Штамм вируса гепатита а, используемый для приготовления специфических диагностических препаратов

)ю 111 Лу ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНАВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Ьн мовысыноГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ(71) Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР(56) ТаЬог Е., Рцгц 11 К,МСегегу К.1. Ргипаге ап 1 шеге шойе 1 вапс 1 Тегей дпосц 1 а Еог где вгцйуой Ьцшап Иеран,1 гв А, Нера 1 г 1 в В,апд Хоп-А, Хоп-В ЬераГхг 1 в. 1.Вцй,Ргппао 1. 1983, В 12, р. 305-318,(54) ШТАММ ВИРУСА ГЕПАТИТА А, ИСПОЛЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ(57) Изобретение относится к областвирусологии и касается штамма вируса гепатита А, используемого дляприготовления специфических диагностических препаратов, Штамм вируса,гепатита А (ВГА) вьщелен из печеночной ткани яванской макаки, депонирован в государственной коллекции вирусов Института вирусологии ."им. Д,И.Ивановского под номером ГКВ 729. Штамм при введении яванским илибурым макакам вызывает гепатйт А,При экстракции печеночной ткани зараженных макак вьщеляют антиген, ко-торый по антигенным свойствам близоквирусу гепатита А, вызывающего заболевание людей. Полученный антигежет быть успешно использован дляявления специфических антител вротках крови больных гепатитом А.1 табл.формула изобретенияШтамм вируса гепатита А ГКВ В 729 (Всесоюзная коллекция вирусов Инсти 113283Изобретение относится к областивирусологии и касается получениядиагностических препаратов,Цель изобретения - выделение нового штамма вируса гепатита А, способного вызывать инфекцию гепатита Ана доступных видах обезьян и сопровождающуюся выделением вируса, используемого для специфическиой диагностики гепатита А,Штамм вируса гепатита А (ЯМ)выделен иэ печеночной ткани яванскоймакаки, спонтанно заболевшей гепатитом А после воздействия иммунодепрессантов.Штамм депонирован в государственной коллекции вирусов Института вирусологии им, Д,И,Ивановского под номером ГКВ.Штамм характеризуется следующимисвойствами: диаметр полных и пустыхвирусных частиц 27 нм, основная масса вирусных частиц имеет плавучуюплотность 1,34 г/см в градиентеплотности хлорида цезия и константуседиментации 1575 в градиенте плотности сахарозы. По электронно"микроскопическим радио и энзимо-иммунологическим данным штамм ЯМпо своимантигенным свойствам не отличаетсяот штаммов ВГА, выделенных от больныхгепатитом А, Печеночная ткань яванских и бурых макак, инфицированныхштаммом ВГА/ЯМ, накапливает вирусв количестве, достаточном для полу 35чения вирусного антигена и осуществления специфической диагностики гепатита А.П р и м е р 1. Использование виру"са гепатита А, полученного иэ печениобезьян, для диагностики гепатита А,Из инфицированной печени яванскихи бурых макак, зараженных ВГА (ЯМ),готовят экстракт (0,5 г ткани промы 45вают 0,1 М раствором фосфатно-солевого буфера (ФСБ) рН 7,2-7,4, гомогенизируют, добавляют 5,0 мл 0,1 М раствора ФСБ, вносят несколько стеклянныхбус и смесь встряхивают 15 мин, затем.0центрифугируют 30 мин, 3000 об/мин,переливают надосадочную жидкость впластиковые пробирки, осветляют центрифугированием 30 мин, 10000 об/мин,добавляют канамицин 0,5-1,0 мг/мл,который разводят в 0,1 М ФСБ 1:2-1:20и исследуют на .содержание антигенаВГА. Подбирают опы 7 ным путем оптимальное разведение экстракта и его в даль 7 б гнейшем используют в качестве антигена ВГА для выявления антител в иссле"дуемых сыворотках больных к ВГА класса М, титрования суммарных антителк укаэанному вирусу и в качестве положительного контроля при обследовании материалов с помощью. радио и энзимо-иммунологических методов. Параллельное исследование 514 сыворотокбольных и здоровых лиц на наличиеантител к ВГА с помощью ЗИМ при использовании экстракта печени .обезьян(зараженных штаммом ВГА) и экстрактафекальных проб людей, больных гепатитом А (содержащих частицы ВГА) показало 1003 совпадение результатов: иэ514 исследованных сывороток в 499 выявлены антитела к ВГА. Такое же пол"ное совпадение результатов полученопри титровании антител к ВГА в исследуемых сыворотках. Данные приведеныв таблице.Штамм может быть использован такжедля моделирования гепатита А.П р и м е р 2. Иэ печеночной ткани яванской макаки готовят суспензию,содержащую вирус гепатита А:0,5 г печеночной ткани 3-кратно промывают0,1 М раствором фосфатно-солевого буфера рН 7,2"7,4, гомогениэируют вкерамической ступке, добавляют 5 мл0,1 М раствора того же буфераи встряхивают с бусами в течение 14 мин нашуттель-аппарате, Затем гомогенатцентрифугируют 30 мин при 3000 об/мин,Надосадочную жидкость отбирают и ос"ветляют, Полученный материал (с добавкой канамицина 0,5-1,0 мг/мл) используют для заражения яванской илибурых макак, Заражение проводят внутривенным введением 1 мл 103-ногоэкстракта, Через 14"16 дней послезаражения обнаруживают характерныедля острого гепатита гистологическиеизменения печеночной ткани и накопление частиц ВГА в печеночных клетках,Использование штамма вируса гепатита А ГКВпозволяет получать вирусную массу для приготовления диаг"ностических препаратов с использованием доступного биообъекта, а такжеизучать в эксперименте данное заболевание,з 13283764тута вирусологии им, Д,И,Ивановского товления специфических диагностичесАМН СССР), используемый для приго- ких препаратов. личество сывороток с титром антител к ВГА лнче сыв ка нрйз ант а 42 4,32 5 5 4 5 04 . 84 32 8 Составитель А.МаныкинТехред А.Кравчук Корректор В.Гирня Редактор С.Патрушева аказ 3453/2 ное оизводственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектна Материалыиспольэованные длпостановкЗИМ Печеночвыйэкстрактобезьян(иэвест"ный) Количество сыворо"ток с антнтеламнк ВГА Тираж 499 Подпи НИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 13035, Москва, Ж, Раушскаянаб., д, 4