Способ определения иммунологической блокады лимфоцитов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН О ЯО, 3/53 ЗОБРЕТЕ ТЕЛЬСТВ 14нский сН.Е. омато- емашко оЛеГлан годова йхс 1 са ге Чи 4, ч. 7, Рс-гез 0.оп,29 Р 6 Л дициО е- Еиммун Способ ляется следующим уще е ие относится к м к иммунологии и Изобретв частност казна с чеиия иммунного ено дл ека, ль и чв ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕ О ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТ ПРИ ГКНТ СССР ОПИСАН И(71) Московский медилогический институт(56) Рогпизе 1 с Ь., 7 есерйог Ноге аивчегшРоИа ю.сгоЬ.о 1, 19р. 479"484.(54) СПОСОБ ОЧЕСКОИ БЛО(57) Изобретене, в частноспредназначенологического с ПРЕДЕЛЕНИЯ ИЖ(УНКАЦИ ЛИИФОЦИТОВние относится кти к иммунологиидля определениятатуса человека. Це эобретения - повышение то ности определения в крови количест а иммунокомпетентных клеток, несущих Рс- -рецептор.оставленная цель достигается тем,4 что определение количества Рс -клеток проводят не только со свежевЫделенными лимфоцитами (при 4 С), но и с лимфоцитами, предварительно инкубированными при 37 С в течение 1 ч; увеличение показателя во второй группе по сравнению с контрольной первой группой означает наличие иммунологической блокады рецепторов лимфоцитов в исходном состоянии. изобретения - повышение точности оп ределения в крови количества иммунокомпетентных клеток, несущих Рсрецептор. Клетки крови подвергаютсяпроцедуре деблокирования рецепторовв процессе инкубации при 37 С в течение 60 мин, а определение клеток,присоединяющих агрегированный иммуноглобулин С, осуществляется как до,так и после процедуры. Последующеесопоставление этих данных позволяетделать вывод о наличии блокирующихсывороточных факторов и, следовательно, либо о дефиците рецепторов,либо об их блокаде. Способ целесообразно использовать как при клиническом, так и при поликлиническом обслдовании больных. образом.Из 10",20 мл венозной крови с антикоагулянтом выделяют лимфоциты по общепринятой методике, Концентрацию в забуференном физиопогическом растворе 3 ФР) отмытых 3 раза лимфоцитов доводят до 5-7 млн клеток/мл.По капле (0,1-0,2 мл) этой сус" пензии наносят на четыре покровных стекла, покрытых полимерной пленкой Ъормвар". Стекла помещают во влажную камеру. Первые два стекла инкубируют при 40 С 5-15 мин, чтобы клетки прикрепились, отмывают 2 раза в ЗФР с рН 7,2. Первое стекло (контроль, 4 С) окрашивают по известной методике меченными ФИТЦ антителами против 18 С человека и готовят препарат длямикро1557527 СЛ,. Пример После инкубации при 37 С в тече"оние 60 мин (контр. .37 С + агр 1 оС)в6,0+1,6 51,0+2,9р 0,001 25,0+1,7 25,3+1,9 р 0,05Количествоклеток, при"соединившихагр 1 С 0 45 скопирования. На второе наносят О,1.0,2 мл раствора агрегированного ЕНС(агрЕВС) концентрацией 150"250 мкг/млв ЗФР. АгрЕяС готовят по известнойметодике нагреванием при 63 С и ис"пользуют фракцию с константой седиментации 198. Второе стекло с нанесенным агрегатом инкубируют ве влажнойкамере при 4 С в течение 60 мин, отмы 10вают тщательно в ЗФР и окрашивают,как первое стекло,Третье и четвертое стекла с нанесенными каплями суспензии инкубируютпри 37 С 60 мин, тщательно отмываютЗФР. Третье стекло сразу окрашивают,как первое (контроль, 37 С), а начетвертое наносят агрЕНС и далее пос"тупают, как с вторым стеклом, Полу.ченные четыре препарата оценивают на 20люминесцентном микроскопе, определяяотносительное количество светящихсялимфоцитов (СЛ) . В каждом препаратепросчитывают не менее 3 раз по 100клеток и вычисляют среднее значение 25(СЛ)Результаты, полученные предлагае мым способом, на лифоцитах здоровыхи больных людей представлены в таблице, Способ поясняется примерами.П р и и е р 1. БольнаяЛ., поступила:в клинику в связи с возникновением бронхоспазма. У больной повышенное количество клеток, несущих Рс-р (45 ),но все они были заблокированы, т.е,не выполняли свою функцию. П р и м е р 2, Вольная П поступила в клинику с обострением инфекЦионно зависимой . бронхиальной астмы 40 тяжелого течения, гормонозависимой.У больной высокое количество клеток, несущих Рс-р но они также заблокиро-, ваны. Без инкубации(контр. 4 С + агрЕНС) П р и м е р 3. Больная Ц. Наблюдалась амбулаторно по поводу субфебри" литета. Количество клеток несущих Рс-р, нормальное, рецепторы функционально активньг.П р и м е р 4. Больная Ч. Обследована через год после успешного лечения инфекционно-аллергической бронхиальной астмы, Количество клеток, несущих Рс-р, нормальное, все они функционально. активны.Результаты, полученные на лимфоцитах здоровых людей, показали,что у здоровых лиц количество клеток, несущих Рс-р, сильно варьирует, но сами рецепторы находятся в активном состоянииУ тяжелых больных в состоянии обострения Рс-р активно экспрессиру" ются, но находятся в состоянии дисфункции. Для клинической практики важно контролировать формирование Функционального дефицита. Предлагаемый метод позволяет выявлять функциональный дефицит Рс-р при отсутствии истинного дефицита. Формула изобретения Способ определения иммунологической блокады лимфоцитов путем определения в крови количества клеток, несущих Рсрецепторы, с помощью аггрегированного иммуноглобулина С,.о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью повышения точности, параллель.ную пробу лимфоцитов перед определением дополнительно инкубируют прио37 С в течение 60 мин и при увеличении количества лимфоцитов, несущихРсрецепторы, по сравнению с контролем без инкубации определяют наличие иммунологической блокады,1557527 Продолжение таблицы СЛ Х Пример После инкубациипри 37 С в течение 60 мин (контр,37 С+ агр 18 С) Без инкубации(контр, 4 С + агрт 8 С) и П р и м е ч а н и е. 1. р - достоверность различия показателей в контроле и после добавленияагр 1 С. 2, Показатели даны в видек, +6. Составитель И, БашкаевРедактор Л, Веселовская Техред Л.Сердюкова Корректор В. Гирняк Заказ 76 Тираж 508 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб д. ц/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 11 ф 1-"1 ю 5 10 ф 9+1 ю 6 р 0,05 0 2,3+1,О 5,1+1,4 р(0,001 12,8 8,9+1,9 25,0+1,7 р(0,00 16,1