетки (10 мг сухого веса/мл), 0,1 М фосфатный буфер с рН 6,0 и метанол (10 опо объему). После инкубации на качалке (200 об/мин) при 28 С в течение 24 ч клетки осаждают центрифугированием, Формальдегид идентифицируют по специфической реакции Нэша с ацетилацетоном. В указанных условиях штамм накапливает в среде 0,5 м формальдегида,На чертеже приведена калибровочная кривая. Концентрации фомальдегида в среде, где кривая 1 - спектр поглощения продукта реакции стандартного 2,1 мМ раствора формальдегида с ацетилацетатом, кривая 2 - то же, для формальдегида, полученного биотрансформацией 1,03 мМ метанола (культуральная жидкость, содержащая 0,618 М формальдегида, разбавлена в 600 раз).Формула изобретения Штамм дрожжей Напзепца ро 1 угпогрЬа ВКПМ М У- биотрансформатор метанола в формальдегид.1634709 хншсио ьптэипшиу О.Кравцов Корр аз 733 Тираж 372 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ С 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5