Ди(триэтиламмониевая)соль аденилил(2 -5 )-аденилил(2 5 )аденозин-тирозин метилового эфира в качестве промежуточного соединения в синтезе 125j-меченого 2, 5 олигоаденилата

(51)5 С 07 Н 21/00 ГОСУ/1 лРСТБЕН 1 Ый КОМИТЕТПО ИЭОБРЕТЕР 1 ИЯМ И ОТКРЫТИЯМГ 1 РИ ГКНТ СССР т1) с 0 ЯЦОПИС:,11 ИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВЫД 1=ТЕЛЬСТВУ но Ье но о о-р-о ее соосн,снгсн-ннсн-снгс-О о-с-сн сн Ь(71) Институт биоорганической химии АН БССР(72) Е. И, Квас ок, Т,И. Кулак, С, М, Шулякоаская, И,А,Михайлопуло и М,В,Макаренко (56, Са 111 а Н 1 ацгепсе 1 1 е Вогдпе Ое Каоце 1 СРоцх О Магт 1 1, Мопос 1 опа 1 а п 11 Ьос 11 ез ы 2-5 А о 1 19 опцс 1 еот 1 с 1 аз: Йе 1 г цзе 1 п 1 аг 1101 гпп 1 цгоаззау от р 1 Озр 11 СР 1 а 1 ео апс 1 бар Ьозрпо гу 1 а".ес 2-5 А //Яас 1 1 с 11 Т 1 1 тгц поаз зау апд Реатес 1 Ргос. Мес 1, Ргос. 1 п, Вугпр. %сппа 21-25,1 цпе, 1982, Веппа, - 1982, - Р. о сСагег М,С МеуегЬо И М,Е, 1 пзтаЬ 1 йу оХ2Вцсс 1 пу 1 ЕзТег 1.1 пАа 9 ез 1 п О -Мопозцсс 1 пу 1 Сцс 11 с А 1 МР-РГОЮп г оп) ц 9 аез ат 1 чецтга 1 рН /, 1 1 гп 1 лцпо 1, Ыет 1 оодз, - 1985, - Ч. 81, М. 2. - Р 24-247 Изобретение относится к области органической х 1111 ии, конкретно, к новому произ 7водному тримера 2, 5 -олигоадениловойкислоты общей фопмулы (1):1 О ("но о 2 ннс 13о,Мео=.-о ооно оо,лбеМо о о соосн,СН СН 2 СН 2 -ХН-СН-СН 2-( -ОНнн,где Ие= ,э )которое является полупродуктом в синтезе125 1-1 леченсго лиганда, используемого поирадиоиммунологическом определении биоло-(54)ДИ(ТРИЭТИЛАММОНИЕВАЯ) СОЛЬ АДЕНИЛИЛ (2-5)-АДЕНИЛИЛ (2-5)-АДЕНОЗИН-ТИРОЗИН МЕТИЛОВОГО ЭФИРА В КАЧЕСТВЕ ПРОМЕЖУТОЧНОГО СОЕДИНЕНИЯ В СИНТЕЗЕ 1251-МЕЧЕНОГО 2,5- ОЛИГОАДЕНИЛАТА(57) Использование: в качестве полупродукта в синтезе 125 1-меченого 2,5-олигоаденилата. Сущность изобретения: продукт: ди(триэтиламмониевая) соль аденилил (2 -5)аденилил (2 -51) аденозин-тирозин мети 11лового эфира БФ С 43 Н 67 Й 18018 Р 2. выхо 35,6; Л щах.260 нм. Реагент 1: аденилил(2- 5,аденилил(2-5)2,3-0-(2-карбоксиэтил)этилиденаденозина; реагент 2:метиловый эфир тирозина. Условия реакции: в среде диметилформамида в присутствии бутилхлорформиата. 1 табл. ЪФ гически активных 2,5 -олигоаденилатов в различных биологических объектах.Соединением, близким по строению к ф описываемому, которое используют для 3 получения 125 1-меченого лиганда на основе (Ь метилового эфира тирозина, является аде нилил(2 -5)аденозин, 3-ди-сукцинилти- ( розин метиловый эфир (1) формулы (1 О:вюй Недостатком этого соединения является наличие в нем лабильной сложноэфирнойсвязи. Как было показано для 2 -0-сукцинатааденоэин,51-циклофосфата и его коньюгатов с белком, гидрог(из сложноэфирной связи в водных растворах происходит даже при-20 С(2). 5Целью изобретения является ди(триэтиламмониевая) соль аденилил (2-5)аденилил(2 -5 )аденозин-тироэин метиловогоэ фи ра - и олуп родукт в си нтезе 125 1-ме=ченого 2,5-олигоаденилата, более стабильный по сравнению с описанным влитературе,Поставленная цель достигается соединением (1), которое получают путем конденсации аденилил(2-5 )аденилил(2 -5 )-2,3 15-0-(2-карбоксиэтил)этилиденаденозина (111)с метиловым эфиром тироэина (1 Я в диметилформамиде в присутствии бутилхлор.формиата с последующим выделениемсоединенияизвестными методами, 20но олаено одеЯ нн,нс( Но О дО 9 дйссн-соосн ОдР-О.2 Ч 2 внс,О Р-ОъДЧ з 11 НС 22-О 1125ОР-Оъ Ч 2 О ОО ОН,С Р(1(к 1 н 21 о=с-нн-снсоосаосн,30Сущность изобретения поясняется следующими примерами конкретного выполнения.П р и м е р 1, Ди(триэтиламмониевая)(6,06 мг, 60 мкмоль) триэтиламина добавляют 7,7 мкл (8,18 мг, 60 мкмоль) бутилхлорформиата, Смесь перемешивают прикомнатной температуре 40 минут и добавляют к ней суспензию, полученную при смешивании 6,96 мг (30 мкмоль) гидрохлоридаметилового эфира тирозина, 300 мкл диметилформамида и 4,15 мкл (3,03 мг, 30мкмоль) триэтиламина, Смесь выдерживают 50при комнатной температуре 15 часов, добавляют к ней 0,1 мл насыщенного при 0 Сраствора аммиака в метаноле и упаривают,Остаток хроматографируют на колонке (50смэ) с ДЕАЕ-целлюлозой 23 ЯЯ в НСОэ-форме, Колонку элюируют раствором триэтиламмонийбикарбоната в градиентеконцентрации от 0,01 до 0,3 М, Фракции,содержащие продукт, собирают и лиофилизуют, Получают 2,5 мг (1,6 мкмоль), 35,боь"О": " 1,2-211-СООС (,Обработкой соединения (1) растворомЛа " в натрийфосфатном буфере в присутствии хлорамина Т с последующим добавлением раствора натрия бисульфита и125колоночной хроматографией получаютмеченый лиганд (Ч),Использование соединения (1) в синтезе1 г"1-меченого лиганда (11) иллюстр 1 лруетсяконкретным примеоом синтеза последнего,П р и м е р 2. "1-меченый аденилил (2-5) аденилил(2 -5)аденозинтирозин метиловый эфир динатриевая соль (И),В ампулу, содержащую 10 мкл 0,1 Мнатрий фосфатного буфера (НФБ) рН 7,5,добавляют 5 мкл раствора, содержащего 1,5мкг (1 Я нмоль) аденилил(2 -5)аденилил(2 -5аденозин-тироэин метилового эфира в 0,1М НФБ б мкл раствора, содержащего 100125МБк Л 1 а в НФБ, и 10 мкл раствора, содержащего 20 мкг хлорамина Т в 0,1 М НФБ,Смесь перемешивают при комнатной температуре 15 минут, добавляют к ней 10 мклраствора, содержащего 20 мкг натрия метабисульфита в 0,1 М НФБ, и хроматографируют на колонке (1 х 25 см) с ТЫК-гелемНИ. Продукты эл(оиру(от раствором 0,1М НФБ, содержащим 0,1 О БСА, со скоростью б мл/час. Фракции, содержащие 1 производное (Ч), объединяют и соединения (1), УФ-спектр в воде, л. 1 ннс; 260 нм, 1 НМР-спектр в 020, ( д ), м.д от ТНС, 8,17; 8,13, 8,11; 7,91; 7,83; 7,75 с (по 1 Н, Н, Н; 7,01 д (2 Н, орта-Н, Р 101, Л=9,6 Гц), 6,68 д(2 Н, мега-Н, РЬОН, Л 9,6 Гц); 6,10 д( Н, Н, Л 1,2=4 Я Гц); 5,94 д (1 Н, Н,22=3,0 Гц), 5,84 д (1 Н, Н, Л 1-2=1,2 Гц), 5, 05 м (1 Н, Н); 5,01 м (21-, 2 Н); 3,38 с (ЗН, ОСНз); 3,3 т (1 Н, -ЛН-СН-СО-), 2,46 т (2 Н, -СН 2 СН 2-СО-ЛЗН-), 2,13 т (2 Н, -СН 2 СН 2 СОЛ 1-1-); 1,38 с (ЗН, СНэССН 2-СНг-)Соединение (1) получают с хорошим выходом в индивидуальном виде и используют125 в качестве полупродукта в синтезе 1-меченого лиганда (Ч) для радиоиммунологического определения 2,5 -олигоаденилатов в биологических обьектах.176861 г 25 Ъг35 ая Р - дР 1 ьОИМЗ Б /,"-.1 Я зеак.и в;.;ин,5 10 5 06 10 26 3 5 Ат реи исое 9 ; ( с 7 Я 7,9 нен 1,", Яво( ейргентел ост" тг ьехред й.У 1 дактор Корректо аказ 3620 БНИИПИ Государств 1ираж о о и 1 ит035, 1 Оскал,Подпиг нгеаяаб 4/5 а по ИЗОО "К 35 Ру риК СССР роизводственно-издатсльский ко бьНат "Пате т, г. Ужгород ул,Гагар 1 н лиофилизу:От, Пол;"а от 72 6 ЕБк (72,6","соединения ф) с радиохимической чисто;ай95-98% и удельной радиоакизностыо 1960Ки/ммоль. Связыванье меченого 1 гачда сантителами, специфичными к 2 .5-олигоадеиилату 1 И), составляло 95 3 ,Сравнительный а ализ устойчгВости соединения и указанного ана. ога всловияхреакции йодированибыл проведе;метопо "препаративнои тон кослой: ой хрог.а"ографии на пласти ках силуфола Контроль проВОдился путеГ 1 Определеия когчествапродуктов гидролиза. а также количес-, ва ис 1 чвходного соединения совместно с его -1-проИЗВОДНЫМ, КОТОРЫЕ В ",СЛОЯХхроматографии е Оа деляли:, ПОсле ровсмотра пластинки; УФ-свете (251 нм): з Вевырезались зоны, соогвогствугоц",е О- еленным соединениям, кооре сгоировались0,05,4 раствором натрийдо ецРсул лата.ПОЛУЧЕННЫЕ раотВОрЫ С ЕКтоофо ОхЕ-р,Овались на спектрофото иере Г"Осрл Одлине волны 260 мБ реакциоуо с 1 есь,-Об;,:,."Ял 1:1 О 50птически ед ниц (из Врс о г; 260,аденилил(2 -51 аделил 2 - 5 ;, езрозин метилового зфира л Д;с.цн,: ьного производного э;аОг Сп.;т .- 3 .;15 минут после на 1:Ла реасии- .е:- з.Он нов смеси о б 1 ра лись ал ко Г ь пас гво ОРпо 10 мкл которые сг 1 ев ивались ссВором натрий мегаб,Оульфитг Су.1;,;рыраствор наносился на пласти ку и хро .агографировался в системс изог 1 попаОлконц. Водный ам Вк-вода 7:2 1. Б качествелегко детектируемы; продух гов дест рук.Ии Контролиру- дналоге 1 ые соеди-, Бремя Оеакц 1, в мин.1 0 лога агенил 2 -5 В 1Оз и: н але - нозиг, СбоазуОц 1 ес" Г 1 Ог зОм также . СНОфоофатЫ аДОНОЗ.Г Р СГ,. :.О ЛНОЛОга 1/ И аЕ 1 аЛЬНОО ПСО 1 ЗВОЛЬгГС ВЛЕН, Л - ;1 ЛД. ОЗИН-тИПОЗИН МЕТЛОРОга З.л;Оа (В С- чае тр:.мера 1 з а Олз 1 Оолал;г,ь Результать а.ВлИзл г.",иседены в табли.;е,Соотноег 1 е о ,понентов реакц; он- но," Смеси; О; - ,";Сск х еди 1 Оа; при, 2, Гвг Воемя Оеак,йо-ц 1 ровагя по; - ,Оде - НО аолиЦЕ.лк,. Обоз"ом ; -, ":1:1 "х иагза вил- НО ЧТО В ПЕ;:ВУО ОЧЕОЕВ Ь ППРСХОДИТ ОГЩЕП-..:ц 1,;1 н,Таоа зат м г Потвхавт ГИДО Г,З ОЛГОН, КЛЕОтИДНОй ЦЕ-, Ято св. Вте ьстг:,ет о бользей усто. чиГОСТ( ЗВЯВЛЯЕХО "О ОЕ;И ЕНИЯ ПО соавнениге с ана Огом,Огр лз зсбрс.ения