Способ определения амидопирина в биологических жидкостях

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК й)5 0 01 й 33/4 И ПОСОБ ОПРЕ В БИОЛОГИЧ зобретение от но биохимии. я повышение самидопирина.еление амидоп 7,6 и длине во вительность сп1 мкг/мл. 3 та(54) С РИНА (57) И имен ляетс ления опред А.А.Пентюк, Н,Б.Л Мусин, В,Г.Илыка,2увстость остигается максим леОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ%42медицинский институт 2,111,1 (088.8)т а Апа 1,СЬеа.Асса, 1982,Изобретение относится к медицине,а именно к биохимии, и может быть использовано для определения амидопирина в.биологических жидкостях в присутствии его метаболита 4-.аминоантипирина (4-ААП).Целью изобретения является повышение специфичности способа определения амидопирина.Для выявления оптимальных условий . определения амидопирина изучено влияние реакции среды(рН), концентрации пероксидазы и пероксида водорода, определен максимум поглощения окрашенного продукта реакции и другие параметры метода.Изучено влияние реакции среды на выход продуктов окисления амидопирина и 4-ААП (табл 1).Иэ данных табл.1 видно, что при рН 7,2 - 7,6 4-ААП окрашенных продуктов практически не образует, в то время как амидопирин при этих значениях рН дает наибольшую интенсивность окрашивания.Определение максимум а поглощения продуктов окисления амидопирина (табл,2)проводили на спектрофотометре СФ.Как видно из данных табл.2, определение амидопирина следует проводить при Я 2 1691742 А ДЕЛЕНИЯ АМИДОПИЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ носится к медицине, а Целью изобретения явпецифичности опредеЭто достигается тем, что ирина проводят при рН лны А = 570 - 580 нм.особа 1,15 мкг/мл, точбл. 570 - 580 нм, когда д ум поглощенияВоспроизводимость способа опреде ния (табл.З) была оценена на серии из восьми опытов.Прямое определение амидопирина в биологической жидкости, в частности в моче, оказалось невозможным из-за мешающего влияния других компонентов мочи, поэтому была применена экстакция амидопирина из мочи хлороформом. Полученный хлороформный экстракт отделяли. упаривали на водяной бане при 40 - 60 С, сухой экстракт растворяли в дистиллированной воде и проводили определение с помощью пероксидазы. П р и м е р. Реактивы, Раствор пероксидазы из хрена в 0.1 М фосфатном буфере с концентрацией 10 ЕД/мл и рН 7,4. Пероксид водорода с концентрацией 4 мкмол ь/мл. Хлороформ,Ход определения. К 2 частям мочи (2 мл) прибавить 5 частей хлороформа (5 мл) и зкстрагировать в течение 10 мин в колбе с притертой пробкой, затем отцентрифугировать в течение 10 мин, отобрать хлороформный1691742 Таблица 1 Выход окрашенных продуктов окисления амидопирина и 4 - ААП в зависимости от рн среды.Продолжение табл 1 П р и м е ч а н и е: В пробе содержалось по 50 мкг амидоп или а 2 П р и м е ч а н и е: в пробе 50 м допирина,экстракт и упарить его на водяной бане при40 - 60 С.К сухому экстракту добавить 2 части дистиллированной воды (2 мл) и встряхивать 5мин до его растворения.В чистую пробирку внести 0,1 часть раствора пероксидазы из хрена в 0,1 М фосфатномбуфере(0,1 мл), прибавить 0,1 часть перокси, да водорода 0,1 мл) и 1 часть водного раствора пробы (1 мл), Оптическую плотностьопределяли через 2 мин при Я,=580 нм в кюветес длиной светового пути 1 см и объемом 0,4 мл,Количество амидопирина рассчитывалипо калибровочному графику,Определение амидопирина в крови,Реактивы аналогичны при определениив моче,Ход определения. К 1 мл плазмы прибавляли 5 мл хлороформа и экстрагировали в течение 10 мин в колбе с притертойпробкой, после чего центрифугировали 10мин при 3000 об/мин, отбирали хлороформный экстракт и упаривали на водяной банепри 40 - 60 С, К сухому остатку добавляли0,5 мл 0,1 М фосфатного буфера с рН 7,4встряхивали и прибавляли 0,1 мл раствора5 пероксидазы хрена и 0,1 мл перекиси водорода, оптическую плотность измеряли через2 мин при 1 = 580 нм в кювете в длинойсветового пути 1 см и объемом 0,4 мл. Количество амидопирина определяли по граду 10 ировочному графику,Чувствительность предлагаемогоспособа 1,15 мкг/мл, точность 1,0 мкг/мл,формула изобретенияСпособ определения амидопирина в15 биологических жидкостях путем его экстракции, окисления пероксидазой хрена испектрофотометрирования окрашенногопродукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью повышения специфичности способа,20 окисление амидопирина проводят при рН7,2 - 7,6, а спектрофотометрируют при длине волны 570 - 580 нм.1691742 Таблица 3 р и м е ч а н и е: Х - среднее арифметическое; 8 - средня квадратическая ошибка; Ч - коэффициен вариации. Составитель В,Митюшехред М,Моргентал эктор Ю,Середа Т Корректор И,Муск водственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 аз 3924 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ С 113035, Москва, Ж. Раушская наб., 4/5