Способ определения антигена в биологической жидкости

, ч. 9, с. 3-8.РЕДЕЛЕНИЯАНТИГЕОЙ ЖИДКОСТИ конъюгатом ан соединенной титровывают. щее с антител поглощение, р нечное развед Проводят новесия, что д зывания антиг иммуносорбен ной системы икролика, орый расата, даюы 450 нм ют как коднты ядвсиле свянятыми с Н буфер 1Х Ао где Ао - начальн А - концентнии системой ра Во - начальн Уравнениеследующего усл рация антигена(54) СПОСОБ ОБИОЛОГИЧЕС юл, К. 35сследовательский институтроток им. И,И.Мечникована, Л,И,Ванеева, Л.Л,БасоваскаяА,А., Биха И.В, Современноеерспективы совершенствоварешения задач клинической Изобретение относится к медицине и касается способа определения антигена методом иммуноферментного анализа (ИФА) и может быть использовано в диагностике заболеваний.Цель изобретения - повышение точности за счет повышения чувствительности анализа,П р и м е р 1. Определение 96 человека, Кроличью сыворотку к 90 человека пропускают через иммуносорбент, полученный из 90 и ВгСК-сефарозы, после отмывки колонки специфические антитела снимают 0,1 М глицин-НС буфером с рН 5,0, затем эту же колонку промывают этим же буфером с рН 4,0, рН 3,0 и наконец рН 2,3. Полученные при различных рН антитела диализуют против 0,1 М карбонат-бикарбонатного буфера рН 9,6, уравновешивают концентрации белка и наносят в ячейки полистирольных планшетов, после процесса адсорбции и отмывки сорбированные антитела проявляют 57) Использование: изобретение относится к медицине и может быть использовано в диагностике заболеваний. Цель - повышение точности способа за счет повышения чувствительности анализа. Сущность: антиген определяют иммуноферментным анализом с применением полистирольных планшетов с сорбированными на них аффинно выделенными антителами, Новизна заключается в том, что используют антитела, аффинно выделенные с иммуносорбента при рН 3-2,7 и имеющие константу равновесия 0,7 х 10 М, Зто позволяет повысить, 10чувствительность анализа в 4-6 раз,тииммуноглобулинас пероксидазой, кот Разведение конъюгами при длине волнавное 0,3, принимаение конъюгата.определение констает представление о ена с антителами, с та при различных р о формуле: ая концентрация ан рация антител при д вновесия;ая концентрация антигена, получено при выполнении овия - начальная концентВо должна быть значитель1763986 Таблица 1 Изучение эффинно выделенных антител к цб человека Таблица 2 равнительные данные чувствительности метода ИФА(определение цО человека при использовании антител с различной константой равновесия) но выше начальной концентрации антител АоКак видно из таблицы 1, антитела, снятые буферной системой при разных рН, обладают силой связывания с антигеном и разной адсорбционной способностью, наибольшей эдсорбционной способностью и авидностью обладают антитела, снятые с иммуносорбента при элюции буферной системой при рН 2,3-2,7.В табл.2 приводятся результаты изучения чувствительности метода ИФА определения д 6 человека при использовании специфических антител, снятых с иммуносорбента в виде смеси с помощью одной буферной системы 0,1 М глицин-НС рН 2,3 и с помощью нескольких буферных систем с различными рН. Представленные результаты свидетельствуют о повышении чувствительности метода в 4 раза по сравнению с прототипом при использовании антител с К=0,7 х 10П р и м е р 2. Определение сальмонеллезного Н антигена.Кроличью сыворотку к Нб-антигену пропускают через Нб-иммуносорбент на основе ВгСМ-сефарозы, все операции проводят аналогично примеру 1. Полученные результаты, представленные в табл.3, свидетельствуют о повышении чувствительности метода более 6 раз.П р и м е р 3. Определение сальмонеллезного Н-а антигена.5 Кроличью сыворотку к К-а антигену пропускают через иммуносорбент, состоящийиз Н-а антигена и ВгСМ-сефарозы, Дальнейшие операции проводят аналогично примеру 110 Полученные результаты представлены втаблице 4,Таким образом, результаты исследования показывают, что независимо от испОльзования антигена применение аффинных15 антител с константой равновесия не ниже0,8 0,02 х 10 позволяет определять антигенв количестве 1 нг,Формула изобретения 20 Способ определения антигена в биологической жидкости путем проведения иммуноферментного анализа на полистирольном планшете сорбированном аффинно выделенными антителами, о т л и ч а ю щ и й с я 25 тем, что, с целью повышения точности засчет повышения чувствительности способа, используют антитела, аффинно выделенные с иммуносорбента при рН 2,3-2,7 и имеющие константу равновесия 0,7 х 10 М ,1763986 Таблица 4зучение чувствительности метода ИФА - определение сальмонеллезного Н-а антигена Составитель Г. КрюкоРедактор Т. Куркова Техред М.Моргентал ктор Л. Фи каз 3454 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина Таблица 3 Изучение чувствительности метода ИФА - определение сальмонеллезного Нб-антигена при использовании антител с различной авидностью