Способ пересадки ранних эмбрионов птиц

,1358 67/00, С 12 Х 5/00 за 4 А ПИСАНИ РЕТЕН ВТОРСНОМУ СВ ЕЛЬСТВ46аучно-исствая и Н. И. овательскии детельство СС 2 1 х 5/00, 1985 Экспериментал бий и птиц; ная полиАвтореф. и развития. ЕРЕСАДКИ Наука, ННИХ ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Украинский нинститут птицеводс(57) Изобретение относится к области экспериментальной эмбриологии, криобиологии и предназначено для приживления ранних эмбрионов (бластодисков, бластодермы) птиц к чужеродной желточной оболочке. Целью изобретения является повышение жизнеспособности эмбриона и упрощение способа. Для этого эмбрион отделяют от собственной желточной оболочки, выдерживая в солевом растворе, инкубируют в течение 10 - 20 мин в декальцинированном растворе, после чего пересаживают эмбрион эктодермой вниз на чужеродную желточную оболочку, уложенную на сухую ровную поверхность внутренней стороной вверх.2 табл.Изобретение относится к экспериментальной эмбриологии, криобиологии и предназначено для приживления ранних эмбрионов (бластодисков, бластодермы) птиц к чужеродной желточной оболочке,Целью изобретения является повышение жизнеспособности эмбриона и упрощение способа.Способ осуществляется следующим образом. Вскрывают предварительно проинкубированное в течение 12 - 42 ч яйцо, освобождают желток от белка. Желток помещают в чашку Петри или часовое стекло бластодиском вверх. Вокруг бластодиска накладывают кольцо из фильтровал ьной бумаги, затем в желток под бластодиск инъецируют физраствор в количестве до 5 мл. Это обеспечивает отмывку бластодиска с прилегающей желточной оболочкой от желточной массы, Затем обрезают желточную оболочку по наружному краю кольца из фильтровальной бумаги и, взяв пинцетом за край кольца, переносят препарат в чашку Петри с солевым раствором. В качестве солевого раствора используют известные смеси, например раствор Рингера, При выдержке препарата в солевом растворе достигается отделение блас тодиска от собственной желточной оболочки. Как правило, 30 - 60 минутной выдержки в солевом растворе достаточно для отслоения бластодиска, однако значительная часть эмбрионов отслаивается раньше указанного времени. В процессе выдержки споласкивают кольцо из фильтровальной бумаги в солевом растворе, приподымают и контролируют отслоение эмбриона визуально. Если бластодиск отслоился, добиваются его полного сползания с желточной оболочки в данный раствор, а желточную оболочку, оставшуюся на кольце из фильтровал ьной бумаги, удаляют. После этого бластодиск из солевого раствора штапелем переносят в другую чашку Петри с декальцинированным раствором, в качестве которого используют раствор Версена, В растворе Версена эмбрион инкубируют в течение 10 - 20 мин при комнатной температуре, что обеспечивает его прикрепление и приживление к чужеродной желточной оболочке.В течение времени, необходимого для инкубации эмбриона в растворе Версена, проводят подготовку чужеродной желточной оболочки к приему трансплантата. Для этого вскрывают яйцо, отделяют желток от белка, помещают желток бластодиском вниз в чашку Петри или другую чистую посуду. Затем накладывают на желток кольцо из фильтровальной бумаги и инъецируют в желток под желточную оболочку внутри кольца физраствор, После этого обрезают желточную оболочку по наружному краю кольца и за край кольца переносят и укладывают внутренней стороной вверх на сухуюровную поверхность, например на предметное стекло или на дно чашки Петри,После этого проинкубированный в течение 10 - 20 мин в растворе Версена эмбрион шпателем переносят на край подготвленной желточной оболочки эктодермой вниз.Затем осторожно наклоняют предметностекло, эмбрион сползает к центру желточной оболочки и одновременно удаляется раствор Версена, занесенный шпателем вместе с эмбрионом на край желточной оболочки. После этого препарат выдерживают еще несколько секунд для частичного испарения остатков влаги на препарате, а затем за край кольца из фильтровальной бумаги 15 переносят на питательную среду камеры длякультивирования.Граничные пределы инкубации в растворе Версена определены в результате опытов на ранних куриных эмбрионах, для чего использовали предварительно проинку бированные в течение 20 - 24 ч яйца итальянских куропатчатых кур.Экспериментальные данные представленыв табл, 1. 25 30 35 40 45 50 55 Как видно из данных табл. 1,10 - 25-минутная инкубация эмбрионов в растворе Версена обеспечивает полное (по всей окружности) или частичное прикрепление их к чужеродной желточной оболочке и способствует началу развития 60 - 80 эмбрионов от числа проинкубированных. Однако, если судить по основному показателю числу эмбрионов, достигших 12 - 13-й стадии развития, когда отчетливо видны ритмические сокращения сердца, то видно, что эмбрионы перед посадкой на чужеродную желточную оболочку следует инкубировать в растворе Версена в течение 10 - 20 мин, Причем 20-минутная инкубация эмбриона в растворе Версена является оптимальной,В табл. 2 представлены данные сравнительного испытания эффективности известного и предлагаемого способов пересадки ранних эмбрионов птиц.Так, при использовании предлагаемого способа 69,7 Я пересаженных на чужеродную желточную оболочку эмбрионов начинают развитие, в том числе 60,6 Я от числа пересаженных нормально развиваются и достигают 12 - 13-й стадии развития, когда отчетливо видны у каждого эмбриона ритмические сокращения сердца. При использовании известного способа, включающего механическое отделение эмбриона от собственной желточной оболочки и посадку без инкубации в растворе Версена на ангар или чужеродную желточную оболочку, только 30,4 эмбрионов имеют признаки начала развития, причем развитие идет с существенным замедлением темпов роста и с неправильной дифференцировкой сомитов, При этом эмбрионы погибают на 5 - 7-й стадиях развития.1358872 Таблица 1Ф ПродолжиПроннку- бировано Количестяо эмбрионов тельностьинкубаих 12 эмбрионо штостигш 3-й ст рикрепившихсяе менее чемоловяной окужности прикрепившихся по всей прикрепившихся менее чем поло виной окружнос ии, ми окружност вити шт 1 7. 7 7 о,5 зо,15 69 4,1,6 68 21,1 68,4 13 20,0 80,0 О,25 66 зз,з Табл особ пересадки з -достигших 1213-й стадии сего переажено,шт. ачавш вити звития шт 0 30,23 ИзвестныйПредлагаемый 46 69,7 4 6 Составитель И. ТарееваТехред И. Верес Корректор М.МТираж 628 Подписноекомитета СССР по делам изобретений и ота, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5ическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проек аксимишинец 1 тий 3Формула изобретенияСпособ пересадки ранних эмбрионов птиц, включающий отделение эмбриона от собственной желточной оболочки и трансплантацию его на подложку с последующей инкубацией, отличающийся тем, что, с целью повышения жизнеспособности эмбриона и упрощения способа, отделение эмбриона осуРедактор Л. ВеселовскаяЗаказ 5633/4ВНИИГ 1 И Государственного13035, МосквПроизводственно-полиграф ществляют перед трансплантацией путем выдерживания его в солевом растворе Рингера, после чего эмбрион инкубируют в течение 1 О - 20 мин в растворе Версена, трансплантацию эмбриона осуществляют эктодермой вниз, а в качестве подложки используют чужеродную жел точную оболочку, уложенную внутренней стороной вверх. неприкрепившихся начавших раэвитие оличество эмбрионов