Штамм бактерий еnтеrовастеr cloacae, используемый в качестве тест-объекта для санитарно-бактериологических исследований

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН А 1 НИЯ ЛЬСТВ Н АВТО ФсЬеай ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ОПИСАНИЕ ИЗОБ(56) О совершенствовании лабораторного контроля эа соблюдением дезинфекционного режима на эпидемиологически важных объектах, Информационно-методическое письмо. Утв. ИЗРСФСР В 09/18-969, 09.09.80.(57) Изобретение относится к санитарной микробиологии. Цель изобретения - создание штамма бактерий, обладающего длительной выживаемостьюпо внешней среде, селективными штаммоспецифическими свойствами, чтопозволяет упростить его выделение,идентификацию и повысить точностьисследования. Штамм Е.с 1 оасае депо,801446153 1)4 С 12 Ь 1/20 С 12 Ц 1/О нирован в коллекции ГИСК им.Л.А.Та.расевича под номером 174, Штамм получен путем селекции и характеризуется длительной выживаемостью во внешней среде,(9-10 сут на поверхности полимеров и стекла) и селектив" ной штаммоспецифической устойчивостью к гексаметилентетрамину (ИИК 15000 мкг/мл) и налидиксовой кислоте (РИК 700 мкг/мл), контролйруемой хромосомными нетрансмиссивными генами. Указанные свойства штамма позволяют повысить точность моделирования передачи возбудителей кишечных инфекций с длительным выживанием во внешней среде (брюшной тиф, сельмо" неллезы) и упростить исследование, ввиду идентификации штамма сопряженно с его выделением на селективной среде с гексаметилентетрамином и налидиксовой кислотой. Штамм мо- -ЖФ жет быть использован для изучения и контроля санитарного режима эпиде" миологически важных объектов.Изобретение относится к микробиологии, в частности к санитарной микробиологии, и может быть использовано для изучения и контроля санитар"5 ного режима эпидемиологически важных объектов (продовольственно-пищевых, водоснабжения и др,), выявления источников, путейи факторов переда" чи возбудителей бактериальных кишеч ных инфекций.Целью изобретения является создание штамма бактерий, обладающего длительной выживаемостью во внешней среде и селективными штаммоспецифическими свойствами, что позволит уп.ростить его выделение, идентификацию и повысить точность исследования.Новый штамм ЕпТегоЬасгег с 1 оасае 18, обладающий хромосомной нетрвнс-.миссивной устойчивостью к гексамети лентетрамину и налидиксовой кислоте и длительной выживаемостью во внешней среде, получают из исходного штамма ЕпСегоЬасгег с 1 оасае, выделенного из кишечника здорового человека путем последовательной селекции на питательных средах с химиопрепаратв" ми вначале мутанта, услойчивого к гексаметилентетрамийу, а затем на его основе мутанта, дополнительно устойчивого к налидиксовой кислоте, Штамм ЕпгегоЬасТег с 1 оасае 18 сохра няет видовые свойства исходногоштамма ЕпйегоЬасСег с 1 оасае, в т,ч длительную выживаемость во внешней З 5 среде, и приобретает дополнительные селективные штвммоспецифическиесвойства - хромосомную нетрансиис" сивную устойчивость к гексаметилентетрамину и нвлидиксовой кислоте.40Штамм ЕпгегоЬасег с 1 оасае 18 депонирован в коллекции Государственного научно-исследовательского инсти. тута стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им, Л.А,Тарасевича нод номером 174.Штамм ЕпегоЪасСег с 1 оасае 18 ха" рактеризуется следующими признаками.Культурально-морФологические признаки. Клетки палочковидные, одиноч" 50 ные, размеры 1-2 х 0,2-0,3 мкм, грвмотрицательные, не имеют спор и капсул.На питательном агаре, питательном агаре с налидиксовой кислотой 55 (100 мкг/мл) и гексаметилентетрамином (5000 мкг/мл) через 18"24 ч выращивания в аэробных условиях при 37 С образует колонии диаметром 2 мм, круглые, выпуклые, сочные, сгладкими краями, мутные, светло,:ерые, На среде Эндо в тех же условиях растет в виде колоний диаметром 3-4 мм, бесцветных, гладких,мутных.Физиолого-биохимические свойства.Ферментирует с образованием кислотыи газа глюкозу, сахарозу, мальтозу,арабинозу, маннит, рамноэу, ксилоэу.Не ферментирует лактозу, иноэит. Образует ацетилметилкарбинол (реакцияФогеса-Проскауэра положительная),Не продуцирует индол и сероводород,Иочевину не расщепляетНе обладаетлизиндекарбоксилаэой, фенилаланинде.заминаэой и тринтофандеэаминазой.Утилиэирует цитрат натрия на средеСиммонса, не утилизирует ацетат нат.рия. Подвижен, Факультативный анаэроб,Непатогенен для человека,Выживает во внешней среде на поверхности изделий иэ полистирола втечение 9 сут, на поверхности изделий иэ стекла - 10 сут,Устойчив к гексаметилентетрамину(ИИК 15000 мкг/мп) и налидиксовойкислоте (МИК 700 мкг/мл). Гены устойчивости к указанным химио-препаратамимеют хромосомную локализацию и нетрансмиссивны путем конъюгации, Чув"ствителен к химиопрепаратамф ИИК,мкг/мл левомицетин 4, тетрациклин 8,рифампицин 1 б; стрептомицин 1; канамицин 1.П р и и е р. Использование штаммов ЕпгегоЬасгег с 1 оасае 18 и ЕзсЬегсЬа со 1 х И 17-ИК для санитарнобактериологического исследования сцелью оценки состояния санитарногорежима в столовой и выявление факторов передачи возбудителей бактериальных кишечных инфекций.В мясном цехе столовой наносятватным тампоном суспенэию (1 10 живых микробных тел в 1 мл) бактерийштамма ЕпгегоЬасгег с 1 оасае 18 наповерхность кусков сырого мяса, вовощном цехе наносят ватным тампономсуспензию (510 живых микробных телв 1 мл) бактерий штамма Е.со 11 И 17 ИК на сырье неочищенные овощи, Через4 и 24 ч делают смывы с рук персона"ла столовой, ручек дверей и объектов, подлежащих санитарно-бактериалогическому контролю (чистой. столоСоставитель Г.СмирноваРедактор Н,Гунько Техред Л.Олийнык Корректор М.Максимишинец Заказ 6706/30 Тираж 520 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 шаеае ааааа еве а ва ааее а а ш е аааваеаеПроизводственно-полиграфическое предприятие, г. ужгород, ул. Проектная, 4 э 14 вой и кухонной посуды, разделочных столов и др.). Тампонами,со смывами засевают в пробирках косячки со селективной средой для Е. с 1 оасае 18 (питательный агар с гексаметилентет. рамином 5000 мкг/мл и налидиксовой кислотой 100 мкг/мл) и селективной средой для Е.со 1 М 17-ЯК (среда ЗНДО с рифампицином 100 мкг/мл и налидиксовой кислотой 70 мкг/мл). Че-. рез 18-24 ч инкубации при 37 С выявляют и идентифицируют штаммы Е.с 1 оасае 18 и Е.со 1 М 17-КК по наличию роста бактерий на косячках селективной питательной среды, соответствующей штамму. Определяют процентное отношение выявленных загрязненных тест-культурамн объектов к числу обследованнь объектов, В данном исследован.:.и г смывах через 4 ч штамм Е.с 1 оасае 18 выделяют с 15 Е объектов и рук трех работников столовой, штамм Е.со 1 М 17-3 Ф : - с 203 объектов и рук пяти рабоников столо" вой. В смывах черех 24 ч штамм Е,со 18 выделяют с рук двух работников столовой, со стола и разделочных досок для сырого мяса, ручек двери, мясного цеха, штамм Е;со 1 д,М 17"ВК не выде.-. ляют. Полученные результаты указываее ют на роль сырого мяса и сырых ово" щей, как важного фактора передачи кишечной микрофлоры.Приготовление питательной среды для выделения и идентификации бактерий ЕпгегоЬасгег с 1 оасае 18. В 1 л воды вносят 35 г сухого питательного 461534агара из рыбного гидролизата, кипятят до полного. растворения, добавляют 5 г гексаметилентетрамина, 10 мл горячего раствора налидиксовой кислоты (готовят путем растворения 0,5 г невиграмона в 5 мл 1 М раствора ХаОН, добавления 45 мл дистиллированной воды и кипячения до полного растворения), перемешивают, разливают в стерильные чашки Петри или пробирки (по 4-5 мл с последующим скашиванием). Готовая среда сохраняет цвет исходного питательного агара, пригодна к использованию в течение 7 сутпри хранении от +4 до +8 С, На питательной среде обеспечивается рост только бактерий штамма Е.с 1 оасае 18, рост остальных видов и штаммов бактерий полностью подавляется.Чувствительность питательной среды для штамма Е.с 1 оасае 18,соответствует чувствительности исходного питательного агара.Еффективность использования штамма .ЕпегоЬасгег с 1 оасае 18 определяется комплексом его свойств: длительностью выживания во внешней среде, селективной штаммоспецифической устойчивостью к гексаметилентетрамину и налидиксовой кислоте, что позволяет упростить исследование и по"высить их точность.,формула изобретенияШтамм бактерий ЕпгегоЬасСег с 1 оааесае ГИСК В 174, используемый в качестве тест.-объекта для санитарно-, бактериологических исследований,